2. Основные методы исследования в-звена иммунитета в клинике.

Определение количества В-лимфоцитов. Это исследование проводится с помощью иммунофлюоресцентного метода и моноклональных антител к поверхностному рецептору В-лимфоцитов (СВ21+моноклональные антитела). До недавнего времени количество В-лимфоцитов определялось с помощью теста розеткообразования, который основан на том, что В-лимфоциты человека образуют розетки с мышиными эритроцитами. С помощью иммунофлюоресцентного метода, применяя антиглобу-линовые сыворотки, можно обнаружить и посчитать все лимфоциты, несущие им-муноглобулиновые детерминанты, т.е. В-лимфоциты.

Исследование функциональной активности В-лимфоцитов. Определяют по уровню пролиферативной активности этих лимфоцитов в присутствии митогена лаконоса (pookweed mitogen, PWM) или липополисахарида (LPS), которые могут вызвать поликлональную стимуляцию В-лимфоцитов, а также по способности В-лимфоцитов секретировать иммуноглобулины, которые выявляют в цитоплазме иммунофлюоре-сцентным методом с использованием антииммуноглобулиновых сывороток.

21 Билет

1) Возникновение иммунологии как науки. Инфекционная и неинфекционная иммунология.

Начало развития иммунологии относится к концу XVIII века и связано с именем Э.Дженнера, впервые применившего на основании лишь практических наблюдений впоследствии обоснованный теоретически метод вакцинации против натуральной оспы.

Открытый Э.Дженнером факт лег в основу дальнейших экспериментов Л.Пастера, завершившихся формулировкой принципа профилактики от инфекционных заболеваний - принцип иммунизации ослабленными или убитыми возбудителями.

Развитие иммунологии долгое время происходило в рамках микробиологической науки и касалось лишь изучения невосприимчивости организма к инфекционным агентам. На этом пути были достигнуты большие успехи в раскрытии причины ряда инфекционных заболеваний. Практическим достижением явилась разработка методов диагностики, профилактики и лечения инфекционных заболеваний в основном путем создания различного рода вакцин и сывороток. Многочисленные попытки выяснения механизмов, обусловливающих устойчивость организма против возбудителя, увенчались созданием двух теорий иммунитета - фагоцитарной, сформулированной в 1887 году И.И.Мечниковым, и гуморальной, выдвинутой в 1901 году П.Эрлихом.

Начало XX века - время возникновения другой ветви иммунологической науки - иммунологии неинфекционной. Как отправной точкой для развития инфекционной иммунологии явились наблюдения Э.Дженнера, так для неинфекционной - обнаружение Ж.Борде и Н.Чистовичем факта выработки антител в организме животного в ответ на введение не только микроорганизмов, а вообще чужеродных агентов. Свое утверждение и развитие неинфекционная иммунология получила в созданном И.И.Мечниковым в 1900 г. учении о цитотоксинах - антителах против определенных тканей организма, в открытии К.Ландштейнером в 1901 году антигенов человеческих эритроцитов.

Результаты работ П.Медавара (1946) расширили рамки и привлекли пристальное внимание к неинфекционной иммунологии, объяснив, что в основе процесса отторжения чужеродных тканей организмом лежат тоже иммунологические механизмы. И именно дальнейшее

расширение исследований в области трансплантационного иммунитета привлекло к открытию в 1953 году явления иммунологической толерантности - неотвечаемости организма на введенную чужеродную ткань.

Стало очевидным, что организм очень точно различает "свое" и "чужое", а в основе реакций, возникающих в нем в ответ на введение чужеродных агентов (вне зависимости от их природы), лежат одни и те же механизмы. Изучение совокупности процессов и механизмов, направленных на сохранение постоянства внутренней среды организма от инфекций и других чужеродных агентов - иммунитета, лежит в основе иммунологической науки (В.Д.Тимаков, 1973 г.).

