тті

а б в

а — для местного применения; б — для применения в ротовой полости; в - для интраназального применения

Рисунок 3 - Различные конфигурации насадок, применяемые в упаковке спреев

а б в

а - для местного применения; б - для применения в ротовой полости; в - для интраназального применения

Рисунок 4 - Различные конфигурации насадок, применяемые в упаковке спреев

Основным и наиболее сложным элементом является микронасос, который состоит из дозатора и распылительной насадки (рисунок 1).

Принцип работы микронасоса заключается в следующем. При

надавливании на насадку 4 шток 5 движется вниз и выдавливает часть препарата

из полости 6 через отверстие 7 в канал 8, соединенный с насадкой (распылителем). Возвращение штока 5 в исходное положение производится пружиной 10. При возвращении штока в исходное положение в полости 6 создается разряжение, давление на шарик 11 (являющийся клапаном) ослабевает, и жидкость из флакона через сифонную трубку 3 заполняет

полость 6. Затем цикл повторяется.

3. Современное состояние исследований в области технологии лекарственной формы спрей

1. Номенклатура лекарственных средств, выпускаемых

в форме спрей для наружного применения

Ввиду объективных причин, изложенных выше, а также растущей популярности лекарственных средств в форме спрея все большее количество производителей осваивают данную лекарственную форму. Причем в форму спрей переводят не только препараты, ранее выпускавшиеся в виде аэрозоля, например «Ингалипт», «Пропосол» и некоторые другие, но и препараты, предназначенные для наружного применения и ранее выпускавшиеся в виде других лекарственных форм. Примером могут стать такие недавно появившиеся на отечественном рынке лекарственные средства, как «СвиссДжет» и «Ревмон», являющиеся нестероидными противовоспалительными средствами (НПВС) и ранее выпускавшиеся в виде мягких и твёрдых лекарственных форм [36].

Для того чтобы установить полный перечень лекарственных средств, выпускаемых в форме спрей для наружного применения на территории Российской Федерации, а также проанализировать их качественный и количественный состав и распределение по фармакотерапевтическим группам,

был проведён анализ государственного реестра лекарственных средств (ГРЛС) (таблица 1) [36].

$

Рисунок 5 - Диаграмма распределения лекарственных средств в форме спрей для наружного применения по фармакотерапевтическим группам

Как видно из рисунка 5, наиболее часто в виде лекарственной формы спрей для наружного применения производители выпускают противогрибковые средства, что может объясняться тем, что грибковые инфекции зачастую поражают обширные участки кожных покровов, кроме того, недостаточная обработка пораженных участков в складках кожи может привести к рецидиву инфекции. Применение спреев для наружной терапии грибковых инфекций в этом случае будет предпочтительнее, чем традиционные мягкие лекарственные формы (мази, гели, кремы и т.д.).

На втором месте по частоте применения спреев стоят антисептические средства. Бензалкония хлорид и хлоргексидина биглюконат, используемые в этих лекарственных средствах, применяются для первичной, отсроченно-первичной обработки ран, гнойных инфекциях, а также при длительно незаживающих воспалительных и гнойно-воспалительных заболеваниях кожи. Использование этих препаратов в форме спрея позволяет быстро и полно обрабатывать площадь раны, а также обеспечивает более полную очистку раны при ее первичной обработке за счет давления жидкости, создаваемого при распылении препарата.

Количество противовоспалительных лекарственных средств в форме спрея равно количеству антисептических препаратов. Причём стоит отметить, что два из трех препаратов этой группы были зарегистрированы в начале 2012 года, что указывает на возрастающий интерес производителей к данной лекарственной форме. Кроме того, действующим веществом спрея «Эпиген интим» является аммонийная соль глицирризиновой кислоты, получаемая из растительного лекарственного сырья, что отличает это ЛС от других препаратов данной группы, основным компонентом которых являются синтетические лекарственные вещества.

В виде лекарственной формы спрей применяется один препарат, являющийся местным анестетиком, применяемый в основном в стоматологии, и два препарата, предназначенные для нанесения на волосистую часть головы. Выбор лекарственной формы в этом случае обусловлен удобством применения по сравнению с другими лекарственными формами.

