Техника окраски бактерий в гистологических срезах по Граму-Вейгерту
Депарафинированные срезы доводят до воды.
Окрашивают 20 мин в 1 % растворе парарозанилина или основного фуксина в 1 % уксусной кислоте (раствор красителя нагревают до кипения, охлаждают и фильтруют).
Промывают в 3 сменах дистиллированной воды.
Окрашивают 5 мин в 1 % кристаллического фиолетового в дистиллированной воде.
Быстро ополаскивают в 1 % растворе хлорида натрия.
Обрабатывают 30 с в смеси: 1 часть йода + 2 части йодида калия + 100 частей дистиллированной воды.
Промокают фильтровальной бумагой.
Дифференцируют, нанося на срез смесь равных объемов анилина и ксилола (1 — 2 мл); растворы сливают до тех пор, пока облачка красителя не перестанут отходить от среза.
Проводят через 3 смены ксилола.
Заключают в бальзам или любую смолу, растворенную в ксилоле.
Результат: грамположительные бактерии сине-черные, фибрин фиолетовый, ядра красные.
Окраска бактерий по по Цилю-Нильсену
Метод используется для окраски спор и кислотоустойчивых бактерий (микобактерии туберкулеза). Кислотоустойчивость связана с наличием в клеточной стенке мяколовых кислот. Метод Циль-Нильсена основан на использовании концентрированных красителей прогревания.
Методика окраски:
1. На фиксированный мазок накладывают белую фильтровальную бумагу и наливают карболовый фуксин Циля. Препарат 2-3 раза подогревают в в пламени до появления паров. |
Карболовый фуксин-основная краска; прогревание-протрава. |
2. Препарат промывают водой, бумагу сбрасывают. |
|
3. Препарат обесцвечивают в 5% растворе серной кислоты. |
Серная кислота-обесцвечивающий фактор. |
4. Промывают водой |
|
5. Докрашивают синькой Леффлера 3-5 минут |
Синька Леффлера — дополнительная краска |
6. Промывают водой, высушивают, смотрят под иммерсией |
Кислотоустойчивые бактерии и споры рубиново- красного цвета, а остальная микрофлора — синего цвета |
Окраска по по Ауески
Метод окраски спор бактерий, заключающийся в обработке препарата горячим 0,5% раствором соляной кислоты с последующей фиксацией и окраской по способу Циля — Нельсена; споры окрашиваются в рубиново-красный цвет, вегетативные формы — в синий.
Окраска по Муромцеву.
Влажные мазки или отпечатки фиксируют 1—2 часа в этиловом или метиловом спирте комнатной температуры или 15—20 минут в спирте, подогретом до 50—70". После промывания дистиллированной водой красят 5—10 минут синькой Мансона,разведенной в 40 раз.
Синька Мансона: в 100 мл кипящей воды растворить 5—8 г химически чистой буры, добавить 2 г метиленового синего. Окрашенный препарат, не промывая, дифференцируют 5—10 минут в водном растворе танина (5—10%). После приобретения препаратом голубоватого оттенка его промывают дистиллированной водой и подсушивают фильтровальной бумагой. Препарат проводят через абсолютный спирт или 50% смесь абсолютного спирта с ацетоном, после чего он готов для микроскопии.
В окрашенном этим способом препарате фон и цитоплазма клеток бледно-голубые, тельца Бабеша — Негри резко очерчены, фиолетовые с розовым оттенком, ядра синие, ядрышки темно-синие, эритроциты оранжево-красные.
Окраска по Морозову.
Приготовление реактивов и порядок окраски см (Серебрение по Морозову). При окраске этим методом элементарные тельца имеют вид темно-коричневых, почти черных зерен на светло-коричневом фоне.
Окраска по Селлеру.
Влажный мазок или отпечаток без фиксации 10 секунд окрашивают смесью из насыщенных растворов в метиловом спирте основного фуксина (3—5 мл) и метиленового синего (15 мл) и чистого метилового спирта (25 мл). Промывают проточной водой, сушат на воздухе, и препарат готов для микроскопии.
Тельца Бабеша — Негри пурпурно-красные, цитоплазма ядра и ядрышка синяя, эритроциты кирпично-красные.
Окраска по Пигаревскому.
Препарат, высушенный на воздухе в течение 10 минут и нефиксированный, окрашивают 1 минуту смесью, состоящей из насыщенных растворов метилового зеленого (3,2 мл), пиронина (6 мл), оранжевого Ж (1 мл) и дистиллированной воды (75 мл).
После промывания проточной водой дальнейшая окраска, как по Селлеру (см. выше).
При микроскопии протоплазма клеток сиреневого цвета, цитоплазматические включения ярко-красные.
Окраска по Павловскому.
Препараты окрашивают в течение 3—5 секунд красителем, приготовленным из 10 мл дистиллированной воды, 1 капли насыщенного спиртового раствора основного фуксина и 8 капель насыщенного спиртового или водного раствора метиленового синего.
Краситель смывают проточной водой и препараты высушивают на воздухе