ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ

СРЕДНЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ

«МЕДИЦИНСКИЙ КОЛЛЕДЖ»

УПРАВЛЕНИЯ ДЕЛАМИ ПРЕЗИДЕНТА РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

Отчет учебно-производственной практики отделения «Лабораторная диагностика»

Студента: 2 курса, группы «2А» Низамутдиновой Ю.Б.

Ответственный руководитель (гл. м/с): Рутковская Н.И. Непосредственный руководитель (ст. м/с): Лысенко Е.Л. Методический руководитель (преподаватель колледжа): Башкирова О.Б.

Москва 2015

5 мая 2015г.

Общие сведения о больнице.

ФГБУ «Клиническая больница» Управления делами Президента РФ – многопрофильное медицинское учреждение, сформированное в советский перод.

Состоит больница из нескольких корпусов:

• Основной;

• Административный;

• Детский (дети от 3 до 18 лет);

• и отгороженная от остальной территории хозяйственная зона, в которую входят автобусный парк, патологическая анатомия, бактериологическая лаборатория, и др.

6 мая 2015г.

Структура главного корпуса.

Основной корпус также подразделяется на отделения:

• Анестезиология

• Урология (общая и андрология)

• Хирургия (и онкология)

• Гинекология

• Кардиология (два отделения)

• Кардиохирургия

• Колопроктология

• Гастроэнтерология

• Эндокринология

• Пульманология

• Неврология

• Травматология

• Окулисты

• VIP-терапия

• Лаборатория

• Экспресс лаборатория

7 мая 2015г.

Структура лаборатории.

Лаборатория (основная) состоит из участков:

• Общих клинических исследований

• Биохимии

• Серологии

• Группы крови

• Цитологии

• Моечной

8 мая 2015г.

Структура экспресс-лаборатории.

Экспресс-лаборатория состоит из приёмной, аппаратной и кабинета (там находятся холодильники с реактивами и недавними пробами; центрифуга, аппарат для тест-полоски мочи (Clinitec 100); компьютер с доступом к базе данных;хранится документация; также есть отгороженная подсобка – комната отдыха).

В аппаратной находятся анализаторы:

• KoneLab 20 (биохимический экспресс-аппарат)

• Gem Premier (аппарат для определения КЩ-баланса)

• EasyLite (Na/K) (определяет уровень электролитов в моче и сыворотке крови)

• Cormay Multi (фотоколориметр; в лаборатории используется как запасной б/х аппарат)

• Pentra 60

• Biosen C_line

Также там есть ещё две центрифуги и микроскоп.

12 мая 2015г.

Определение группы крови.

В этой лаборатории есть два метода для определения группы крови: стандартный (на планшетах), и в гелевых кассетах.

Стандартный: берётся планшет, в подписанные ячейки капаются, соответственно: анти-А, анти-В и анти-D (на резус) цоликлоны, а также перекрёст – кровь второй и третьей группы, для подтверждения А и В результатов (по капле), и цельную кровь из пробы. Результат определяется агглютинацией: если она есть – значит, тест положителен; нет – отрицателен.

Тест в гелевых кассетах: берётся гелевая кассета для определения группы крови, в первые четыре ячейки капается палзма (либо сыворотка), в оставшиеся две, соответственно надписям под ними, - перекрёст, А и В, и цельную кровь из пробы, предварительно смешанную с физраствором (1 мл ф/р на 25 мкл крови, по 50 мкл на ячейку). Затем кассета центрифугируется в специальной центрифуге, Grifols SPIN (центрифугирует в течение 9-ти минут), вытаскивается и смотрится результат. Он определяется по схожему принципу: агглютинация есть – значит, красный слой наверху; если её нет – то он опускается вниз. Сомнительные показатели в большинстве случаев следует понимать как положительные.

13 мая 2015г.

Тест крови на антитела.

Этот тест также проводится в гелевых кассетах: берётся гелевая кассета для определения положительности антител (принцип – непрямая проба Кумбса); в одну(!) ячейку закапывается цельная кровь из пробы, предварительно смешанная с физраствором (1 мл ф/р на 25 мкл крови, по 50 мкл на ячейку). Затем кассета нагревается в термостате (37^оС), ставится в центрифугу, вытаскивается и смотрится на предмет агглютинации (принцип тот же, что и с кассетами на ГК).

14 мая 2015г.

Тест на определение фенотипа крови.

Этот тест также проводится в гелевых кассетах: берётся гелевая кассета для определения фенотипа, в каждую ячейку закапывается цельная кровь из пробы, предварительно смешанная с физраствором (1 мл ф/р на 25 мкл крови, по 50 мкл на ячейку), и сразу ставится в центрифугу.

