AVTOREFERAT-BRKICH-LL

температуры тела, рН среды, состояния раны. Обычно рН раны составляет 6,2 с

увеличением ацидоза в случае инфицированной раны до 5,6, в то время как рН неповрежденной кожи от 3,8 до 5,6. Вязкость раневого отделяемого инфицированной раны составляет 0,6-0,8 Па∙с и обусловлена наличием детрита, представляющего собой разрушенные эндогенными протеазами компоненты внеклеточного матрикса. В ходе реализации исследований по формированию целевого профиля качества осуществляли экспериментально-обоснованный выбор ВВ гелеобразователей, являющихся модификаторами вязкости в ГЛФ, и обладающих оптимальными характеристиками. В

процессе разработки ГЛФ были исследованы растворы следующих веществ: 1-2%

натриевой соли карбоксиметилцеллюлозы; 1-2% метилгидроксиэтилцеллюлозы; от 0,5 до

6,0% ГПМЦ. Полученные растворы были исследованы по показателю вязкости.

На основании полученных данных была проведена оценка зависимости вязкости исследуемых растворов от их концентрации (табл. 1). Растворы ГПМЦ в концентрации 1 и

2%, наиболее подходили для последующих экспериментов, так как вязкость данных растворов лежала в диапазоне от 0,6 до 1,0 Па∙с, то есть приближалась к значениям вязкости раневого отделяемого (экссудата). Растворы ГПМЦ других концентраций также были выбраны для последующих экспериментов, при изучении гелеобразующих свойств с другими компонентами основы.

Таблица 1 – Вязкость исследуемых растворов производных целлюлозы

Растворы натриевой соли карбоксиметилцеллюлозы

Исходя из свойств системы «раневой дефект/раневое отделяемое», для моделирования поведения разрабатываемого ЛП была разработана подложка (раневой дефект) и среды (раневое отделяемое) из искусственных материалов. Поведение ЛП в такой системе характеризуется следующими параметрами: моделированием раневой поверхности; осмотической активностью; взаимодействием модельного отделяемого с такими компонентами, как Хт, ПАА, глицерин.

Для проведения экспериментов на основании реологических характеристик и значения рН была разработана модель раны, воспроизводящая раневые условия in vitro.Так же была смоделирована поверхность, имитирующая поверхность раневого дефекта,

11

полученная на основе ПАА. На чашках Петри были получены тонкие пленки ПАА из растворов различных концентраций. Для устранения хрупкости и ломкости пленок добавляли небольшое количество глицерина (не более 5,0 г на 100,0 г раствора). В целях изучения процесса моделирования раневой поверхности на пленку наносились капли ГПМЦ различных концентраций, которые сохраняли ровные контуры и не растекались.

Нами было исследовано взаимодействие модельного отделяемого с гидрофильными соединениями на примере воды, глицерина и Хт. Аналогично проводили эксперимент по взаимодействию раствора 1 и 2% ГПМЦ с раствором Хт. Было обнаружено, что добавление Хт в виде гелевого раствора в соотношении 1:1 приводило к образованию устойчивой однородной гелевой системы. Затем добавляли глицерин в количестве от 2 до 5%, что не нарушало устойчивости и однородности системы. Для исследования совместимости ДВ разрабатываемого геля с основами готовили образцы основ и вводили растворы компонентов в индивидуальном порядке в основу.

В ходе разработки состава и технологии основы геля были получены 9

экспериментальных образцов, которые представляли собой гелевую матричную многокомпонентную основу из производных целлюлозы, Хт и производных акриловой кислоты, с различными концентрациями.

В ходе проведенных исследований было обнаружено влияние модификаторов вязкости на биофармацевтические характеристики ГЛФ, что связано с различным строением производных целлюлозы, длиной полимерных цепей и, как следствие, различной плотностью образующихся полимерных гелевых структур (табл. 2). Были выбраны интактные полимеры – ГПМЦ и ПАА. Так как Хт является составной частью ФС, то необходимо было изучить его гелеобразующие свойства при исследовании свойств других основы.

