- •Разработка люминесцентного метода выявления эндоспор у бактерий
- •«Вятский государственный университет» (фгбоу впо «ВятГу»)
- •Задание на дипломную работу
- •Календарный план работы
- •Реферат
- •Содержание
- •Введение
- •Обзор и анализ научно-технической информации
- •1 Роль спорообразующих бактерий в биотехнологии
- •2. Физиологические и морфологические изменения, сопровождающие споруляцию и прорастание спор
- •2.1 Условия и стадии споруляции
- •2.2 Свойства зрелых спор, прорастание спор
- •3 Споруляционные белки проспоры, споры и материнской клетки
- •4 Препараты фиксированных окрашенных клеток и спор микроорганизмов
- •4.1 Приготовление мазка и фиксация препарата
- •4.2 Методы, основанные на использовании для окраски эндоспор бактериологических красителей
- •4.2.1 Метод Циля-Нильсена
- •4.2.2 Метод Ожешко
- •4.2.3 Метод Шеффера-Фултона
- •4.3 Способы негативного окрашивания эндоспор
- •4.4 Прижизненное выявление эндоспор при помощи фазово-контрастной микроскопии
- •4.5 Методы люминесцентной окраски эндоспор
- •5. Выводы по обзору научно-технической и патентной информации
- •Техническое и социально-экономическое обоснование темы. Задачи дипломной работы
- •Основная часть
- •1 Материалы и методы
- •1.1 Микробные тест-культуры
- •1.2 Питательные среды, растворы и реактивы
- •1.3 Оборудование и приборы
- •1.4 Методы исследований
- •2 Разработка люминесцентного метода выявления эндоспор
- •2.1 Изучение диагностической эффективности известных методов окраски эндоспор
- •2.2 Разработка люминесцентного метода выявления эндоспор
- •2.3 Сравнение диагностической эффективности методов окраски эндоспор бактериологическими красителями и разработанного метода
- •3 Выводы по разделу
- •1 Структура декомпозиции работ по уровням
- •2 Организационная структура проекта
- •3 Ресурсы
- •4 Таблицы назначений ресурсов по операциям
- •5 Расчет стоимости операций
- •6 Бюджет затрат
- •7 Выводы по разделу
- •Безопасность жизнедеятельности
- •1 Экологическое обоснование темы дипломной работы
- •2 Свойства применяемых реактивов и препаратов
- •3 Потенциальные опасности при выполнении экспериментальной части работы
- •4 Разработка мероприятий по безопасному проведению работ
- •4.1 Организация рабочего места
- •4.2 Меры безопасности при работе с реактивами
- •4.3 Меры безопасности при работе со стеклянной посудой
- •4.4 Меры безопасности при работе с электроприборами
- •4.5 Меры безопасности при работе с микроорганизмами
- •4.6 Промышленные средства индивидуальной защиты
- •4.7 Первая доврачебная помощь при химических и термических ожогах
- •5 Производственная санитария
- •5.1 Санитарно-гигиеническая характеристика лаборатории
- •5.2 Метеоусловия
- •5.3 Отопление
- •5.4 Вентиляция
- •5.5 Освещение
- •5.6 Водоснабжение
- •5.7 Канализация
- •5.8 Пожарная профилактика
- •6. Выводы по разделу
- •Заключение
- •Приложение 1
- •Авторская справка
- •Приложение 2
- •Перечень принятых определений и терминов
- •Приложение 3
- •Перечень принятых обозначений и сокращений
- •Приложение 4
- •Люминесцентный метод окраски бактериальных эндоспор
- •Приложение 5
- •Приложение 6
- •Приложение 7
- •Список использованных источников
Введение
С целью идентификации микроорганизмов в микробиологических лабораториях изучают не только форму и размеры бактериальной клетки, но и отдельные элементы ее структуры: цитоплазму, включения, нуклеотид, оболочку, капсулу, жгутики, споры. Бактериальные эндоспоры представляют собой покоящиеся формы клеток, в которых процессы жизнедеятельности сильно заторможены. Они имеют многослойную оболочку, содержат мало свободной воды и поэтому хорошо переносят различные неблагоприятные воздействия, губительные для вегетативных клеток. Современная бактериология располагает довольно обширным набором методом выявления эндоспор. Условно их можно разделить на четыре группы. Первую, самую обширную группу, составляют методы, основанные на использовании для окраски эндоспор бактериологических красителей с последующим исследованием полученных препаратов при помощи обычных светопольных микроскопов проходящего света. Для окраски эндоспор препарат обрабатывают концентрированными растворами красителей при нагревании. Чтобы установить расположение споры в клетке, добиваются контрастного окрашивания споры и остальной части клетки. Все способы окраски спор основаны на едином принципе: сначала споры обрабатывают различными веществами, повышающими проницаемость споровой оболочки: хромовой, соляной, серной, уксусной кислотами, аммиаком, едким натром или перекисью водорода, затем окрашивают клетку со спорой при нагревании и, наконец, обесцвечивают цитоплазму и дополнительно окрашивают ее контрастным красителем. Вторую группу методов составляют способы негативного окрашивания эндоспор. При окрашивании негативными красителями среда, в которой находятся микроорганизмы, становится полупрозрачной; в результате микроорганизмы, в которые краситель не проникает, выглядят как светлые частицы на равномерно темном фоне. К третьей группе методов можно отнести способы прижизненного выявления эндоспор при помощи фазово-контрастной микроскопии. Такие способы наблюдения отличаются важными преимуществами. Для их реализации нет необходимости в красителях, протравах и веществах, используемых для обесцвечивания цитоплазмы клетки. Однако, широкому распространению данных методов препятствует близость показателей светопреломления бактериальных эндоспор и включений поли-β-оксимаслянной кислоты, что в некоторых случаях может привести к ошибкам диагностики. Четвертую группу составляют методы люминесцентной окраски эндоспор. Однако, вследствие использования для флюорохромирования эндоспор берберин-сульфата, являющегося труднодоступным реактивом, который не производится в нашей стране, указанные методы не нашли широкого применения в лабораторной практике.
Таким образом, разработка нового метода окраски бактериальных эндоспор, который был бы прост в исполнении и нагляден, является актуальной задачей.
Целью данной работы является изучение особенностей наиболее известных методик окраски эндоспор и разработка люминесцентного метода выявления эндоспор, позволяющего получать наиболее информативные препараты. Для достижения поставленной цели необходимо:
изучить особенности наиболее известных методик окраски бактериальных эндоспор;
экспериментально установить степень влияния химических реактивов (фиксаторов, протрав, красителей) на результаты окрашивания;
на основании полученных результатов предложить метод окраски бактериальных эндоспор, основанный на использовании флюорохромов и люминесцентного микроскопа.