2. Особенности технологии лекарственной формы спрей

К сожалению, большинство производителей не раскрывают информацию о точном соотношении вспомогательных веществ, входящих в состав их продукции, а также технологические приёмы и операции, используемые в процессе производства.

Тем не менее, проанализировав состав вспомогательных веществ, указанный в инструкции к препарату, можно составить представление о типе дисперсной системы препарата (по наличию или отсутствию эмульгаторов,

физико-химическим свойствам действующих и вспомогательных веществ) и технологических операциях, применяемых при производстве.

Анализ данных таблицы 1 и литературных данных о свойствах использованных вспомогательных веществ позволяет разделить их на следующие группы:

^ Растворители. В эту группу входят вспомогательные вещества, способные образовывать истинные растворы с действующими веществами лекарственного средства. К этой группе относятся пропиленгликоль, изопропиловый спирт, этиловый спирт, вода очищенная.

^ Модификаторы вязкости. К этой группе относятся полимерные соединения, повышающие вязкость водных растворов, используются для механической стабилизации суспензий и эмульсий, а также для придания необходимых потребительских свойств (препятствие быстрому растеканию препарата). Сюда относятся такие соединения, как макрогол-300, макрогол-400, цетомакрогол-1000, поливинилпрролидон (ПВП) и изопропилмиростат.

^ Эмульгаторы. Вспомогательные вещества, применяемые для стабилизации геторогенных систем (суспензий, эмульсий). В составе спреев для наружного применения встречаются полисорбат 60, полисорбат 80, проксанол 268.

^ Стабилизаторы, корригенты и др. К этой группе отнесены вспомогательные вещества, непосредственно не влияющие на стабильность суспензий либо эмульсий и не влияющие на растворимость действующих веществ. Их используют для продления срока годности (антиокислитель бутилгидрокситолуол), в качестве корригентов (ментол), пеногасителей (карбамид).

14 препаратов, приведённых в таблице 1, предположительно являются растворами, что составляет 82% от общего количества приведённых лекарственных средств. Примечательно, что при изготовлении данных лекарственных средств всегда используются комплексные растворители. Например, при производстве спрея «Хлоргексидин» используется смесь воды очищенной и этилового спирта, несмотря на то, что действующее вещество

хлоргексидина биглюконат хорошо растворимо как в этиловом спирте, так и в воде. Это объясняется повышением эффективности хлоргексидина биглюконата в растворах этилового спирта.

Только 18% лекарственных средств, зарегистрированных в ГРЛС в форме спрея для наружного применения, предположительно являются гетерогенными системами (суспензиями либо эмульсиями), дисперсионной средой в которых является вода очищенная. Об этом свидетельствует тип эмульгатора, используемого для стабилизации (полисорбат 60, полисорбат 80 и проксанол 268 относятся к эмульгаторам первого типа).

47% анализируемых лекарственных средств имеют в своём составе вспомогательные вещества, относящиеся к группе модификаторов вязкости. В их число входят препараты двух фармакотерапевтических групп противогрибковых и противовоспалительных препаратов. Применение загустителей в данных фармакотерапевтических группах обоснованно необходимостью снизить текучесть препарата после его нанесения на обрабатываемую поверхность, что способствует более экономичному расходу лекарственного средства. Наиболее часто в качестве модификатора вязкости используются производные полиэтиленоксидов (макрогол-300, макрогол-400, цетомакрогол-1000).Это связанно со способностью этой группы веществ выступать в роли сорастворителей.

3. Характеристики факела распыления

Поскольку лекарственная форма спрей для наружного применения основана на принципе распыления лекарственного вещества на обрабатываемую поверхность, то оценка эффективности распыления препарата будет являться ключевым моментом технологии.

При прохождении раствора лекарственного средства(ЛС) через распылительную насадку происходит диспергирование частиц, размер которых зависит от типа насадки и состава композиции. Эти диспергированные частицы образуют факел распыла.

Для количественной оценки эффективности параметров факела распыла используют различные характеристики (дисперсные, характеристики распределения, характеристики формы, энергетические, гидродинамические характеристики) [57, 144].

Дисперсные характеристики определяют факел распыла как совокупность частиц. Они включают в себя кривые распределения числа капель по диаметрам (интегральные и дифференциальные), средний диаметр капель, удельную поверхность капель.