Таблица 2 – Составы образцов геля (г)

Для изучения реологических характеристик образцов ГЛФ строили кривые вязкости и течения, а также определяли предел текучести и вязкость по реологической модели Кэссона. Наиболее наглядно тиксотропный эффект наблюдался в условиях циклических

сдвиговых деформаций «малый сдвиг – большой сдвиг – малый сдвиг», когда структура

12

материала сначала разрушается на нисходящей ветви зависимости, а затем восстанавливается на восходящей части цикла, образуя так называемую «петлю гистерезиса». Динамическую вязкость образцов ГЛФ на основе 1 и 2% ГПМЦ изучали при температуре (20±1) °С в диапазоне градиента скоростей сдвига от 5 до 300 с-1. Все исследуемые образцы обладали высокой степенью тиксотропии. Но значения динамической вязкости образцов ГЛФ на основе 2% ГПМЦ, более чем в 5 раз превосходили аналогичные параметры образцов ГЛФ на основе 1% ГПМЦ.

Тиксотропный эффект их был более выраженным и достигал почти исходного значения вязкости при изменении градиента скорости сдвига 5 до 300 с-1. На объединенном графическом изображении реограмм образцов ГЛФ (рис. 1) наглядно продемонстрировано преимущество реологических свойств образцов ГЛФ на основе 2% ГПМЦ.

По кривым течения экспериментальных образцов можно достоверно судить о типе течения и косвенно – о пределе текучести. Были проведены эксперименты по изучению поведения образцов ГЛФ при изменении градиента скорости сдвига в широком диапазоне от 5,0 до 1000 с-1 и получены графики зависимости напряжения сдвига от градиента скорости сдвига (рис. 2).

13

На основании полученных данных, был сделан вывод о целесообразности применения изучаемых пленок полимеров и их смесей для применения в необходимых концентрациях и с возможными полимерными композициями из ГПМЦ и Хт с небольшим количеством ПАА.

Для дальнейших исследований и разработки технологии получения геля был выбран образец № 6 (состав образца представлен в табл. 3), на основе 2% ГПМЦ, как наиболее полно отвечающий заявленным требованиям – пластическая вязкость образца ГЛФ на основе 2% ГПМЦ составила 1,0 Па·с предел текучести 25,2 Па·с.

Таблица 3 – Состав разработанного препарата на 100 г

На следующем этапе методом атомно-силовой микроскопии, выполненной на АСМ

NT-MDT (рис.10-13), для определения однородности ГЛФ были проведены дополнительные исследования ФС с целью изучения изменения поверхности самого Хт, его комплексов и тройной композиции на его основе, с учетом того, чтобы далее в технологическом процессе объединить обе полученные субстанции, а уже затем включать их в основу геля ГЛФ.

Исследования методом АСМ выполнены для четырех образцов пленок: «Хт»; «хитозан+химопсин»; «хитозан+мирамистин»; «хитозан+химопсин+мирамистин».

Рисунок 10 – А. АСМ образца «Хт» 5х5 мкм; Б. 3D АСМ образца «Хт» 5х5 мкм

16

Рисунок 11 – А. АСМ образца «хитозан+химопсин» 5х5 мкм; Б. 3D АСМ образца «хитозан+химопсин» 5х5 мкм

Рисунок 12 – А. АСМ образца «хитозан+мирамистин» 5х5 мкм; Б. 3D АСМ образца «хитозан+мирамистин» 5х5 мкм

Рисунок 13 – А. АСМ образца «хитозан+химопсин+мирамистин» 5х5 мкм; Б. 3D АСМ образца «хитозан+химопсин+мирамистин»5х5 мкм

При наличии глицерина в составе смеси в Хт происходит упорядочивание

структуры, и наблюдается отсутствие конгломератов Хт (рис. 14).

Рисунок 14 – А. 3D АСМ «Хт»;

Б. 3D АСМ Хт с глицерином

17

Поскольку очищение раневой поверхности от гнойно-некротических масс,

происходит благодаря протеолитической активности химопсина, в работе была изучена кинетика выхода протеиназ из геля.