Принцип определения фенотипа тот же, что и в ГК, и в антителах.

15 мая 2015г.

Окраска цитологических мазков.

Используется окраска мазков по Романоскому: мазок фиксируется в эозин 5 минут, затем промывается под проточной водой и красится 30 минут метиленовым синим, смешанным с буфером в пропорциях 1:10 (стекло опускается полностью), либо 8 минут в чистом красителе (накапывается на предметное стекло). После окраски, стекло с мазком снова промывается проточной водой, и затем высушивается.

18 мая 2015г.

Аланинаминотрансфераза (АЛТ)

АЛТ- это фермент, который катализирует обратное превращение α-кетакислотв аминокислоты, путем переноса аминогрупп. Т.к. специфическая активность АЛТ в печени почти в 10 раз выше, чем миокарде и скелетной мускулатуре, повышенная ее активность в сыворотке рассматривается как индикатор поражения паренхимы печени. АЛТ такж является наиболее чувствительным индикатором при заболевании гепатобилиарной системы, (значение, превышающее в 50 раз норму, рассматривается как индикатор вирусного гепатита, острого нарушения печеночной перфузии и острым некрозом печени, вызывающего в первую очередь экзотоксинами.

Повышенный уровень АЛТ позволяет выявить гепатит и другие заболевания печени, до появления явных клинических признаков. Увеличенная АЛТ также наблюдается при циррозе и внепеченочном холестазе. Незначительное увеличение отмечается также при принятии алкоголя или некоторых лекарственных препаратов (пенициллин, салициллаты, опиаты).

19 мая 2015г.

АЛТ (ход исследования)

В лабораторию поступает биоматериал с направлением; в компьютер (программа ЛИС) вводится подтверждение направления; для пробирки печатается штрих-код.

При поступлении крови, пробирка с ней центрифугируется (в анализе используется сыворотка либо плазма) и на нее наклеивается соответствующий штрих-код.

При поступлении мочи - на пробирку наклеивается штрих-код. В нее наливается моча. Пробирка с биоматериалом ставится в кюветку и отправляется в аппарат OLYMPUS. На выведенном от него компьютере нажимается кнопка СТАРТ.

Аппарат начинает работу; в течение его работы, при возникновении проблем - их устранять, и анализировать полученные результаты (отмечать повышенные и пониженные результаты).

Метод исследования: АЛТ переносит аминогруппу с аланина на 2-оксоглюторат с образованием пирувата и глютамата. Добавление к реакционной смеси пиридоксаль-фосфата обеспечивает максимальную каталитическую активность АЛТ. Пируват вступает в реакцию с NADH, катализированную ЛДГ , продуцируя лактат и NAD+. Уменьшение значения абсорбции в следствии потребления NADH измеряется при 340 нм и прямо пропорционально активности АЛТ в пробе.

Материал: сыворотка или плазма.

Реагенты:

Буфер ТРИС, рН 7,15 (37⁰С)	100 ммоль/л
L-аланин	500 ммоль/л
2-оксоглутарат	12 ммоль/л
ЛДГ	≥1,8 кЕ/л
NADH	0,20 ммоль/л
Пиридоксальфосфат	0,1 ммоль/л
Консервант	100 ммоль/л

20 мая 2015г.

Альбумин (Albumin)

Альбумин представляет собой самую большую фракцию белков плазмы человека (53-66%). Его основной биологической функцией является транспортировка и хранение большого количества лигандов, поддержание онкотического давления, помимо этого, альбумин является источником эндогенных аминокислот. Он связывает и способствует переходу в раствор неполярных соединений, таких как билирубин плазмы и длинноцепочечные жирные кислоты, а также многочисленные лекарственные средства. Гиперальбуминемия – редкое явление, которое выявляется при сильном обезвоживании организма и выраженном венозном застое. Гипоальбуминемия может быть обусловлена:

Снижением синтеза альбумина в крови, например, при заболеваниях печени или при безбелковых диетах.

Увеличением катаболизма в результате повреждения или воспаления тканей. Снижением поступления экзогенных аминокислот, вследствие мальабсорбции или голодания. Потерей белка при нефротическом синдроме, энтеропатиях или ожогах. Нарушением его распределения, например, при асците. Выраженная гипоальбуминемия приводит к серьезному нарушению внутрисосудистого онкотического давления, вызывая развитие отеков. Анализ концентрации альбумина в крови очень важен для понимания и интерпретации уровней содержания кальция и магния, т.к. эти ионы связаны с данным белком. Поэтому, снижение концентрации альбумина в крови непосредственно снижает и уровень этих ионов.