Характеристики распределения отражают профиль удельных потоков жидкости по сечению факела. К ним относятся коэффициент радиальной и окружной неравномерности. Коэффициент радиальной неравномерности показывает, насколько распределение плотности орошения отличается от идеально равномерного, а коэффициент наружной неравномерности позволяет оценить, насколько факел распыла симметричен относительно оси.

Характеристики формы позволяют определять размеры факела на определенном расстоянии от распылителя. К ним относятся корневой угол факела, диаметр факела на расстоянии и дальнобойность факела (рис. 6).

б)

в)

а — корневой угол; б, в — дальнобойность вертикального и горизонтального факелов соответственно

Рисунок 6 - Определение корневого угла факела и его дальнобойности

Энергетические характеристики используются для оценки экономичности способа распыления или распыляющего устройства.

Гидродинамические параметры включают скорость капель и газа в любом сечении. Они необходимы для расчета тепломассообменных процессов, протекающих в распылах.

Среди методов, позволяющих исследовать потоки аэрозолей, в настоящее время наиболее перспективными являются телевизионные [57,163,167,168]. Их преимущества известны и подтверждены многими экспериментальными исследованиями. Сочетание телевизионной камеры, лазера и компьютера как единой измерительной системы создает неограниченные возможности для решения многих задач по изучению явлений, происходящих в факеле форсунки, измерения его геометрических параметров и создания паспорта (протокола).

4. Перспективы применения солодки голой и эвкалипта прутовидного в терапии дерматозов

1. Солодка голая

Корень солодки издавна применяется в медицине. Как лекарственное средство его использовали врачи Древнего Рима, Греции, Египта. В восточной медицине солодка находила применение в качестве омолаживающего, укрепляющего, восстанавливающего средства. Китайские врачи добавляли экстракты корня солодки во все лекарства, считая, что это усиливает действие других компонентов [38]. Сведения о корне солодки приводятся во всех травниках, сегодня солодка включена в отечественную и во многие зарубежныефармакопеи.

Производящее растение - солодка голая (С1усуггЫгад1аЬгаЬ.) - многолетнее травянистое растение семейства бобовые (ГаЬасеае) со стеблями высотой до 2 м с развитой корневой системой, которая состоит из короткого толстого корневища с большим числом отходящих от него корневищ-столонов и вертикального главного корня, уходящего вглубь почвы. Стебли прямостоячие, маловетвистые. Листья очередные, непарноперестые длиной до 20 см. Цветки беловато-фиолетовые, собраны в пазушные кисти. Плоды - продолговатые, прямые или слегка изогнутой формы бобы. Распространена солодка голая в

южных районах Западной Сибири, Казахстана, Киргизии, на Южном Урале, Северном Кавказе, встречается в Крыму [19,38, 91].

Корень солодки содержит до 24% глицирризиновой кислоты (ГК) [132, 136], многочисленные производные ГК, более 30 флавоноидов (до 4,3%), 10-30% аскорбиновой кислоты, кумарины, дубильные вещества, органические кислоты (до 4,6%), моно- и дисахариды (до 20%), алкалоиды, стероиды. Тритерпеновый сапонин глицирризин, придающий приторно-сладкий вкус корню солодки, представляет собой смесь калиевой и кальциевой солей ГК. Максимальное его количество в корнях составляет 23% [91,130].

Богатый фитохимический состав солодкового корня обусловливает его разнообразные фармакологические эффекты. Так, флавоноиды солодкового корня оказывают противовоспалительное[53], противомикробное [24],

гиполипидемическое [53] и антиоксидантное [64] действие. Способность флавоновых соединений корня солодки голой снижать кислотность желудочного сока, усиливать образование слизи, защищающей слизистую оболочку желудка и двенадцатиперстной кишки, используется в комплексной терапии язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки [38]. Органические кислоты оказывают антиоксидантное и антисептическое действие [19].

Сотрудниками НИИ фармакологии Томского научного центра Сибирского отделения РАМН проведены исследования по установлению гемостимилирующего эффекта глицирама [97].

ГК обладает противоопухолевой активностью [178], в малых дозах является иммуностимулятором, а в высоких (до 6,5 г/кг) - иммуносупрессором [177].

