2.2 Исследование химических свойств

Исследование химических свойств дуоденального содержимого обычно проводится в биохимической лаборатории и состоит в определении билируби­на, холестерина, желчных кислот и некоторых печеночных и панкреатических ферментов. В клинической практике обычно ограничиваются определением со­держания билирубина и холестерина.

Билирубин в желчи определяется так же, как и в сыворотке, по методу Иендрашика и выражается в мг% или микромолях. В порциях А и С содержит

ся до 25 мг%, а в порции В — в пределах 200-400 мг% билирубина. Количество его снижается при паренхиматозной и механической желтухах, повышается при гемолитической желтухе.

Холестерин в желчи определяется так же, как и в сыворотке крови. Со­держание холестерина в норме в порциях А и С составляет 40-70 мг%, в пу­зырной желчи — 200-400 мг%. Уменьшение количества холестерина наблюда­ется при паренхиматозной желтухе, хроническом гепатите, исключая его холе-статический вариант, а также при пост-некротическом и портальном циррозе печени. Увеличение холестерина в желчи наблюдается при билиарном циррозе печени, желчнокаменной болезни, дискринии билиарной системы.

2.2.1 Определение холестерина

У здорового человека содержание холестерина в желчи в порции А 1,3— 2,8 ммоль/л, порции В — 5,2—15,6 ммоль/л, в порции С — 1,1—3,1 ммоль/л. Увеличение в порциях Аи В отмечается при желчнокаменной болезни, холецистите; уменьшение — при нарушении концентрационной способности желчного пузыря.

Метод определения общего холестерина основанный на реакции Либермана—Бурхарда (метод Илька)

Принцип метода

В сильнокислой безводной среде ХС взаимодействует со смесью серной, уксусной кислот и уксусного ангидрида. В ходе реакции ХС последовательно окисляется. При этом каждая стадия реакции сопровождается образованием молекулы ХС, которая имеет на одну двойную связь больше, чем соединение, из которого она образовалась. В результате конечного окисления иона 3,5-холестодиена получается окрашенное соединение, растворенное в серной кислоте и дающее максимум абсорбции при 410 и 610 нм. Из-за неустойчивости окраски соединения время фотометрирования должно быть точно выдержано.

Реакционная смесь со стандартным раствором ХС имеет изумрудный цвет. Однако пробы могут давать зеленый, голубой, бурый цвета. Кроме того, в реакции Либермана—Бурхарда свободный ХС и его эфиры образуют цветные комплексы с разным коэффициентом молекулярного поглощения. В случае высокого содержания эфиров ХС оптическая плотность оказывается более высокой. Поскольку на прямое определение ХС влияют многие факторы, реакцию ХС со смесью Либермана—Бурхарда нельзя считать специфичной.

2.2.2 Определение билирубина

Качественное определение билирубина. К 5 мл алкогольной вытяжки дуоденального содержимого, содержащей 1—2 капли аммиака, на 100 мл прибавляют 4—6 капель спиртового раствора (1:1000), уксуснокислого цинка и 1 каплю спиртового раствора (1 : 100) йода. Всю эту смесь взбалтывают. При наличии билирубина смесь приобретает сине-голубой цвет, переходящий в фиолетовый от добавления нескольких капель крепкой соляной кислоты. Количественное определение билирубина. При определении билирубина дуоденальное содержимое надо разбавить дистиллированной водой в 10—15 раз до светло-желтого цвета. Рекомендуют также уже готовую для колориметрирования жидкость развести спиртом в 2—3 раза. При исследовании окраска жидкости от избытка кислоты нередко принимает синеватый цвет и желтоватый, а также синий оттенок от повышенного количества щелочи. В том и другом случаях необходимо соответственно либо слегка подщелочить аммиаком воду, которой раз балтывают желчь, либо прибавить немного соляной кислоты. В центрифужную пробирку вливают 1 мл желчи, разведенной в 10—15 раз дистиллированной водой и 2 мл 96° спирта, смешивают и центрифугируют. В чистую маленькую пробирку вливают 1 мл этой отцентрифугированной прозрачной жидкости, 0,25 мл смеси диазореактивов 1 и 2 и 0,5 мл спирта. Покрасневшую в пробирке жидкость переливают в сосуд колориметра. В пустой клин колориметра наливают стандартный раствор и колориметрируют исследуемую жидкость.