5. Производство препаратов нормофлоры

5.1. Требования к микроорганизмам, используемым для создания препаратов пробиотиков

Для микроорганизмов, используемых при производстве пробиотиков, установлены определенные правила:

- они должны быть фено- и генотипически классифицируемыми;

- они не должны обладать патогенностъю;

- они должны быть изолированы из организма тех видов животных и человека, для которых они и будут предназначены;

- они должны обладать полезным воздействием на организм хозяина, подтвержденным лабораторными исследованиями и клиническими наблюдениями;

- при длительном использовании они не должны вызывать побочные эффекты;

- они должны обладать колонизационным потенциалом, то есть сохраняться в пищеварительном тракте до достижения максимального положительного действия (быть устойчивыми к низким значениям рН, желчным кислотам, антимикробным субстанциям, продуцируемым индигенной микрофлорой, хорошо адгезироваться к эпителию соответствующих слизистых оболочек);

- они должны обладать стабильными характеристиками как в клиническом, так и в технологическом плане;

- они должны обладать высокой скоростью роста и размножения в условиях, близким таковым в кишечном тракте, а при их культивировании in vitro для накопления биомассы следует создавать условия, максимально приближающие таковым микроокружения просвета кишечника.

Только доказавшие свою клиническую эффективность в плацебо-контролируемых исследованиях штаммы могут быть использованы для производства пробиотиков (табл. 3).

Принципы рационального конструирования микробных биопрепаратов, были сформулированы российскими исследователями еще в 1986-1990 годах. По мнению отечественных авторов при создании пробиотиков для лечебно-профилактического применения следует использовать единые приемы селекции производственных штаммов по критерию антагонистической активности в условиях культивирования смешанных популяций, близких к естественным экологическим. При отборе производственных штаммов преимущество следует отдавать умеренным кислотообразователям в расчете на продукцию отобранными штаммами истинных антибиотикосхожих субстанций. При этом необходимо обязательно учитывать генетические особенности этих штаммов, включая наличие у них внехромосомных факторов наследственности, а также их адгезивную способность на субстрате естественных биотопов.

Конструирование поликомпонентных пробиотиков следует проводить с учетом природного синергизма видов, путем оценки накопления биомассы отдельными культурами при совместном их выращивании. При разработке фармакопейных лекарственных форм микробных препаратов требуется учитывать принципы биофармации и потенцирующего, протективного или ингибирующего действия вспомогательных веществ. Для улучшения технологических и функциональных характеристик отобранных для производства пробиотиков и продуктов функционального питания стартерных культур молочнокислых бактерий, а также для конструирования новых штаммов с заданными свойствами используются различные приемы селекции, генетики и генетической инженерии этих микроорганизмов.

Таблица 3

Виды и штаммы микроорганизмов, входящих в состав пробиотиков

Род	Вид	Штамм
Lactobacillus	L. acidophilus	100аш; NK1; K3Ш24; Ер317/402
	L. rhamnosus	L. ramnosus GG
	L. plantarum	299 v; 8RA-3
	L. reuteri
	L. fermentum	KLD; 90-TC-4
	L. lactis
	L. casei	L. Shirota
	L. bulgaricum
Bifidobacterium	B. longum	B. infantis; BB536; B379M
	B. bifidum	791; ЛВА-3
	B. breve	79119; 79-88
	B. adolescentis	7513; MC-42; Г013
	B. animalis	B. lactis Bb 12
	B. infantis	Г 73-15; 79-43
Streptococcus	S. thermophylus
	S. cremoris,
	S. lactis
Enterococcus	E. faecium	Enterococcus SF68
	E. faecalis
Saccharomyces	S. boulardi
Bacillu	B. subtilis
Eschеrichia	E. coli

Необходимым условием массового производства препаратов эубиотиков является сохранение их стабильности в течение длительного времени. Бактерийные препараты, содержащие живые микроорганизмы, относятся к наименее стойким, их активность снижается за счет гибели клеток. Микроорганизмы, имея низкий уровень биологической организации, сохраняют жизнеспособность практически при полной потере воды, при этом в них обратимо замедляются или прекращаются обменные процессы. Для увеличения сроков жизнеспособности бактерий показана сублимационная сушка, проходящая в условиях низкой температуры и глубокого вакуума (незначительной концентрации кислорода).

По причине гигроскопичности укупорку сухих биопрепаратов проводят под вакуумом или в токе инертного газа.

К факторам, оказывающим влияние на выживаемость микроорганизмов в препаратах сухих эубиотиков при хранении, следует отнести:

• регламентированное содержание остаточной влаги;

• наличие защитных сред;

• хранение сухих препаратов в атмосфере, не содержащей кислород.

В целях защиты эубиотиков от кислой среды желудка на таблетиро-ванные и капсулированные формы наносят ацидорезистентные покрытия или проводят иммобилизацию бактерий на сорбенте.

Производство должно быть организовано в соотвествии с ГОСТ Р 52249-2004 «Правила производства и контроля качества лекарственных средств».