ГК и ее производные способны ингибировать репродукцию вируса иммунодефицита человека [126, 136].

ГК по структуре своего агликона и метаболита (глицирретиновой кислоты) имеет сходство со структурой глюкокортикоидных гормонов. Подобно гормонам надпочечников ГК и ее агликон оказывают влияние на водно-солевой обмен (уменьшают содержание К⁺ в организме, усиливают задержку Na⁺, повышают артериальное давление) [136].

Противовоспалительное действие корня солодки было установлено еще в 1964 г. в лаборатории ВИЛР. Механизм противовоспалительного действия заключается в том, что ГК и ее агликон оказывают стимулирующее действие на кору надпочечников, ингибируют окислительное фосфорилирование и биосинтез сульфатированных мукополисахаридов, понижают активность

фосфолипазы А₂. ГК и ее производные влияют на каскад арахидоновой кислоты, ингибируя синтез простагландинов, что подобно действию нестероидных противовоспалительных средств. Препараты ГК угнетают как экссудативную, так и пролиферативную фазы воспалительного процесса [136].

Обладая свойствами антагониста ацетилхолина, гистамина и других соединений, отвечающих за аллергическую реакцию, ГК и ее агликон становятся активными антиаллергическими агентами [19, 136].С этим связана эффективность применения препаратов солодкового корня при различных аллергических состояниях, экземе, атопическом дерматите, хронических воспалительных заболеваниях кожи[69, 74, 79, 140].При состояниях, требующих применения глюкокортикоидов (красная волчанка, ревматоидный артрит), препараты солодки применяют с целью стимулирования функции коры надпочечников и усиления выработки собственных кортикостероидов, особенно на этапе снижения дозы глюкокортикоидного препарата или его отмены [33,38].

Из описанных выше фармакологических эффектов биологически активных веществ корня солодки обращает на себя внимание противовоспалительная активность.

2. Эвкалипт прутовидный

Эвкалипт (Eucalyptus) представляет собой вечнозеленое дерево семейства миртовые (Myrtaceae). Родина всего рода - Австралия, на территории РФ успешно произрастает на Черноморском побережье. Известно более 200 видов эвкалиптов, среди них наиболее распространены эвкалипт прутовидный (E. viminalis), эвкалипт шариковый (Е. globulus), эвкалипт пепельный (E. cinerea) [91].

В листьях эвкалипта содержатся эфирное масло (до 3%), фенолальдегиды, хлорофиллы, дубильные вещества, органические кислоты [8, 70].

Эфирное масло эвкалипта обладает противомикробным, антисептическим, противовоспалительным действием [15, 16]. Коллективом кафедры вирусологии Гейдельбергского университета в Германии проводятся исследования по определению противовирусной активности эвкалиптового масла. Сделано предположение об эффективности применения эвкалиптового масла при герпетической инфекции. Вещества, ответственные за противовирусный эффект, устанавливаются [179].

Эфирное масло эвкалипта входит в состав различных комплексных препаратов, например:

S назальный спрей «Отривин»;

•S

Хлорофиллипт обладает антибактериальной (бактерицидной и бактериостатической) активностью в отношении стафилококков, устойчивых к антибиотикам [92]. Хлорофиллы, входящие в его состав, способствуют формированию соединительных тканей, что важно при лечении эрозий, язв, открытых ран; им свойственна дезодорирующая активность. Монотерпеноиды оказывают седативное и спазмолитическое действие.

В Харьковском НИИ микробиологии, вакцин и сывороток им. И.И.Мечникова были проведены экспериментальные исследования, которые показали, что хлорофиллипт стимулирует процессы тканевого окисления у беременных крыс. Механизм этой активации ученые связывают со скоростью передачи электронов в звене цитохром С - цитохромоксидаза. Это позволяет рекомендовать хлорофиллипт в качестве антигипоксанта [143].

Хлорофиллипт применяется в терапии заболеваний верхних дыхательных путей, сепсисах, при инфицированных ранах и ожогах, трофических поражениях кожи.