При изучении кинетики выхода навеска геля заливалась 1 М фосфатным буферным раствором рН-6,2 при гидромодуле 1:50 или 1:100 и через определенные промежутки времени определяли протеолитическую активность раствора. Через 2 часа определяли 100%

ферментативную активность геля.

При дальнейшей инкубации (до 24 часов), как при 25 оС, так и при 37 °С активность в пределах погрешности определения не менялась.

Высвобождение мирамистина из ГЛФ определяли по антимикробной активности,

изучая ингибирующее действие препарата на микробную культуру посредством посева на агаризованную питательную среду (L агар) методом «колодцев» с последующим измерением зоны задержки роста. Также был проведен эксперимент с использованием 96-

луночного планшета.

Технология получения ГЛФ «Гель ранозаживляющий»

Получение ГЛФ начинали с подготовки ДВ и основы. В операцию подготовки входил процесс взвешивания сырья и материалов, и процесс растворения и набухания основы.

С целью получения раствора лидокаина в ПАА в реактор, с нагретой до температуры

60-65 оС водой очищенной при перемешивании, добавляли ПАА, оставляли настаиваться до набухания и структурирования полимерной массы, после чего прибавляли лидокаин.

Полученную реакционную массу, периодически перемешивая, выдерживали при комнатной температуре до полного растворения лидокаина.

В производственную емкость с водой очищенной, предварительно подогретой до

60-65 oС, добавляли ГПМЦ и оставляли для набухания и исчезновения комочков, затем состав перемешивали в реакторе с пропеллерной мешалкой и подогревом (GR-10L., Greatwall Scientific, Китай) до получения гомогенной структуры.

После этого при постоянном перемешивании объединяли с ПАА с предварительно растворенным в нем анестетиком лидокаином.

Для получения водного раствора комплексов ХтХ и ХтМ в реактор при комнатной температуре заливали воду очищенную и добавляли лиофилизированный порошок ФС ХтХ.

Реакционную массу перемешивали на магнитной мешалке до полного растворения ФС ХтХ и добавляли лиофилизированный порошок ФС ХтМ. Образовавшуюся массу перемешивали до полного растворения.

18

С целью получения ГЛФ объединяли полученную основу с водным раствором комплексов ХтХ и ХтМ, добавляли глицерин и полученную смесь подвергали гомогенизации в течение 10-15 минут при скорости 2000-3000 об/мин. (Смеситель-

гомогенизатор APZRJ-20B, Китай). В результате получили реакционную массу в виде густой белой пены, которую выдерживали при комнатной температуре в течение 24 часов для удаления пузырьков воздуха (дегазации).

После дегазации смесь приобрела форму от бесцветного до слабо молочно-белого оттенка. Соблюдение установленных технологических режимов обеспечивалось в контрольных точках производства (технологическая схема получения ГЛФ «Гель ранозаживляющий» представлена на рис.15).

В качестве первичной упаковки ГЛФ «Гель ранозаживляющий» были выбраны тубы

ABL с защитной мембраной и завинчивающейся полимерной крышкой, обладающие значительной химической инертностью, высокой прочностью и устойчивостью к перепадам температуры.

Тубы, вместимостью 30,0 г, наполняли с помощью тубонаполнительной машины

(МIC Machinery R-30, Китай). Состав ГЛФ на одну тубу представлен в табл. 4.

Таблица 4 – Состав ГЛФ на одну тубу

Оценку качества ГЛФ проводили в соответствии с разработанным проектом НД.

Для изучения стабильности в процессе хранения, полученную ГЛФ оценивали по показателям качества, представленным в спецификации.

На хранение закладывались три партии ГЛФ при температуре (20±5) ºС; от 2 до 8 ºС,

при влажности от 45 до 60%. Через 2 года хранения при температуре от 2 до 8 ºС было установлено, что образцы ГЛФ, полученные по опытно-промышленному регламенту (ОПР

71.05-2017 от 15.01.2017г.) по всем установленным в спецификации НД параметрам соответствуют предъявляемым к ним требованиям (табл.5).

19