13.Хроматографический метод в определении бжу

Хроматография – это метод разделения и определения веществ, основанный на распределении компонентов между двумя фазами – подвижной и неподвижной. Неподвижной (стационарной) фазой служит твердое пористое вещество (часто его называют сорбентом) или пленка жидкости, нанесенная на твердое вещество. Подвижная фаза представляет собой жидкость или газ, протекающий через неподвижную фазу, иногда под давлением. Компоненты анализируемой смеси (сорбаты) вместе с подвижной фазой передвигаются вдоль стационарной фазы. Ее обычно помещают в стеклянную или металлическую трубку, называемую колонкой. В зависимости от силы взаимодействия с поверхностью сорбента компоненты будут перемещаться вдоль колонки с разной скоростью.

По агрегатному состоянию фаз

• Газовая; Газо-жидкостная; Газо-твёрдофазная; Жидкостная; Жидкостно-твёрдофазная; Жидкостно-гелевая; Сверхкритическая флюидная

По механизму взаимодействия

• Распределительная; Ионообменная; Адсорбционная; Эксклюзионная; Аффинная; Осадочная

По цели проведения

• Аналитическая; Полупрепаративная; Препаративна; Промышленная

Липиды и ЖК определяют методом тонкослойной хроматографии: Для хроматографирования высших жирных кислот и их производных применяют незакрепленный слой силикагеля и окиси алюминия, а также слой силикагель-гипс. Колоночный способ хроматографирования используется с целью препаративного разделения.

Газожидкостная хроматография: Для анализа используют не сами жирные кислоты, а их производные – метиловые эфиры.

Белки и углеводы этим методом определяются редко

14.Нефелометрический метод в определении бжу

Нефелометрия — метод исследования и анализа вещества по интенсивности светового потока, рассеиваемого взвешенными частицами данного вещества.

Суть метода: Интенсивность рассеянного светового потока зависит от множества факторов, в частности от концентрации частиц в анализируемой пробе. Большое значение при нефелометрии имеет объём частиц, рассеивающих свет. Важное требование к реакциям, применяемым при нефелометрии, заключается в том, что продукт реакции должен быть практически нерастворим и представлять собой суспензию (взвесь). Для удержания твёрдых частиц во взвешенном состоянии применяются различные стабилизаторы (например, желатин), предотвращающие коагуляцию частиц.

Реализация процесса. Для измерения интенсивности рассеянного света используются специальные приборы — нефелометры. Их действие основано на уравнивании двух световых потоков: одного от рассеивающей взвеси, другого от матового или молочного стеклянного рассеивателя прибора. Один из вариантов нефелометрии — нефелометрическое титрование, в котором раствор анализируемого вещества титруют раствором осадителя.

15.Преципитационный метод в определении бжу

основаны на снижении растворимости белков и образовании суспензии взвешенных частиц под воздействием различных агентов. О содержании белка в исследуемой пробе судят либо по интенсивности светорассеяния (нефелометрический метод), определяемого числом светорассеивающих частиц, либо по ослаблению светового потока образовавшейся суспензией (турбидиметрический метод).

Преципитация бывает:

• В геле, когда в прозрачной гелеобразной среде создан градиент концентрации обоих компонентов. В том месте, где их содержание эквивалентно выпадающего в осадок (видна невооружённым глазом) её форма, положения свидетельствует о состоянии и концентрации антигена.

• Радиальная диффузия по Манчини. В чашке Петри гель припитывают антителами, вырезают лунки и в них помещают исследуемый раствор.

• Двойная иммунодиффузия по Оухтерлони. Раствор антител вносят в специальные лунки в геле, рядом с лункой, содержащей антитела. Они диффундируют навстречу друг другу, создавая концентрацию антиген-антитело.

• Ракетный электрофорез. Пластинку с гелем предварительно пропитывают антителами, а в лунку помещают исследуемую жидкость. Антитела перемещаются под действием электрического поля.

• Классический иммуноэлектрофорез по Грабарю. Белки сыворотки выстраиваются в линию своей электрофоретической подвижности. После чего проводят встречную иммунодиффузию, в направлении перпендикулярном иммунной сыворотки. В результате образуется сложная система дуг преципитации.