Эвкалимин представляет собой очищенную сумму терпеноидных фенолоальдегидов флороглюцинового ряда (эуглобалей) и тритерпеноидов. Эуглобали приведены как действующие вещества в составе эвкалимина. Препарат обладает широким спектром антимикробной активности [54]. Выпускаются 1% и 0,25% спиртовые растворы эвкалимина. Применяют при лечении гнойно­воспалительных заболеваний кожи, слизистых, при инфекционно-воспалительных заболеваниях верхних дыхательных путей, в стоматологии. В гинекологической практике используют свечи с эвкалимином [139].

На ОАО «Фармацевтическая фабрика Санкт-Петербурга» разработана технология получения препарата «Галеиофиллипт». Данный препарат содержит медные аналоги хлорофилла и аналогичен 1% спиртовому раствору хлорофиллипта [11].

Область применения препаратов, полученных из эвкалипта, разнообразна [45, 139]. Однако в связи с ростом числа дерматологических заболеваний

наибольший интерес представляет открытие новых возможностей применения препаратов эвкалипта в дерматологии [60, 69, 109, 121].

ЗАКЛЮЧЕНИЕ ПО ОБЗОРУ ЛИТЕРАТУРЫ

Спрей - относительно новая перспективная лекарственная форма, сочетающая в себе достоинства такой лекарственной формы, как «аэрозоль», но при этом лишенная многих недостатков, присущих этой лекарственной форме. Спреи в настоящее время завоевали лидирующее положение в терапии заболеваний верхних дыхательных путей, наметился интерес производителей к выпуску лекарственных средств в форме спрея для наружного применения.

Упаковка лекарственной формы спрей играет немаловажное значение, определяя большую часть свойств лекарственной формы. На сегодняшний день производители упаковки предоставляют широкий ассортимент своей продукции, позволяющий подобрать тип упаковки, соответствующий назначению и способу применения лекарственной формы, а также сделать её удобной и привлекательной для потребителя.

В технологии спреев для наружного применения лидирующее положение занимают лекарственные средства, приготовленные по типу растворов, однако встречаются лекарственные средства в форме эмульсий или суспензий. При изготовлении спреев, как правило, используются комплексные растворители в сочетании с модификаторами вязкости и другими вспомогательными веществами, позволяющими получить композицию спрея с необходимыми свойствами.

Оценка качества распыления лекарственного вещества из упаковки является неотъемлемой частью процесса разработки лекарственного средства в форме спрея и требует углубленного изучения.

Однако, несмотря на все преимущества использования спреев для наружной терапии воспалительных процессов, этот сегмент фармацевтического рынка развит недостаточно. На сегодняшний день он включает всего три препарата, два из которых являются синтетическими и один препарат природного происхождения. Причем наибольший интерес представляет разработка новых ЛС на основе растительных объектов. Это связано прежде всего с наименьшим риском развития побочных реакций, возможностью применения данных ЛС у разных возрастных групп пациентов. Препараты солодки голой и эвкалипта

прутовидного давно и успешно применяются в качестве противовоспалительных средств, а их сочетание в одной лекарственной форме обусловит более выраженный противовоспалительный эффект.

Таким образом, актуальной задачей становится разработка лекарственного средства спрея противовоспалительного действия на основе природных источников, таких как эвкалипта листьев экстракт густой и солодки корней экстракт густой.

Глава 2 объекты и методы исследования

Диссертационная работа проводилась с 2009 г. по 2012 г. на базеГБОУ ВПО Пятигорской ГФА Минздравсоцразвития России (кафедра технологии лекарств, кафедра фармацевтической химии, кафедра биохимии и микробиологии, кафедра клинической фармакологии).

Исследования проводились согласно разработанному алгоритму, представленному схемой на рисунке 7.

Рисунок 7 — Алгоритм проведения исследований

1. Объекты исследований

Эвкалипта листьев экстракт густой представляет собой густой экстракт, получаемый из листьев эвкалипта прутовидного (Eucalyptus Viminalis Labill.) и эвкалипта шарикового (Eucalyptus globulus Labill.) семейства миртовые (Myrtaceae). Торговое наименование «Хлорофиллипт» (Chlorophylliptum), выпускается согласно утвержденной ФСП 42-8556-07 «Хлорофиллипт, экстракт густой».

