Самостоятельная работа студентов

Для проверки линейности следует брать не менее 5 экспериментальных точек. При этом наиболее правильно использовать отдельные навески и затем готовить из них растворы соответствующих концентраций.

На характер градуировочного графика и на линейность в значительной степени могут оказывать влияние условия выполнения анализа: количество реактивов, концентрации анализируемых растворов и др.

Полученные данные следует представлять в виде градуировочного графика с линией тренда, уравнения графика и величины коэффициента корреляции.

Задание 1. Изучить методику определения линейности количественного определения одного из ингредиентов лекарственного средства титриметрическим или спектрофотометрическим методами.

Задание 2. Провести определение линейности количественного определения одного из компонентов титриметрическим методом в модельной смеси 1. Для этого проводят 5-6 определений ингредиента в навесках с разными массами. Рассчитайте массу навесок лекарственного средства, чтобы на титрование было израсходовано не менее 1 мл и не более 20 мл титрованного раствора.

Проведите титрование и заполните таблицу 3.

Таблица 3 – Данные для построения градуировочного графика при использовании титриметрического метода

Навеска ( г или мл)	Объем титранта, мл

По результатам испытаний постройте градуировочный график зависимости объема титранта от навески. Рассчитайте уравнение градуировочного графика и коэффициент корреляции.

Задание 3. Проведите определение линейности методики количественного анализа ингредиента спектрофотометрическим методом.

Постройте градуировочный график согласно методике. Измерьте значение оптической плотности каждого раствора, результаты занесите в таблицу 4.

Таблица 4 – Результаты измерения оптической плотности

Концентрация (г/мл или %)	Оптическая плотность

По полученным данным постройте градуировочный график зависимости оптической плотности от концентрации. Рассчитайте уравнение градуировочного графика и коэффициент корреляции.

Задание 4. Сделайте заключение о линейности методик титриметрического и спектрофотометрического определения ингредиентов лекарственного средства.

2.4. Валидационная оценка методик титриметрического анализа по показателю «Правильность»

Цель работы: научиться оценивать методики титриметрического анализа по показателю «Правильность».

ИНФОРМАЦИОННЫЙ БЛОК

Правильностью аналитической методики называется степень близости экспериментальных результатов к истинному значению во всей области измерений. Главным фактором, определяющим правильность, является значение систематической погрешности.

Для оценки правильности методик количественного определения субстанции применимы следующие подходы:

a) применение аналитической методики к образцу с известной степенью чистоты, например к стандартному образцу;

b) сравнение результатов анализа, полученных с использованием валидируемой методики и арбитражного метода, правильность и прецизионность которого известны;

c) заключение о правильности можно сделать после того, как установлены прецизионность, линейность и специфичность.

Для оценки правильности методик количественного определения активного компонента в готовом лекарственном препарате применимы следующие подходы:

a) применение методики к искусственным (модельным) смесям, к которым были добавлены известные количества анализируемого вещества;

b) если невозможно получить образцы всех компонентов лекарственного препарата, возможно применение метода добавок или арбитражной методики, правильность которой доказана;

Далее приведен первый способ определения правильности с использованием модельной смеси.

Для тестирования методики на правильность готовятся три модельные смеси из разных навесок с точным содержанием каждого из компонентов, включая и вспомогательные вещества. Согласно рекомендациям ICH необходимо проанализировать не менее 9 образцов на 3 уровнях концентраций. Правильность методики устанавливается в указанном диапазоне ее применения. Для оценки полученных результатов наиболее простым и наглядным критерием служит открываемость (R), которая вычисляется по формуле:

При проведении анализа будут получены 9 значений открываемости.

Для более детальной оценки следует статистически обработать полученные значения R, рассчитав стандартное и относительное стандартное отклонения. Это наиболее простой способ (способ А).

Далее вычисляют величину стандартного отклонения (SD) и относительного стандартного отклонения (RSD):

Например, валидационной оценке была подвергнута методика количественного определения метронидазола в инфузионном растворе методом непосредственной спектрофотометрии. Полученные результаты установления правильности представлены в таблице 5.

Таблица 5 - Результаты установления правильности методики с использованием открываемости

№	Уровень	Взято метронидазола, г/100 мл	Найдено метронидазола, г/100 мл	R,%	Метрологические характеристики
1	1	0,2506	0,2509	100,12	SD=1,027 RSD=1,038%
2	1	0,2509	0,2512	100,12
3	1	0,2511	0,2505	99,76
4	2	0,5066	0,5011	98,91
5	2	0,5121	0,5122	100,02
6	2	0,4998	0,5000	100,04
7	3	0,7511	0,7509	99,97
8	3	0,7321	0,7328	100,09
9	3	0,7459	0,7457	99,97

Для того чтобы сделать вывод о полученных результатах, следует иметь ввиду, что для анализа субстанций с содержанием действующего вещества не менее 98%, значения правильности должны быть в пределах 99-101%. При анализе субстанций с нормой содержания действующего вещества менее 98%, в пределах 98-102%. Для лекарственных препаратов с различным содержанием определяемого компонента рекомендуются следующие интервалы правильности (таблица №6):

Таблица 6 – Оценка правильности в зависимости от концентрации активного компонента в анализируемом образце

Содержание аналита в образце, %	Открываемость, %
100	98 – 102
≥10	98 – 102
≥1	97 – 103
≥0,1	95 – 105
0,01	90 – 107
0,001	80 – 110
0,0001	80 – 110
0,00001	60 – 115
0,000001	40 – 120

Оценку правильности методики следует проводить по коэффициенту Стьюдента по формуле:

.

По ГФ XII рассчитанное значение коэффициента Стьюдента не должно быть более 2,31.