Вторая половина ХХ века ознаменовалась бурным развитием иммунологии. Именно в эти годы была создана селекционно-клональная теория иммунитета, вскрыты закономерности функционирования различных звеньев лимфоидной системы как единой и целостной системы иммунитета. Одним из важнейших достижений последних лет явилось открытие двух независимо работающих механизмов в специфическом иммунном ответе. Один из них связан с так называемыми В-лимфоцитами, осуществляющими гуморальный ответ (синтез иммуноглобулинов), другой - с системой Т-лимфоцитов (тимусзависимых клеток), следствием деятельности которых является клеточный ответ (накопление высокочувствительных лимфоцитов). Особенно важным является получение доказательств существования взаимодействия этих двух видов лимфоцитов в иммунном ответе.

2) Основные функции Т-системы иммунитета. Антигензависимая и антигеннезависимая дифферинцировка Т-лифоцитов. Строение ТКР.

Основные функции Т-системы иммунитета:

1) Главная функция Т-системы связана с обеспечением клеточной формы иммуного ответа: Т-лимфоциты оказывают цитотоксическое действие на генетически чужеродные клетки (мутантные, опухолевые, и др). Кроме того Т-лимфоциты индуцируют фагоцитарный тип ответа на определенные разновидности антигенов.

2) Т-система играет важную роль в процессе распознавания большинства антигенов и в индукции как клеточного, так и гуморального иммунного ответа.

3) Играет главную роль в регуляции иммунного ответа. Главные Т-хелпер и Т-супрессор.

4) Участвует в формировании и поддержании иммунологической толерантности-спец. Иммунологическая ареактивность.

5) Функция иммунологической памяти

Антигензависимая и антигеннезависимая дифферинцировка Т-лифоцитов.

Антигеннезависимая дифф. Протекает в тимусе, она включает: проникновение предшественников Т-лимфоцитов в тимус, пролиферация тимоцитов, формирование антигенраспознающих рецепторов, положительную и отрицательную селекцию клонов Т-лимфоцитов,формирование различных субпопуляции Т-лимфоцитов.

Антигензависимая дифф. Вышедшие из тимуса функционально незрелые лимфоциты встречаясь с соответсвующим антигеном, распознают его в кооперации с антигенпредставляющими клетками и получив ряд необходимых стимулов, размножаются и дифференцируются в зрелые эффекторные Тлимфоциты.

АГнезависимая дифф. В капсулярную зону тимуса заходят пТ с рецептором СД44, пройдя в кору приобретают они СД2, 3, 4, и ТКР, тут же в этой зоне они подвергаются положительной селекции, некоторые погибают, но некоторые проходят в медуллярную зону, здесь идет взаимодействие с макрофагами и пТ они подвергаются отриццательной селекции идет апоптоз за счет того что срабатывает только один сигнал(чтобы апоптоза не было нужен 2 сигнал) и еще слабые механизмы рецептора Bcl-2 Bcl-XL ведут их к гибел. И только оставяшаяся часть клеток выходит из тимуса наивными лимфоцитами в тимусзависимые зоны перефирических органов иммуной системы.

АГзависимая дифф.

После выхода из тимуса они стречаются на перефирии с селезенкой, регионарными лимфоузлами. Когда АГ попадает в организм их встречает макрофаг,ДК и В-лимфоцит. Вместе с МНС 1 и2 кл они представялют АГ тоесть его эпитоп Т-лимфоцитам. Идет примирование Тлимфоцитов. Первый сигналя получают от ТКР и МНС 1 или 2 кл, а второй сигнал от ИЛ-1, корецептора В-7 АПК, и белка СД28 т-лимфоцита. Те кто не получил погибают. Те кто выжил созревают и могут синтезировать ИЛ-2. А ИЛ-2 стимулирует размножение популяции Т-лимфоцитов. Они становятся зрелыми и могут самостояетльно отвечать на АГ. Часть клеток идут на функцию памяти клеточного иммунитета.

Строение ТКР

Это гетеродимер, состоит из двух полипептидных цепей. Там ковалентная связь. Каждая цепь имеет V вариабельный домен(контакт с АГ) и С постоянный домен. Похож на иммуноглобулины, только ТКР- одновалентнен а имуноглобулины – двухвалент. 2 типа ТКР : 1) гамма и дельта цепи но таких клеток мало всего 5% а вот много 2) альфа бетта цепи их дофига в организме.