«Хлорофиллипт» - смолистая масса изумрудно-зеленого цвета со специфическим запахом эвкалипта, обладающая выраженной антибактериальной активностью, сопоставимой с некоторыми антибиотиками. Изучением и разработкой препарата занимались сотрудники Харьковского НИИ микробиологии, вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова [92]. Фармацевтическим предприятием ЗАО «ВИФИТЕХ» выпускаются препараты из листьев эвкалипта «Хлорофиллипт, раствор масляный 2%», «Хлорофиллипт, раствор спиртовой 1%», «Хлорофиллипт» [36].

Солодкового корня экстракт густой (ФС42-2614-96) - представляет собой густую массу бурого цвета, слабого своеобразного запаха и приторно сладкого вкуса. При взбалтывании с водой образует коллоидный, сильно пенящийся раствор.

2. Материалы и оборудование

У карбопол (ТУ 2219-005-290593342-97);

У натрия гидроксид (ЫаОН) ГОСТ 4328-77;

У полиэтиленоксид (ПЭО) 400 (М.м. 400) производства «Хаммед» (Россия), ТУ 2483-166-05757587-2000 (ФС 42-1242-96);

У метилцеллюлоза (ТУ 6-05-1857-78);

У твин-80 (полисорбат 80, полиэтиленгликоль сорбит моноолеат, ТУ 6-14-938-79) - маслянистая жидкость лимонного цвета. Твин-80 обладает свойствами эмульгатора, солюбилизатора. Это оксиэтилированный сложный моноэфир ангидрогексавитов жирных кислот, представляющий собой вязкую жидкость, растворимую в воде, неионное поверхностно-активное вещество;

У ЕтрПап КМ 25Р (цетеарет-25 100%, этоксилированный цетил- стеариловый спирт) - белые воскообразные чешуйки со слабым характерным запахом, величина ГЛБ (вычисленная) 15,3. К преимуществам использования ЕтрПап КМ 25 Б можно отнести: хорошие смачивающие, эмульгирующие и моющие свойства, возможность использования в широком диапазоне pH, совместимость с анионными, катионными и неионогенными ПАВ;

У Етрюо1 Е8В представляет собой водный раствор лаурил этокси (2ЕО) сульфата натрия косметического качества, полученный из первичных природных спиртов узкой фракции (анионное поверхностно-активное вещество). Внешний вид при 25С° — легкотекучая непрозрачная жидкость, практически бесцветная. Сочетает в себе оптимальные эксплуатационные показатели и превосходные пенообразующие свойства. Продукт используют в различных средствах высокого качества. Етрюо1 Е8В 70 буферизован от кислотного гидролиза и стабилен при температуре ниже 40С° и значении pH около 5, относительно стабилен к микробиологическому загрязнению;

У моностеарат глицерина - смесь моно- и диэфиров кислот стеарина и спирта глицерина. Однородная масса белого или кремового цвета со слабым специфическим запахом. Температура плавления 51-56°С; кислотное число не более 4; эфирное число 150-165. Содержит 35-40% моноэфира, 40% диэфира. Используется как структурообразующий и стабилизирующий компонент в

косметических кремах типа масло/вода. В присутствии анионоактивных добавок (мыла) образует высокостабильные эмульсии типа масло/вода. Используется в количестве 0,5-7%.

Эксперименты проводились при помощи следующего оборудования:

У Весы для сыпучих материалов ВСМ-1, ТУ 64-1-3849-84;

У Весы для сыпучих материалов ВСМ-100, ТУ 64-1-3849-84;

У Весы лабораторные ВЛТЭ-150, II класс точности по ГОСТ 24104-2001;

У Весы равноплечие ручные ВР-20, ТУ 64-1-2834-80;

У Комплект гирь 4-го класса Г-4.211.10, ГОСТ 7328-82;

У Лабораторный рН-метр-милливольтметр «pH-15 ОМ»,

ТУ 25-7410-003-86;

У Секундомер СОС пр-2б-2, ГОСТ 5072-72;

У Вискозиметр ВПЖ-2;

У Центрифуга;

У Термостат электрический суховоздушный ТС-80М-2, ТУ 64-1-1382-84.

3. Методы исследования

   1. Физико-химические методы исследования

Количественное содержание глицирризиновой кислоты и суммы дитерпеновых кислот определяли спектрофотометрически на спектрофотометре СФ-56 в соответствии с требованиями ГФ XII изд.

