- •Методичнi вказівки з мікробіологічної діагностики кашлюку та паракашлюку
- •1. Загальні положення
- •2. Характеристика мікробів роду Bordetella
- •3. Показання до лабораторного обстеження
- •4. Лабораторна діагностика
- •5. Доставка матеріалу й оформлення направлення
- •6. Бактеріологічний метод дослідження
- •7. Вивчення ферментативної активності
- •8. Дослідження атипових штамів бордетел
- •9. Терміни видачі і формулювання відповідей
- •10. Серологічна діагностика
- •10.4. Реакція аглютинації
- •11. Перспективні методи лабораторної діагностики*
- •12.Форми первинної облікової звітності
- •13. Збереження культур бордетел
- •13.1. Способи тривалого збереження (без пересівання) культур бордетел
- •13. 2. Збереження культур бордетел в напіврідкому ква (із кров'ю і без крові)
- •14 Вимоги безпеки
- •Характеристика мікробів роду Bordetella
- •Методи приготування поживних середовищ
- •1. Гідролізат казеїну
- •3. Екстракт дріжджів
- •4. Казеїново-вугільний агар
- •5. Середовище із сухого казеїново-вугільного агару (ква)
- •6. Картопляно-гліцериновий агар (середовище Борде-Жангу), (розрахунок на 4дм3 середовища)
- •7. Молочно-кров'яний агар
- •8. Поживний агар з тирозином
- •9.Середовище Сімонса
- •10. Бульйон Хоттінгера із сечовиною
- •11.Реактиви для визначення уреази (метод Закса)
- •12.Розчин для змочування тампонів
- •13. Приготування і стерилізація тампонів
- •14. Порядок використання антибіотиків
- •Контроль якості поживних середовищ
- •1.Методика кількісного визначення азоту
- •2. Підготовка культур збудника кашлюку для перевірки якості поживних середовищ
- •3.Контроль ростових якостей середовища із сухого казеїново-вугільного агару (ква)
8. Поживний агар з тирозином
До100см3 дистильованої води додають 3,5г сухого поживного агару і 0,1 г тирозину, розплавляють над полум’ям пальника, розливають у пробірки і стерилізують при 0,5 атм. 20-30 хвилин.
9.Середовище Сімонса
Для приготування середовища Сімонса беруть:
1) дистильована вода - 1дм3;
2)(NH4)2HP04 -1,5г;
3)КН2Р04 -1,0 г;
4) Mg04 х 7Н20 - 0,2г;
5)Na-цитрат -3,0г;
6) Агар-агар - 20,0г.
У половині кількості дистильованої води розчиняють фосфорнокислий амоній, фосфорнокислий калій і сірчанокислий магній. В іншій частині води розплавляють агар. З’єднують обидві частини, попередньо зливши з осаду. Додають лимоннокислий натрій нейтральний, встановлюють рН 7,1-7,2. Додають індикатор - 1,6% розчин бромтимолового синього - 9,4см3. Стерилізують при 0,5 атм. 30 хвилин.
10. Бульйон Хоттінгера із сечовиною
До 100 см3 бульйону Хоттінгера рН 7,0 додають 1 г сечовини і 0,2см3 1,6% спиртового розчину крезолового червоного, стерилізують текучою парою при 100°С протягом 15 хв. Посів роблять у 1см3 середовища петлею, витримують 24 години при 35-37°С.
11.Реактиви для визначення уреази (метод Закса)
Готують 2 реактиви. Реактив А: 2г сечовини,
2 см3 96° етилового спирту,
4см3 дистильованої води.
Реактив В: 1 см3 0,2% спиртового розчину фенол-рота,
0,1 г однозаміщеного фосфату калію (КН2РО4),
0,1 г двозаміщеного фосфату калію (К2НР04),
100 см3 дистильованої води,
0,5г хлористого натру.
Реактив А не стерилізують і зберігають при температурі 4 - 10°С, реактив В стерилізують в автоклаві текучою парою. Перед уживанням змішують 1 частину реактиву А та 19 частин реактиву В.
12.Розчин для змочування тампонів
У конічній колбі змішують 90-95 см3 попередньо приготовленого 1/15 М розчину Na2HPO4 (11,876 г на 1дм3 дистильованої води) і 5-10см3 розчину КН2Р04 (9,078 г на 1дм3 дистильованої води); до цієї суміші додають 0,5 г агар-агару, стерилізують при 1 атм. 20 хв. Потім у гарячу суміш додають 0,2 г активованого вугілля (наважку вугілля стерилізують окремо). Суміш готують про запас і зберігають у холодильнику до 2-х місяців.
13. Приготування і стерилізація тампонів
13.1.Сухі ватні тампони: на один кінець металевого дроту, що легко згинається, щільно намотують шар гігроскопічної вати. Довжина намотки повинна бути - 4-5 см (щоб уникнути аспірації вати). Кінець дроту з намотаною ватою (1-2см) згинають під тупим кутом 110-1200. Інший кінець дроту монтують у коркову або ватну пробку. Виготовлений тампон поміщають у пробірку і стерилізують в автоклаві при (112±1)°С протягом 30 хв. або в сушильній шафі при температурі 140-150°С протягом години.
13.2.Зволожені тампони: готують з дроту, що не іржавіє і легко згинається (краще алюмінієвого). Намотування вати, згинання і стерилізацію проводять так, як вказано для сухих тампонів. Стерильні тампони перед уживанням змочують у суміші (див. п.12) шляхом дворазового занурення в пробірку з рідиною. Після змочування тампона його поміщають у пробірку, а потім використовують для взяття матеріалу. Зберігати 3 дні в умовах холодильника.