21 мая 2015г.

Альбумин (ход исследования)

Описание: колориметрический фотометрический тест для количественного определения альбумины в сыворотке или плазме человека на анализаторе OLYMPUS.

Принцип определения: при реакции бромкрезолового зелёного с альбумином образуется окрашенный комплекс. Его абсорбция измеряется в биохроматической реакции при 600-800 нм и прямо пропорциональна концентрации альбумины в пробе.

Материал для анализа: сыворотка крови.

Реагенты:

Сукцинтарный буфер (рН 4.2)	100 ммоль/л
Бромкрезоловый зеленый	0,2 ммоль/л
Консерванты

Ход исследования:

В лабораторию поступает биоматериал с направлением; в компьютер (программа ЛИС) вводится подтверждение направления; для пробирки печатается штрих-код.

При поступлении крови, пробирка с ней центрифугируется (в анализе используется сыворотка либо плазма) и на нее наклеивается соответствующий штрих-код.

Пробирка с биоматериалом ставится в кюветку и отправляется в аппарат OLYMPUS. На выведенном от него компьютере нажимается кнопка СТАРТ.

Аппарат начинает работу; в течение его работы при возникновении проблем - их устранять, и анализировать полученные результаты (отмечать повышенные и пониженные результаты).

Референсные значения:

Сыворотка
Взрослые	35-52 г/л
Новорожденные (0-4 дня)	28-44 г/л

22 мая 2015г.

Аспартатаминотрансфераза (АСТ)

АСТ содержится во многих тканях, включая печень, миокард, скелетную мускулатуру, мозг, почки, лёгкие, поджелудочную железу,эритроциты и лейкоциты, причём, наибольшая её активность наблюдаетсяв печени и скелетной мускулатуре. Измерение АСТ показано при постановке диагноза, дифференциальной диагностике и мониторинге заболеваний гепатобилиарной системы, инфаркте миокарда и повреждениях скелетной мускулатуры. Также, уровень АСТ учитывается при подозрении на некроз печени (в 20-50 раз выше нормы), и любых повреждениях печени.

25 мая 2015г.

АСТ (ход исследования)

Назначение: Уф кинетическое определение аспартатаминотрансферазы в сыворотек и плазме человека на анализаторе OLYMPYS.

Принцип определения: АСТ катализирует трансаминирование аспарата и 2-оскоклютарат, при этом образуется L-глютамат и оксалоацетат. Добавление к реакционной смеси пиридоксаль-фосфата обеспечивает максимальную каталитическую активность АСТ. Оксалоацетат восстанавливается до L-малата в присутствии малатдегидрогеназы (МДГ), в то же время NADH превращается в NAD⁺. Пируват вступает в реакию с NADH, катализированную лактатдегидрогеназой (ЛДГ) с образованием лактата и NAD⁺. Снижение значений абсорбции, вследствие потребления NADH, измеряется до 340 нм и прямо пропорционально активности АСТ в пробе. Эндогенный пируват удаляется во время инкубационного периода.

Материал: сыворотка или плазма(ЭДТА, гепарин). В сыворотке и плазме АСТ стабильна в течение 7-ми дней при температуре хранения 2-8 ⁰С и в течение 3-х дней при 15-25 ⁰С. Пробы с гемолизом не следует использовать в исследованиях, т.к. активность АСТ в эритроцитах приблизительно в 15 раз выше, чем в плазме здорового человека.

Реагенты:

Буфер ТРИС, рН: 7,65 (37 ⁰С)	80 ммоль/л
L-аспарат	240 ммоль/л
2-оксоглутарат	12 ммоль/л
ЛДГ	≥0,9 кЕ/л
МДГ	≥0,6 кЕ/л
NADH	0,20 ммоль/л
Пиридоксальфосфат (Р-5-Р)	0,1 ммоль/л
Консервант

Ход исследования:

В лабораторию поступает биоматериал с направлением; в компьютер (программа ЛИС) вводится подтверждение направления; для пробирки печатается штрих-код.

При поступлении крови, пробирка с ней центрифугируется (в анализе используется сыворотка либо плазма) и на нее наклеивается соответствующий штрих-код.

Пробирка с биоматериалом ставится в кюветку и отправляется в аппарат OLYMPUS. На выведенном от него компьютере нажимается кнопка СТАРТ.

Аппарат начинает работу; в течение его работы при возникновении проблем - их устранять, и анализировать полученные результаты (отмечать повышенные и пониженные результаты).

