7.12.Таблетки рибоксина 0,2 валидационная оценка методик анализа рибоксина спектрофотометрическим методом

ВАРИАНТ 1. ПРИ ДЛИНЕ ВОЛНЫ 249 нм (максимум рибоксина)

ВАРИАНТ 2. При длине волны 260 нм.

Приготовить модельную смесь:

Рибоксина 0,2

Наполнителей 0,07

Изучить УФ-спектр рибоксина

Точную навеску (около 0,1 г) рибоксина помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, добавляют 50 мл воды очищенной, взбалтывают 15 минут и доводят водой до метки (раствор А). Раствор перемешивают и фильтруют, отбрасывая первые 15-20 мл фильтрата.

1 мл раствора А переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят водой до метки и перемешивают (раствор Б).

Изучают УФ-спектр раствора Б в области 210-285 нм. Раствор рибоксина должен иметь максимум при 249±2 нм.

ЛИНЕЙНОСТЬ

Построение градуировочного графика

В мерную колбу вместимостью 100 мл вносят точную навеску СО рибоксина (около 0,10 г), растворяют в воде и доводят водой до метки (раствор А).

В мерную колбу вместимостью 100 мл вносят последовательно 0,5; 1,0; 1,5; 2,0; 2,5 мл раствора А и доводят водой до метки. Получают растворы рибоксина с концентрацией 0,0005%, 0,001%, 0,0015%; 0,002%, 0,0025%.

Измеряют оптическую плотность каждого раствора на спектрофотометре при длине волны 249 нм (или 260 нм) в кювете с толщиной слоя 10 мм. Раствор сравнения – вода очищенная.

Строят градуировочный график зависимости оптической плотности от концентрации, рассчитывают уравнение градуировочного графика и коэффициент корреляции. Данные заносят в таблицу.

Таблица 50 – Зависимость оптической плотности от концентрации.

Объем раствора А, мл	0,5	1,0	1,5	2,0	2,5
Концентрация полученного раствора, %	0,0005	0,001	0,0015	0,002	0,0025
Оптическая плотность

ПРАВИЛЬНОСТЬ

Приготовить три раствора модельной смеси.

Таблица 51. Приготовление растворов модельных смесей.

Модельная смесь	№1	№2	№3
рибоксина	0,17	0,2	0,23
Наполнителей (натрия хлорида)	0,10	0,07	0,04
Общая масса, г	0,27	0,27	0,27
Воды очищ., мл	100	100	100

Раствор А₁. Точную навеску модельной смеси № 1 (около 0,27 г) помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в воде, доводят водой до метки. Раствор перемешивают.

Раствор А₂. Точную навеску модельной смеси № 2 (около 0,27 г) помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в воде, доводят водой до метки.

Раствор А₃. Точную навеску модельной смеси № 3 (около 0,27 г) помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в воде, доводят водой до метки.

Растворы Б₁, Б₂, Б₃. В три мерные колбы вместимостью 200 мл переносят по 1,0 мл раствора А₁ и доводят водой до метки.

Растворы Б₄, Б₅, Б₆. В три мерные колбы вместимостью 200 мл переносят по 1,0 мл раствора А₂ и доводят водой до метки.

Растворы Б₇, Б₈, Б₉. В три мерные колбы вместимостью 200 мл переносят по 1,0 мл раствора А₃ и доводят водой до метки.

Измеряют оптическую плотность каждого из 9 приготовленных растворов на спектрофотометре при длине волны 249 (или 260) нм в кювете с толщиной слоя 10 мм.

Параллельно измеряют оптическую плотность раствора СО рибоксина.

Приготовление раствора СО рибоксина.

Точную навеску рибоксина (около 0,10г) помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в воде, доводят водой до метки и перемешивают (раствор А).

В мерную колбу вместимостью 100 мл вносят 1,0 мл раствора А и доводят водой до метки (раствор Б).

1 мл раствора Б содержит 0,00001 г СО рибоксина.

Расчет содержания рибоксина в процентах (открываемость R) проводят по формуле:

,

где: А_х – оптическая плотность исследуемого раствора;

А_о – оптическая плотность раствора СО рибоксина;

а_х – масса навески исследуемого образца рибоксина;

0,00001 – содержание рибоксина в г в 1 мл раствора СО;

Р – средняя масса 1 таблетки, г (0,27 г);

0,2 – теоретическое содержание рибоксина в одной таблетке.

Результаты заносят в таблицу №___ и рассчитывают стандартное отклонение (SD) и относительное стандартное отклонение (RSD).

ПРЕЦИЗИОННОСТЬ

Приготовить раствор А₂ модельной смеси.

Растворы Б₁, Б₂, Б₃. В три мерные колбы вместимостью 200 мл помещают по 1,0 мл раствора А₂ и доводят водой до метки.

Растворы Б₄, Б₅, Б₆. В три мерные колбы вместимостью 200 мл помещают по 1,5 мл раствора А₂ и доводят водой до метки.

Растворы Б₇, Б₈, Б₉. В три мерные колбы вместимостью 200 мл помещают по 2,0 мл раствора А₂ и доводят водой до метки.

Измеряют оптическую плотность каждого из 9 приготовленных растворов на спектрофотометре при длине волны 249 нм (или 260нм) в кювете с толщиной слоя 10 мм.

Параллельно измеряют оптическую плотность раствора СО рибоксина.

Приготовление раствора СО рибоксина (см. выше).

Расчет содержания рибоксина в граммах в одной таблетке проводят по формуле:

,

где: А_х – оптическая плотность исследуемого раствора;

А_о – оптическая плотность раствора СО рибоксина;

а_х – масса навески исследуемого образца рибоксина;

0,00001 – содержание рибоксина в г в 1 мл раствора СО;

Р – средняя масса 1 таблетки, г;

V_a – объем аликвоты раствора Б, взятый для разведения (1,0,1,5,2,0), мл.

Результаты заносят в таблицу №___ и рассчитывают стандартное отклонение (SD) и относительное стандартное отклонение (RSD)

.