Валидационная оценка методики анализа кислоты борной алкалиметрическим методом

МЕТОДИКА КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ

К 1 мл раствора ЛС добавляют 2 мл свежепрокипячённой и охлаждённой воды, 10 мл глицерина, нейтрализованного по фенолфталеину. Титруют 0,1М раствором гидроксида натрия до розового окрашивания.

Написать уравнения химических реакций.

1 мл 0,1 М раствора гидроксида натрия соответствует 6,183 мг (0,006183 г) кислоты борной.

Рассчитать теоретический объем 0,1М раствора гидроксида натрия.

ЛИНЕЙНОСТЬ

Построение градуировочного графика

Точную навеску кислоты борной (около 2,0 г) помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в воде, доводят водой до метки и перемешивают (раствор А).

На титрование отмеривают последовательно 0,5 мл; 1,0 мл; 1,5 мл; 2,0 мл; 2,5 мл раствора А (0,01г; 0,02г; 0,03г; 0,04г; 0,05г.) и проводят определение по методике описанной для количественного определения.

Строят градуировочный график зависимости концентраций от объема титранта, рассчитывают уравнение градуировочного графика и коэффициент корреляции.

Данные заносят в таблицу.

Таблица 34. Результаты титрования.

V р-ра А (мл)	0,5	1	1,5	2	2,5
Взято в-ва , г	0,01	0,02	0,03	0,04	0,05
V 0,1М р-ра гидроксида натрия (мл)

ПРАВИЛЬНОСТЬ

Проводят 3 параллельных титрования на трех уровнях концентраций (9 определений), по методике количественного определения, отмеривая по 3 мл каждой из модельных смесей (А₁(модельная смесь 1)_, А₂(модельная смесь 2) А₃ (модельная смесь 3)).

Расчет содержания борной кислоты (г) проводят по формуле:

где: V- объем титранта (мл);

К- поправочный коэффициент;

Т- титр по определяемому веществу;

Р- общий объём ЛП;

а- навеска (мл).

Результаты заносят в таблицу №___ и рассчитывают стандартное отклонение (SD) и относительное стандартное отклонение (RSD).

ПРЕЦИЗИОННОСТЬ

Приготовить модельный раствор левомицетина с борной кислотой №2.

Определение №1.

Проводят 3 параллельных титрования, отмеривая каждый раз по 2 мл ЛП.

Определение №2.

Проводят 3 параллельных титрования, отмеривая каждый раз по 3 мл ЛП.

Определение №3.

Проводят 3 параллельных титрования, отмеривая каждый раз по 4 мл ЛП.

Расчет содержания натрия хлорида (г) проводят по формуле приведенной при определении правильности.

Результаты заносят в таблицу №___ и рассчитывают стандартное отклонение (SD) и относительное стандартное отклонение (RSD).

7.8. Раствора левомицетина 0,25% 10,0

Натрия хлорида 0,09

ВАЛИДАЦИОННАЯ ОЦЕНКА МЕТОДИКИ АНАЛИЗА

левомицетина СПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕСКИМ МЕТОДОМ

ЛИНЕЙНОСТЬ

Для установления максимума светопоглощения раствора левомицетина снимают спектр поглощения 0,002% раствора СО в 0,1 М растворе кислоты хлористоводородной. Приготовление раствора описано ниже при построении градуировочного графика. Максимум должен находиться при длине волны 278 нм.

Построение градуировочного графика

Точную навеску СО левомицетина (0,10 г) помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 15 мл 0,1 М раствора кислоты хлористоводородной, перемешивают, доводят тем же растворителем до метки, перемешивают (раствор А).

В мерные колбы вместимостью 100 мл последовательно вносят 1,0 мл; 2,0 мл; 3,0 мл; 4,0 мл; 5,0 мл раствора А и доводят 0,1 М раствором кислоты хлористоводородной до метки (получают 0,001%; 0,002%; 0,003%; 0,004% и 0,005% растворы).

Измеряют оптическую плотность каждого раствора на спектрофотометре при длине волны 278 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. Раствор сравнения – 0,1 М раствор кислоты хлористоводородной.

Данные заносят в таблицу.

Таблица 35. Результаты измерения оптической плотности.

V 0,1% р-ра (мл)	1	2	3	4	5
Конц. р-ра в %	0,001	0,002	0,003	0,004	0,005
Оптическая плотность А

Строят градуировочный график, рассчитывают уравнение градуировочного графика и коэффициент корреляции.

ПРАВИЛЬНОСТЬ

Приготовить три вида модельных смесей глазных капель с левомицетином и натрия хлоридом по прописям, приведенным в таблице.