2. Технологические методы исследования

Оценку органолептических свойств проводили субъективно: определяли внешний вида, запах. Наличие или отсутствие посторонних примесей определяли в соответствии с ГФ XII изд.

Термостабильность изучали по следующей методике:при нагревании 10,0 спрея в хорошо закрытой пробирке в термостате при 37±1°С в течение суток

(24 часа) не должно быть расслоений (отсутствие коагуляции, уплотнения, помутнения, разжижения). При замораживании навески спрея в пробирке до - 20°С и последующем постепенном оттаивании при комнатной температуре не должно быть расслоений.

Определение водородного показателя спрея проводили по методике, изложенной в ГОСТ 29188.2-91 [34]. За окончательный результат испытания принимали среднее арифметическое двух параллельных определений, допускаемое расхождение между которыми не превышало 0,1 единиц pH.

Вязкость измеряли на жидкостном вискозиметре типа ВПЖ-2 согласно методике, изложенной в ГОСТ 33-2000 для прозрачных жидкостей при нормальном давлении и температуре 20°С.

Определение коллоидной устойчивости. Определение коллоидной устойчивости для исследуемых композиций проводили по следующей методике: пробы исследуемой композиции помещали в 6 центрифужных пробирках объемом 10 мл, снабженных градуированными делениями, которые позволяют определить количество образовавшегося осадка. Пробирки заполняли до верхнего деления, определяя уровень наполнения по верхнему мениску (эмульсия ЭЛЭГ представляет собой окрашенную непрозрачную жидкость). Затем заполненные пробирки устанавливали в лабораторную центрифугу и центрифугировали при 3000 об/мин в течение 15 мин, после чего центрифугу выключали, дожидались её полной остановки, извлекали пробирки и оценивали наличие осадка и его количество. Количество осадка, образовавшегося при центрифугировании, определяли следующим образом: надосадочную жидкость осторожно

декантировали, чтобы определить верхнюю границу осадочного слоя, после чего определяли высоту осадка в мм от дна пробирки до верхней границы осадка.

Определение устойчивости в процессе хранения. Устойчивость образцов эмульсии ЭЛЭГ в процессе хранения оценивали по следующей методике: исследуемую композицию эмульсии ЭЛЭГ помещали в стеклянную склянку из прозрачного стекла, плотно укупоривали и оставляли на хранение при комнатной температуре в течение семи суток. Состояние эмульсии оценивали визуально

(цвет, консистенция, наличие или отсутствие расслоения) на протяжении всего времени экспозиции.

3. Методы изучения фармакологической активности и антимикробного действия

Фармакологические исследования включали в себя изучение раздражающего действия, противовоспалительной и ранозаживляющей активности разработанного спрея. Все работы выполнялись на кафедре клинической фармакологии Пятигорской ГФА. Изучение раздражающего действия проводили на куриных эмбрионах белых кур породы Leggron возрастом 9-10 суток.

Исследования противовоспалительной и ранозаживляющей активности проводили на белых половозрелых крысах-самцах. Животные содержались в обычных условиях вивария Пятигорской ГФА при температуре окружающего воздуха 22±2°Ссо свободным доступом к воде и пище.

Опытные группы животных получали исследуемую композицию спрея в виде лекарственной формы наружно. В качестве препаратов сравнения использовали гель эфкамон (производства Покровский завод биопрепаратов, Россия)и мазь метилурацил (производства Татхимпрепараты, Россия). Все экспериментальные работы проводили согласно «Руководству по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ» (под редакцией Р.У. Хабриева) [118].

Оценку раздражающего действият situ проводили тестом на хорион- аллантоисной оболочке куриного эмбриона (ХЕТ-КАМ тест) [99]. Хорион- аллантоисная оболочка представляет собой тонкую прозрачную оболочку, пронизанную большим количеством кровеносных сосудов и капилляров. Целью исследования биологически активных веществ на модели хорион-аллантоисной оболочки куриного эмбриона является предварительная оценка вероятного раздражающего действия на слизистые оболочки млекопитающих. Полученные в ходе опыта результаты позволяют предположить, что тестируемое вещество может обладать или не обладать раздражающим действием на слизистые

оболочки млекопитающих. В том случае, если исследуемое вещество не обладает раздражающим действием, проводят дальнейшие изучения по определению фармакологической активности.

