3. Екстракт дріжджів

Свіжі хлібні дріжджі (пресовані) у кількості 1 кг суспендують у 1дм³ дистильованої води, стерилізують текучою парою (100°С) протягом 30 хв., потім відстоюють у холодильнику (+4°С) протягом 3-6 діб. Надосадову рідину декантують (обережно зливають), розливають у флакони і знову стерилізують при 100°С протягом 30 хвилин. Зберігають дріжджовий екстракт у холодильнику.

4. Казеїново-вугільний агар

Для приготування 1дм³ середовища КВА необхідні наступні інгредієнти:

1) казеїновий гідролізат - з розрахунку, щоб у готовому середовищі містилося 30-150 мг% амінного азоту (розрахунок кількості гідролізату приводиться нижче);

2)КН2Р04 - 0,5г;

3)MgCl₂ - 0,4г або 2 см³ 20% розчину;

4)крохмаль розчинний -1,5г;

5) СaСl₂ - 0,01 г або 1 см³ 1% розчину;

6)FeS0₄ - 0,01 г або 1 см³ 1% розчину;

7)CuS0₄ -0,005 г або 1 см³ 0,5% розчину;

8) цистин або цистеїн - 0,03г чи 2cм³ 1,5% розчину;

L і LD - форми

9) дріжджовий діалізат або дріжджовий екстракт – 100 см³;

10) агар-агар -22г;

11) вугілля активоване -Зг;

Кількість гідролізату казеїну, яку беруть для приготування казеїново-вугільного агару, не є постійною, а змінюється в залежності від вмісту амінного азоту. Кількість гідролізату, яку варто взяти для приготування середовища, визначають у такий спосіб: якщо, наприклад, у казеїновому гідролізаті міститься 800 мг% амінного азоту, а у виготовленому середовищі повинно міститися його 150 мг%, то роблять розрахунок:

(1000 см³ * 150 мг%) / 800 мг% ==187 см³ гідролізату на 1дм³ середовища.

Казеїновий гідролізат і дистильовану воду (приблизно 600 см³) змішують в емальованій каструлі відповідної ємкості і нейтралізують 20% їдким натром до рН 7,0 за бромтимоловим синім (до зеленого кольору). Потім вносять наважки різних солей за прописом. Крохмаль попередньо розчиняють у невеликій порції гарячої води і вносять у вигляді розчину. Агар-агар промивають під струменем водопровідної води протягом декількох годин або замочують на 1-2 години і вносять у суміш, після чого кип’ятять 10 хв. для розплавлення агар-агару. Потім до суміші додають цистин або цистеїн, дріжджовий діалізат або дріжджовий екстракт. Встановлюють рН 7,3 і вносять активоване вугілля, ретельно перемішуючи. Середовище розливають у флакони або пробірки. Стерилізують при 110°С протягом 20хв. Середовище у флаконах після стерилізації охолоджують до 45-50°С, ретельно перемішують для рівномірного розподілу вугілля і розливають у чашки, а середовище в пробірках після охолодження і перемішування, скошують. Середовище, що залишилося про запас, у флаконах (матрацах) у міру необхідності розтоплюють на водяній бані або апараті Коха (текучою парою) до повного розплавлення агару. Зайве прогрівання середовища не рекомендується. Готове середовище повинне мати чорний колір, конденсаційна вода не повинна містити часток вугілля. Середовище, розлите в чашки Петрі, зберігається в холодильнику протягом тижня.

Для поліпшення якості поживного середовища одночасно з цистіном можна додати 0,03 г проліну або глютаміну на 1 дм³ середовища.