2. Общие принципы применения тсх для контроля чистоты продукта и идентификации побочных продуктов в реакционной смеси
Приготовление раствора реакционной смеси. Разбавьте предварительно отобранную пробу реакционной смеси (около 1 мл раствора или небольшое количество (на кончике шпателя) кристаллов) петролейным эфиром до объема примерно 3 мл и хорошо перемешайте. В случае, если продукт плохо растворяется, немного подогрейте раствор. Если и при нагревании продукт не растворяется, добавьте к смеси 0,5 мл этилацетата.
Приготовление раствора очищенного продукта или «свидетеля». Растворите небольшое количество очищенного (перекристализованного или перегнанного) продукта или свидетеля в 3-5 мл петролейного эфира (концентрация полученного раствора должна составлять около 1 %), перемешайте. Если продукт не растворяется, аккуратно подогрейте раствор.
Приготовление элюента. Готовят примерно 5 мл элюента (состав элюента для конкретного вещества указан в методике синтеза). Налейте немного элюента в химический стакан на 25-50 мл. Слой элюента должен быть толщиной в несколько миллиметров (уровень элюента должен быть ниже уровня нанесения проб веществ). Накройте стакан стеклом.
Приготовление пластинки “Siluplast”. Отрежьте пластинку “Siluplast” размером 3 × 5 см. Старайтесь сделать это максимально аккуратно, чтобы не обсыпался силикагель на краях пластины, иначе фронт растворителя будет идти неровно, что существенно повлияет на качество разделения.
Промывка капилляра. Опустите капилляр в баночку с растворителем (элюентом), переверните капилляр, чтобы капля элюента смочила капилляр по всей длине, промокните капилляр фильтровальной бумагой. Повторите процедуру 2-3 раза.
Нанесение образцов. Опустите капилляр в приготовленный раствор и осторожно поставьте при помощи капилляра небольшую точку слева на пластинке примерно на 0,5-1 см выше нижнего края. Край капилляра, которым вы ставите точку, должен быть максимально ровным – если он будет сколот, то точка может получиться неровная или слишком большая.
Элюирование хроматограммы. Аккуратно при помощи пинцета поместите пластинку в стакан, накройте стакан стеклом и дайте элюенту подняться по пластинке. Когда фронт элюента будет на 5‑7 мм ниже верхнего края пластинки, достаньте пластинку из стакана, отметьте карандашом фронт элюента и дайте элюенту испариться с пластинки.
Способы проявление хроматограммы.
Проявление парами йода: поместите высохшую пластинку в склянку с кристаллическим йодом или адсорбировавшим йод силикагелем, встряхните склянку и подождите, пока на хроматограмме не появятся отчетливые пятна, после чего при помощи пинцета достаньте пластинку и аккуратно обведите карандашом проявившиеся пятна. При необходимости дальнейшего проявления другими реагентами аккуратно сдуйте адсорбированный йод феном.
Проявление спиртовым раствором фосфорномолибденовой кислоты: опустите высохшую пластинку на 1-2 секунды в спиртовой раствор фосфорномолибденовой кислоты так, чтобы пинцет не соприкасался с раствором (пинцет удерживает верхний край пластинки), после чего извлеките ее из раствора и быстро и равномерно прогрейте над хорошо разогретой плиткой (на расстоянии 5-10 см над плиткой). Не допускайте попадания проявляющего раствора на металлический пинцет, поскольку это может вызвать появление синих разводов вблизи пинцета, что ухудшит качество проявленной пластины. При нагревании пластины первоначально происходит высыхание пластинки за счет испарения этанола, пластинка становится светло-зеленой, при дальнейшем нагревании на пластине появляются фиолетовые пятна, соответствующие положению веществ на ней.
Проявление раствором перманганата калия: опустите высохшую пластинку в раствор перманганата калия на 1 секунду, после чего сразу или после проявления пятен на хроматограмме (указано в инструкции по проведению опыта) аккуратно промойте пластинку под сильной струей холодной воды.
Проявление раствором 2,4-динитрофенилгидразина: опустите высохшую пластинку в раствор 2,4-динитрофенилгидразина на несколько секунд. Достав пластинку, дайте ей высохнуть и аккуратно карандашом отметьте положение пятен на хроматограмме.
Если пятна на хроматограмме получились слишком интенсивными, большого размера, с «хвостами», то разбавьте соответствующий раствор в 2-3 раза и поставьте ТСХ снова.
Опыт 1. Контроль чистоты полученного продукта
На пластину ТСХ нанесите два образца: раствор реакционной смеси и раствор полученного вещества после очистки. Проведите элюирование, высушите и затем проявите хроматограмму. Проанализируйте полученные результаты и сделайте вывод о чистоте продукта, и эффективности использованного метода очистки (смотри рисунок 8 А).
Опыт 2. Обнаружение и идентификация побочных продуктов в реакционной смеси
На пластину ТСХ нанесите два образца: раствор реакционной смеси и раствор вещества «свидетель». Проведите элюирование, высушите и затем проявите хроматограмму. Проанализируйте полученные результаты сделать вывод о наличие этого вещества в реакционной смеси. В случае положительного результата предложите возможный путь образования этого вещества в данной реакции (смотри рисунок 8 Б).
|
|
А |
Б |
Рисунок 8 Примерный вид ТСХ пластинок после проявления: (А) для опыта 1 и (Б) для опыта 2