16.Газометрический метод в определении бжу

Газометрический метод - метод, основанный на определении объема газа, образовавшегося в результате химической реакции.

определения мочевины основаны на окислении мочевины гипобромитом натрия в щелочной среде. При этом мочевина подвергается окислению. В результате реакции образуются азот, углекислый газ, бромит натрия и вода. Углекислота поглощается раствором, а объем газообразного азота измеряется с помощью специального аппарата. Наиболее удобно для практических целей проводить определение мочевины в аппарате Бородина.

Недостатком этой реакции являются ее низкие специфичность и точность, так как гипобромит натрия реагирует не только с мочевиной, но и с другими соединениями, содержащими аминогруппы. Методы этой группы неточны, плохо воспроизводимы и неудобны при серийной работе, чувствительность их низкая. Кроме того, бром характеризуется высокой токсичностью.

В связи с вышеперечисленными недостатками газометрические методы определения мочевины в настоящее время практически не применяются в клинико-диагностических лабораториях.

Ряд недостатков: техника взятия порций крови, их исследования сложны, получаемые результаты дают представление о степени насыщения крови кислородом лишь в один определенный момент времени, повторные пункции, особенно артерии, затруднительны.

17.Расчетные методы в определении бжу

наиболее часто используется метод определения интегрированного индекса незаменимых аминокислот (ИНАК). Индекс рассчитывается как среднее геометрическое отношение концентраций всех незаменимых аминокислот в исследуемом белке к концентрациям тех же аминокислот в эталоне (в %).

Референсный метод определения ХС ЛПНП является многостадийным:

1) ультрацентрифугирование;

2) выделение донной фракции и прецитипация в ней ЛП

3) определение концентрации ХС в донной фракции и супернатанте референсным методом для определения общего ХС

4) вычисление ХС ЛПНП как разности для значений ХС в донной фракции и ХС ЛПВП.

ЛПВП: на основе ферментативных методов определения холестерина после осаждения преципитатов ХС-ЛПНП и ХС-ЛПОНП, образующихся под влиянием осадителей. Затем, на основании определения общего холестерина (ХС), общих триглицеридов (ТГ) и ХС-ЛПВП по формуле Фридвальда рассчитывается ХС-ЛПНП.

Определение белка по методу Кьельдаля. Метод основан на сжигании органических компонентов пробы молока в колбе Кьельдаля в присутствии серной кислоты

18.Электрофоретический метод в определении бжу

Электрофорез — это процесс направленного движения частиц, диспергированных в жидкости в постоянном электрическом поле.

Методы электрофореза подразделяются на два типа:

• Метод свободно движущихся границ (фронтальный электрофорез). Был придуман Тизелиусом

• Зональный электрофорез. Нуждается в носителе, который необходим для удержания стабильности электрофоретических зон, легко разрушаемых под влиянием тепловой конвенции и разницы в относительной плотности буферного и белкового растворов. Разделяется на:

• Электрофорез на бумаге. При использовании этого метода разделение белка зависит только от величины его заряда. В щелочном растворе белки делятся на 5-6 фракций. Занимает от 6 до 18 часов. Имеет ряд недостатков: при высушивании бумажных лент в сушильном шкафу повышение температуры увеличивает адсорбцию краски альбуминами, которые больше связывают её, чем глобулины.

• Электрофорез в крахмальном геле. Описан в 1955 году Смитисом. Более точный, так как адсорбционные явления выражены меньше. Ориентированы на молекулярную массу и плотность белка. Длительность сокращается до 4 часов. Фракций от 8 до 10. Недостатки: сложность приготовления однородной структуры геля, гидролиз крахмала и сборка прибора.

• Электрофорез в агаровом геле. Удобный метод, так как: белки в агаровом геле мигрируют так же, как и при свободном электрофорезе; большая разрешающая способность; белки хорошо окрашены; прозрачность агарового слоя облегчает ФЭК определение концентрации.

• Электрофорез в акриламидном геле