Эксперимент проведен на куриных эмбрионах белых кур возрастом 9-10 суток. Исследуемый спрей тестировали в 1 Бповторностях (12 - опыт, 6-контроль). Эмбрионы выдерживали в инкубаторе при t=37,8 °С и влажности 62,5%. Перед началом работы яйцо укрепляли на фиксирующей подставке тупым концом вверх; скорлупу вскрывали в центре тупого конца, освобождали от скорлупы всю воздушную камеру, после чего поверхность открытой воздушной камеры смачивали изотоническим раствором натрия хлоридатемпературой 37°С. После этого яйцо помещали в термостат на 30 минут, затем раствор отсасывали микропипеткой, удаляли увлажненную жесткую подскорлуповую оболочку без повреждения нежной хорион-аллантоисной оболочки. Наносили исследуемую композицию спрея и наблюдали за действием 120 секунд. По результатам наблюдения определяли, к какому классу веществ по степени раздражения относитсякомпозиция спрея.

Результаты эксперимента наблюдали с помощью бинокулярного микроскопа и фиксировали при использовании цифрового фото на основе компьютерной программы Intel(R) Play(tm) QX3(tm) Computer Microscope.

Острую воспалительную реакцию (отек) воспроизводили интарплантарным введением 0,1мл 1% суспензии каолина дорсовентрально в правую заднюю конечность крысы. Метод прост, легко воспроизводим, прибор дает возможность регистрировать изменение объема конечности в динамике, исключается необходимость использования наркоза исследуемым животным. Онкометрически измеряли объем конечности крысы в динамике по объему вытесненной воды. Выраженность экссудативного воспаления оценивали в максимуме объема и через сутки после индукции воспаления каолином. [118].

Противовоспалительную эффективность исследуемых образцов экстрактов рассчитывали по формуле [89]:

Р=^х100 (1)

где Р - процент угнетения воспаления;

У₀ — среднее увеличение объема отечной конечности у опытных животных;

Ук - среднее увеличение объема отечной конечности в контроле.

Ранозажиеляющую активность оценивали на модели термического ожога [124, 125]. Данный метод заключается в следующем. Животным тщательно выстригали участок кожи в верхней части туловища. Для ограничения площади ожога на опытный участок кожи накладывался лист фольги с отверстиями одинакового размера (1x1 см), начальная площадь ожога, таким образом, составляла 100мм². Затем наркотизированным животным наносили термический ожог контактным способом; температура составляла 100°С, время воздействия 20 сек. Таким образом, достигались ожоги одинакового размера и степени тяжести.

Животным ежедневно наносили на раневую поверхность разработанный спрей, плацебо (основа спрея) и препарат сравнения. Полученные данные сравнивали с группой животных, не получивших лечения. Площадь ожога оценивали в динамике на 1, 3, 6, 8, 10,12, 14, 16 и 18 дни лечения. Отмечали общее состояние животных, время отхождения струпа, состояние дефекта и окружающих тканей, скорость регенерации.

Полученные данные обрабатывали статистически.

Изучение антимикробной активностиспрея с солодки корня экстрактом густым и эвкалипта листьев экстрактом густымпроводилив соответствии с требованиями ГФ XI изд., вып. 2 и Изм. от 28.12.1998 глпуйго методом диффузии в агар [41, 42]. Посевы культур микроорганизмов осуществляли в чашках Петри. Стерильные чашки Петри устанавливали на строго горизонтальную поверхность, заливали расплавленный и охлажденной до 48-50°С агаризованной средой в количестве 20 мл для создания оптимальной толщины слоя. Чашки с посевами инкубировали при температуре 30 ± 1°С в течение 72 часов.

Перед посевом чашки со средой подсушивали в термостате для лучшей диффузии засеваемого материала в питательную среду. Подсушенная среда засевалась стерильным ватным тампоном, смоченным во взвеси исследуемой

культуры микроорганизмов. Такой способ посева обеспечивал равномерный микробный рост по всей поверхности чашки.

В качестве испытуемых микроорганизмов использовали 11 тест-культур:

1. Staphylococcus aureus (209);

2. Staphylococcus aureus (Макаров);

3. Staphylococcus aureus (Type);