3) Дифференцировочные антигены.

На лимфоцитах открыт большой ряд структур, определяющих функциональные различия между лимфоцитами и дающих возможность идентифицировать функционально различные субпопуляции Т- и В- клеток. Эти молекулы, расположенные на поверхностной мембране иммунокомпетентных клеток, названы дифференцировочными антигенами. Дифференцировочные антигены появляются на цитоплазматической мембране клеток в процессе их морфологической дифференцировки. Они маркируют лимфоциты различной степени зрелости. Реально должна существовать возможность выявления дифференцировочных антигенов (маркеров лимфоцитов) с помощью специфических антител. Эта задача решается с помощью получения моноклональных антител, которые реагируют лишь с одним антигеном клеточной мембраны и сгруппированных в кластеры. Гибридонная технология, разработанная Келером и Милштейном в 1975 году, позволила получить большое количество моноклональных антител к поверхностным антигенам лейкоцитов человека. С целью их классификации на международной конференции в Париже в 1982 году была создана единая номенклатура, согласно которой группы антител, обладающих сходными связывающими способностями и распределением в тканях, получили названия кластеров дифференцировки (cluster of differentiation). В дальнейшем, термином CD, стал обозначаться дискретный антиген на мембране клетки, который идентифицируется двумя и более моноклональными антителами.

 CD номенклатура, представляет собой хронологически выстроенный список, в котором порядковый номер молекулы в основном характеризует время ее идентификации. Отбор и классификация новых кластеров проходит в рамках номенклатурных комитетов ВОЗ и международного союза иммунологических обществ. Регистрация присвоения соответствующих номеров кластерам, происходит на международных рабочих совещаниях по дифференцировочным антигенам человека.

Антигены Т-лимфоцитов человека .

CD3 –экспрессируются на тимоцитах поздней стадии дифференцировки и практически на всех периферических Т-лимфоцитах. Антитела к антигену оказывают митогенное действие на покоящееся  Т-лимфоцитах, индуцируют клональную пролиферацию и секрецию иммуноглобулинов В- лифоцитами,    индуцируют секрецию цитокинов( ИЛ 2,интерферон,КСФ).

CD4- маркирует Т-хелперы. Наряду с этим отдельные клоны Т-хелперов 

оказывают цитотоксическое действие на клетки-мишени с мембранными антигенамиHLA II класса. Особое значение имеет факт связывания молекулой CD4 оболочечных белков вируса СПИД, что в результате эндоцитоза приводит к проникновению вируса внутрь субпопуляции Т- хелперов.

CD5- антиген маркирует цитотоксические(супрессорные) Т- лимфоциты. Присутствует на всех зрелых Т клетках. К сожалению маркер экспрессируется на определенных стадиях онтогенеза В- клеток. Довольно часто выявляется на клетках больных с В- клеточным типом хронического лимфолейкоза.

CD8 –лимфоциты перефирической крови и тимоциты несут разные формы антигенаCD 8 . Антиген маркирует цитотоксические ( супрессорные) Т-лимфоциты, распознающие антигеныHLA I класса, а отдельные их клоны распознают антигены  HLA II  класса.

                    Антигены В- лимфоцитов человека.

CD 20 -экспрессируются практически на всех  В - лимфоцитах. Предполагается, что он относится к категории рецепторных структур, воспринимающих 2 сигнал, необходимый для индукции пролиферации В - клеток, или является мостиком для передачи индуцирующего пролиферацию сигнала  в цитоплазму клеток.

CD19- Присутствует на всех периферических В клетках, а также на предшественниках В- клеток в костном мозге. Антиген является самым ранним маркером позволяющим отнести лимфоцит  к В- клеточному ряду.

CD 10 -Антиген ассоциирован с острым  лимфолейкозом. Он четко выражен  на  пре- В клетках. Имеет значение для идентификации ни  Т /ни В лейкозов.