Референсные значения:

Мужчины	<50 Е/л
Женщины	<35 Е/л
Новорождённые	25-75 Е/л
Дети	15-60 Е/л

26 мая 2015г.

Белок общий

Общий белок сыворотки - представляет собой сумму всех циркулирующих белков и является основой составной части крови. Определение общего белка используется в диагностике и лечении различных заболеваний, включая заболевания печени, почек, костного мозга, а также нарушение метаболизма и питания.

Материал: сыворотка или плазма (ЭДТА, гепарин). В течение 30 дней при 2-8 ⁰С и 6 дней при 15-25 ⁰С.

27 мая 2015 г.

Белок общий (ход исследования)

Реагенты:

Гидроксид Na Тартрат К Сульфат Mg Йодид К

200 ммоль/л 32 ммоль/л 18.8 ммоль/л 30 ммоль/л

Ход исследования:

В лабораторию поступает биоматериал с направлением; в компьютер (программа ЛИС) вводится подтверждение направления; для пробирки печатается штрих-код.

При поступлении крови, пробирка с ней центрифугируется (в анализе используется сыворотка либо плазма) и на нее наклеивается соответствующий штрих-код.

Пробирка с биоматериалом ставится в кюветку и отправляется в аппарат OLYMPUS. На выведенном от него компьютере нажимается кнопка СТАРТ.

Аппарат начинает работу; в течение его работы при возникновении проблем - их устранять, и анализировать полученные результаты (отмечать повышенные и пониженные результаты).

Метод:

Ионы меди в щелочной среде реагируют с белками, имеющими как минимум 2 пептидные связи, с образованием фиолетового комплекса. Абсорбция данного комплекса, измеренная при 540-680 нм , прямо пропорциональна концентрации белка в пробе.

Референсные значения:

Сыворотка
Взрослые	66-83 г/л
Новорожденные	41-63 г/л
Дети	57-80 г/л

28 мая 2015г.

Билирубин общий

80-85% образующегося за день билирубина производится из гемоглобина, высвобождавшегося из физиологически стареющих эритроцитов. Оставшиеся 15-20% являются результатом расщепления гем-содержащих белков, таких как миоглобин, цитохромы, каталазы и из костного мозга в результате неэффективного эритропоэза. Ряд заболеваний оказывает влияние на один и более этапов, вовлечённых в продукцию, потребление, хранение, метаболизм, и экскрецию билирубина. В зависимости от заболевания, в основном он приводит к гипербилирубинемии. Она же, в свою очередь, приводит к желтухе (включая гепатиты, гемолитические анемии, цирроз печени, холестаз). Встречается также хроническая гипербилирубинемия.

29 мая 2015г.

Билирубин общий (ход исследования)

Назначение: колориметрический фотометрический тест для количественного определения общего билирубина в сыворотке или плазме человека на анализаторе OLYMPUS.

Принцип определения: стабилизированная диазоновая соль, 3,5-дихлорфенилдиазон тетраборат (DPD), реагирует напрямую с билирубином, как в свободном состоянии, так и в связанном, в присутствии акцелератора, с образованием азобилирубина. Поглощение на 540 нм пропорционально концентрации общего билирубина в образце. Бланк пробы измеряется для снижения эндогенного влияния сыворотки.

Исследуемый материал: сыворотка или плазма (ЭДТА, гепарин). Билирубин стабилен в течение 7-ми дней при температуре 2-8 °С и в течение 1 дня при 15-25 °С. Не использовать пробы с гемолизом.

Ход исследования:

В лабораторию поступает биоматериал с направлением; в компьютер (программа ЛИС) вводится подтверждение направления; для пробирки печатается штрих-код.

При поступлении крови, пробирка с ней центрифугируется (в анализе используется сыворотка либо плазма) и на нее наклеивается соответствующий штрих-код.

Пробирка с биоматериалом ставится в кюветку и отправляется в аппарат OLYMPUS. На выведенном от него компьютере нажимается кнопка СТАРТ.

Аппарат начинает работу; в течение его работы при возникновении проблем - их устранять, и анализировать полученные результаты (отмечать повышенные и пониженные результаты).

Реагенты (концентрация в реакционной смеси):

Кофеин	2,1 ммоль/л
3,5-дихлорфенилдиазон тетраборат	0,35 ммоль/л
ПАВ (поверхностно активное вещество)
Консерванты

Референсные значения:

Сыворотка
Взрослые	5-21 мкмоль/л
дети
0-1 день	24-149 мкмоль/л
1-2 дня	58-197 мкмоль/л
2-5 дней	26-205 мкмоль/л