15. Методы определения групп крови.

Простая реакция

Принадлежность группы крови проводится при комнатной температуре: +15..25°C. На маркированной тарелке белого цвета записывается фамилия лица, у которого производится определение. Затем на эту же тарелку наносится по 2 капли стандартных сывороток (каждая сыворотка наносится своей пипеткой) групп Oαβ(I), Aβ(II), Bα(III) двух серий (расстояние между каплями не менее 5 см).

Справа от капель сывороток помещаются капля исследуемой крови, которая должна быть в 5-10 раз меньше капель сывороток.

Кровь перемешивают с сыворотками. Делают это стеклянной палочкой или одним и тем же углом предметного стекла. После каждого перемешивания палочка (стекло) промывается в воде и вытирается насухо.

За ходом реакции наблюдают в течение 5 минут, периодически покачивая тарелку.

В те капли, где к 3-й минуте наблюдения произошла агглютинация, вводят по 1 капле физраствора (чтобы дифференцировать псевдоагглютинацию), после чего еще наблюдают 2 минуты.

Результат оценивается по наличию агглютинации по истечении 5 минут наблюдения:

• кровь Oαβ(I) группы - со стандартными сыворотками агглютинации не наступило;

• кровь Aβ(II) группы - агглютинация наступила с сывороткой Oαβ(I) и Bα(III), и не наступила с сывороткой Aβ(II);

• кровь Bα(III) группы - агглютинация наступила с сывороткой Oαβ(I) и Aβ(II), и не наступила с сывороткой Bα(III);

• наличие агглютинации со всеми стандартными сыворотками еще не позволяет отнести кровь к ABO(IV) группе, т.к. возможна панагглютинация. В таком случае на тарелку наносится 2 капли стандартной сыворотки ABO(IV) группы и добавляется к ним капля исследуемой крови - если через 5 минут агглютинации не произошло, то кровь относят к ABO(IV) группе.

Двойная реакция

Кровь для исследования берется и вены в объеме 5 мл в чистую сухую пробирку без добавления цитрата, чтобы можно было получить отдельно сыворотку и эритроциты.

Кроме стандартных сывороток берутся стандартные эритроциты групп, которые готовятся в специальных учреждениях службы крови.

Тарелка делится на две части горизонтальной линией. В верхней части ведется исследование стандартными сыворотками с исследуемыми эритроцитами; в нижней части - стандартными эритроцитами с исследуемой сывороткой.

По истечении 5 минут производится оценка и делается заключение о группе крови.

Определение групп крови моноклинальными антителами

Моноклинальные антитела (ABO-титрующие: цоликлоны анти-А и анти-В) получаются при помощи генной инженерии. Их готовят в промышленных масштабах из крови стерильных мышей, поэтому исключается заражение гепатитом или СПИДом. Цоликлон анти-А окрашивается в голубой цвет; анти-В - в розовый.

Цоликлоны наносятся на планшет одной большой каплей (0,1 мл) под соответствующими надписями: анти-А, анти-В. Рядом наносится по одной маленькой (0,01 мл) капле исследуемой крови. После смешивания реагентов и крови реакцию агглютинации наблюдают в течение 2,5 минут.

Оценка результатов:

• кровь Oαβ(I) группы - агглютинации нет ни с цоликлоном анти-A, ни с анти-B (эритроциты не содержат антигенов A и В);

• кровь Aβ(II) группы - агглютинация произошла только с цоликлоном анти-A (эритроциты содержат только антиген A);

• кровь Bα(III) группы - агглютинация произошла только с цоликлоном анти-B (эритроциты содержат только антиген B);

• кровь ABO(IV) - агглютинация наблюдается с обеими цоликлонами (эритроциты содержат оба антигена). В этом случае производится контрольное исследование дабы исключить аутоагглютинацию. Одна капля (0,1 мл) изотонического раствора хлорида натрия смешивается с каплей (0,01 мл) исследуемой крови - реакция агглютинации должна отсутствовать.