- •Методичнi вказівки з мікробіологічної діагностики кашлюку та паракашлюку
- •1. Загальні положення
- •2. Характеристика мікробів роду Bordetella
- •3. Показання до лабораторного обстеження
- •4. Лабораторна діагностика
- •5. Доставка матеріалу й оформлення направлення
- •6. Бактеріологічний метод дослідження
- •7. Вивчення ферментативної активності
- •8. Дослідження атипових штамів бордетел
- •9. Терміни видачі і формулювання відповідей
- •10. Серологічна діагностика
- •10.4. Реакція аглютинації
- •11. Перспективні методи лабораторної діагностики*
- •12.Форми первинної облікової звітності
- •13. Збереження культур бордетел
- •13.1. Способи тривалого збереження (без пересівання) культур бордетел
- •13. 2. Збереження культур бордетел в напіврідкому ква (із кров'ю і без крові)
- •14 Вимоги безпеки
- •Характеристика мікробів роду Bordetella
- •Методи приготування поживних середовищ
- •1. Гідролізат казеїну
- •3. Екстракт дріжджів
- •4. Казеїново-вугільний агар
- •5. Середовище із сухого казеїново-вугільного агару (ква)
- •6. Картопляно-гліцериновий агар (середовище Борде-Жангу), (розрахунок на 4дм3 середовища)
- •7. Молочно-кров'яний агар
- •8. Поживний агар з тирозином
- •9.Середовище Сімонса
- •10. Бульйон Хоттінгера із сечовиною
- •11.Реактиви для визначення уреази (метод Закса)
- •12.Розчин для змочування тампонів
- •13. Приготування і стерилізація тампонів
- •14. Порядок використання антибіотиків
- •Контроль якості поживних середовищ
- •1.Методика кількісного визначення азоту
- •2. Підготовка культур збудника кашлюку для перевірки якості поживних середовищ
- •3.Контроль ростових якостей середовища із сухого казеїново-вугільного агару (ква)
11. Перспективні методи лабораторної діагностики*
Перспективним є впровадження сучасних експрес-методів:
1) імунофлюоресцентний - визначення антигенів збудника в слизі задньої стінки глотки;
2) латексна мікроаглютинація - визначення антигенів кашлюкової палички в слизі задньої стінки глотки.
3) імуноферментний аналіз (ІФА), за допомогою якого визначають антитіла класів імуноглобулінів М (ІgМ) і G(ІgG) у різні терміни захворювання. За допомогою методу ІФА можна визначати також антигени В. pertussis у слизі ротоглотки.
________________________________________________
*Застосовуються при наявності відповідних імунобіологічних препаратів
4) ПЛР – діагностика, в ході якої виявляють наявність ДНК кашлюкового мікроба у мокроті.
12.Форми первинної облікової звітності
Реєстрація матеріалу, що надходить на дослідження, відображається у журналі за ф.252/0 “Журнал реєстрації мікробіологічних і паразитологічних досліджень”, хід аналізу, результати досліджень повинні бути відображені в журналі за ф. 253/0 „Робочий журнал мікробіологічних досліджень”. Реєстрацію матеріалу і результатів серологічних досліджень проводять в журналі за ф.259/0 “Журнал реєстрації серологічних досліджень”.
13. Збереження культур бордетел
13.1. Способи тривалого збереження (без пересівання) культур бордетел
Для збереження культур бордетел готують наступні консервуючи суміші:
1) 80% розчин гліцерину в буферному фізіологічному розчині, простерилізованому в автоклаві при 1,3 атм. протягом 30 хвилин.
Буферний фізіологічний розчин готують, розчиняючи в 8дм3 дистильованої води NaCI - 69,2 г, Na2HPO4 - 15,36 г, КН2P04 - 3,52 г і автоклавують при 0,5 атм. протягом 30 хв. Розчин повинен мати рН - 7,2.
2) сахарозо-желатинове середовище (10% розчин сахарози і 1% розчин желатини).
Для приготування сахарозо-желатинового середовища попередньо готують 2 розчини: на водяній бані при температурі +55°С необхідно розчинити в 300см3 дистильованої води 10 г желатини (1 розчин) і в 300 см3 дистильованої води - 100 г сахарози (2 розчин). Потім обидва розчини з’єднують, доповнюють до 1дм3 дистильованою водою; встановлюють рН 7,0 розчином бікарбонату натрію і розливають у флакони. Флакони з готовим розчином стерилізують текучою парою в автоклаві 3 дні по 1 годині.
У стерильних аглютинаційних пробірках змішують по 2 см3 стерильного 80% розчину гліцерину в буферному фізіологічному розчині і сахарозо-желатинового середовища, поміщають на дно пробірки 3-4 петлі 3-х добової культури кашлюкового мікроба, закривають ватно-марлевою пробкою і зберігають у морозильній камері при температурі -30°С до 1 року. При висівах беруть петлею частину матеріалу з дна пробірки і висівають на середовище КВА з 3-4% крові, розтираючи шпателем.
13. 2. Збереження культур бордетел в напіврідкому ква (із кров'ю і без крові)
Приготування напіврідкого агару КВА. Казеїново-вугільний агар готується за прописом, але агар-агару додають 1г на 1 дм3 середовища (0,1%), розливають у пробірки (у кількості до 8см3) і стерилізують при 0,5 атм. 20хв. У напіврідкий КВА можна додати стерильну дефібриновану кров великої рогатої худоби або коня з розрахунку 0,5-1 см3 на 8см3 середовища.
Культуру бордетели засівають у середовище, витримують у термостаті 3-4 дні, а потім без пересівання зберігають у холодильнику або при кімнатній температурі протягом 1міс.
При збереженні культури збудника кашлюку на щільному середовищі КВА її пересівають через 10-14днів.