Таблица 36. Приготовление модельных смесей глазных капель левомицетина с натрия хлоридом

Модельная смесь	1 (А1)	2 (А2)	3 (А3)
Навеска левомицетина (г)	0,20	0,25	0,30
Навеска натрия хлорида(г)	0,72	0,9	1,08
Воды очищенной	до 100 мл	до 100 мл	до 100 мл

Раствор модельной смеси А₁. Точные навески левомицетина – субстанции (около 0,2 г) и натрия хлорида ( около 0,72 г) помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 15 мл 0,1 М раствора кислоты хлористоводородной, перемешивают, доводят тем же растворителем до метки, перемешивают.

Раствор модельной смеси А₂. Точные навески левомицетина – субстанции (около 0,250г) и натрия хлорида (около 0,9 г) помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 15 мл 0,1 М раствора кислоты хлористоводородной, перемешивают, доводят тем же растворителем до метки, перемешивают.

Модельной смеси А₃. Точные навески левомицетина – субстанции (около 0,3 г) и натрия хлорида (около 1,08 г) помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 15 мл 0,1 М раствора кислоты хлористоводородной, перемешивают, доводят тем же растворителем до метки, перемешивают.

Растворы Б₁, Б₂, Б₃. В три мерные колбы вместимостью 100 мл переносят по 1,0 мл раствора модельной смеси А₁ и доводят 0,1 М раствором кислоты хлористоводородной до метки.

Растворы Б₄, Б₅, Б₆. В три мерные колбы вместимостью 100 мл переносят по 1,0 мл раствора модельной смеси А₂ и доводят 0,1 М раствором кислоты хлористоводородной до метки.

Растворы Б₇, Б₈, Б₉. В три мерные колбы вместимостью 100 мл переносят по 1,0 мл раствора модельной смеси А₃ и доводят 0,1 М раствором кислоты хлористоводородной до метки.

Измеряют оптическую плотность каждого из 9 приготовленных растворов на спектрофотометре при длине волны 278 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. Раствор сравнения – 0,1 М раствор кислоты хлористоводородной.

Параллельно измеряют оптическую плотность СО 0,002% раствора левомицетина.

Приготовление 0,002 %раствора СО левомицетина.

Точную навеску СО левомицетина (0,1г) помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в 0,1 М растворе кислоты хлористоводородной, доводят 0,1 М раствором кислоты хлористоводородной до метки и перемешивают (раствор А).

В мерную колбу вместимостью 100 мл вносят 2,0 мл раствора А и доводят 0,1 М раствором кислоты хлористоводородной до метки.

1 мл раствора Б содержит 0,00002 г СО левомицетина.

Расчет содержания левомицетина в процентах (открываемость) проводят по формуле:

(1) ,

где: А_х – оптическая плотность исследуемого раствора;

А_о – оптическая плотность раствора СО левомицетина;

а_х – масса навеска исследуемого образца левомицетина;

0,00002 – содержание левомицетина в г в 1 мл раствора СО.

Результаты заносят в таблицу №___ и рассчитывают стандартное отклонение (SD) и относительное стандартное отклонение (RSD).

ПРЕЦИЗИОННОСТЬ

Приготовить раствор модельной смеси А₂ таблеток левомицетина.

Готовят параллельно по три раствора.

Растворы Б₁, Б₂, Б₃. В три мерные колбы вместимостью 100 мл переносят по 0,5 мл раствора модельной смеси А₂ и доводят 0,1 М раствором кислоты хлористоводородной до метки.

Растворы Б₄, Б₅, Б₆. В три мерные колбы вместимостью 100 мл переносят по 1,0 мл раствора модельной смеси А₂ и доводят 0,1 М раствором кислоты хлористоводородной до метки.

Растворы Б₇, Б₈, Б₉. В три мерные колбы вместимостью 100 мл переносят по 1,5 мл раствора модельной смеси А₂ и доводят 0,1 М раствором кислоты хлористоводородной до метки.

Измеряют оптическую плотность каждого из 9 приготовленных растворов на спектрофотометре при длине волны 278 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. Раствор сравнения – 0,1 М раствор кислоты хлористоводородной.

Параллельно измеряют оптическую плотность СО 0,002% раствора левомицетина.

Расчет содержания левомицетина в г/мл проводят по формуле:

(2) ,

где: А_х – оптическая плотность исследуемого раствора;

А_о – оптическая плотность раствора СО левомицетина;

0,00002 – содержание рибофлавина в г в 1 мл раствора СО.

V_a – объем аликвоты раствора модельной смеси 2, взятый для разведения, мл.

Результаты заносят в таблицу №___ и рассчитывают стандартное отклонение (SD) и относительное стандартное отклонение (RSD).