- •Разработка люминесцентного метода выявления эндоспор у бактерий
- •«Вятский государственный университет» (фгбоу впо «ВятГу»)
- •Задание на дипломную работу
- •Календарный план работы
- •Реферат
- •Содержание
- •Введение
- •Обзор и анализ научно-технической информации
- •1 Роль спорообразующих бактерий в биотехнологии
- •2. Физиологические и морфологические изменения, сопровождающие споруляцию и прорастание спор
- •2.1 Условия и стадии споруляции
- •2.2 Свойства зрелых спор, прорастание спор
- •3 Споруляционные белки проспоры, споры и материнской клетки
- •4 Препараты фиксированных окрашенных клеток и спор микроорганизмов
- •4.1 Приготовление мазка и фиксация препарата
- •4.2 Методы, основанные на использовании для окраски эндоспор бактериологических красителей
- •4.2.1 Метод Циля-Нильсена
- •4.2.2 Метод Ожешко
- •4.2.3 Метод Шеффера-Фултона
- •4.3 Способы негативного окрашивания эндоспор
- •4.4 Прижизненное выявление эндоспор при помощи фазово-контрастной микроскопии
- •4.5 Методы люминесцентной окраски эндоспор
- •5. Выводы по обзору научно-технической и патентной информации
- •Техническое и социально-экономическое обоснование темы. Задачи дипломной работы
- •Основная часть
- •1 Материалы и методы
- •1.1 Микробные тест-культуры
- •1.2 Питательные среды, растворы и реактивы
- •1.3 Оборудование и приборы
- •1.4 Методы исследований
- •2 Разработка люминесцентного метода выявления эндоспор
- •2.1 Изучение диагностической эффективности известных методов окраски эндоспор
- •2.2 Разработка люминесцентного метода выявления эндоспор
- •2.3 Сравнение диагностической эффективности методов окраски эндоспор бактериологическими красителями и разработанного метода
- •3 Выводы по разделу
- •1 Структура декомпозиции работ по уровням
- •2 Организационная структура проекта
- •3 Ресурсы
- •4 Таблицы назначений ресурсов по операциям
- •5 Расчет стоимости операций
- •6 Бюджет затрат
- •7 Выводы по разделу
- •Безопасность жизнедеятельности
- •1 Экологическое обоснование темы дипломной работы
- •2 Свойства применяемых реактивов и препаратов
- •3 Потенциальные опасности при выполнении экспериментальной части работы
- •4 Разработка мероприятий по безопасному проведению работ
- •4.1 Организация рабочего места
- •4.2 Меры безопасности при работе с реактивами
- •4.3 Меры безопасности при работе со стеклянной посудой
- •4.4 Меры безопасности при работе с электроприборами
- •4.5 Меры безопасности при работе с микроорганизмами
- •4.6 Промышленные средства индивидуальной защиты
- •4.7 Первая доврачебная помощь при химических и термических ожогах
- •5 Производственная санитария
- •5.1 Санитарно-гигиеническая характеристика лаборатории
- •5.2 Метеоусловия
- •5.3 Отопление
- •5.4 Вентиляция
- •5.5 Освещение
- •5.6 Водоснабжение
- •5.7 Канализация
- •5.8 Пожарная профилактика
- •6. Выводы по разделу
- •Заключение
- •Приложение 1
- •Авторская справка
- •Приложение 2
- •Перечень принятых определений и терминов
- •Приложение 3
- •Перечень принятых обозначений и сокращений
- •Приложение 4
- •Люминесцентный метод окраски бактериальных эндоспор
- •Приложение 5
- •Приложение 6
- •Приложение 7
- •Список использованных источников
7 Выводы по разделу
Таким образом, вся сумма затрат на разработку оптимизированного метода окраски бактериальной оболочки составила 18560,14 руб. Наибольшие затраты пришлись на трудовые ресурсы (82,96%). Стоимость материалов – 0,99%, затраты на электроэнергию составили 13,19%, а на амортизацию оборудования 2,86% от затрат на проведение всей исследовательской работы.
Вся экспериментальная часть была разбита на составные части – операции. Самые дорогостоящие операции – это отбор проб микроорганизмов, окрашивание мазков и микроскопия. Затраты на их проведение превышают 1000 руб. Операции, на которые было затрачено меньше всего денежных ресурсов (менее 100 руб.) - высев проб на среду, макроскопическое исследование колоний, описание колоний. Такие различия стоимости операций связаны с длительностью операции (что отражается на стоимости трудовых ресурсов, затраченных на операцию), а также с наличием/отсутствием необходимости использования оборудования и материалов.
На проведение всех исследований потребовалось 22 дней. На определенных стадиях работы была запланирована занятость до 2-х человек, две из операций (выращивание культур микроорганизмов в термостате, длительность – 2-е суток и спорообразование, длительность – 3-е суток) были осуществлены без трудовых затрат.
Безопасность жизнедеятельности
1 Экологическое обоснование темы дипломной работы
Современная бактериология располагает довольно обширным набором методом выявления эндоспор. Условно их можно разделить на четыре группы. Первую, самую обширную группу, составляют методы, основанные на использовании для окраски эндоспор бактериологических красителей с последующим исследованием полученных препаратов при помощи обычных светопольных микроскопов проходящего света. Вторую группу методов составляют способы негативного окрашивания эндоспор. К третьей группе методов можно отнести способы прижизненного выявления эндоспор при помощи фазово-контрастной микроскопии. Четвертую группу составляют методы люминесцентной окраски эндоспор с последующим исследованием окрашенных препаратов при помощи люминесцентной микроскопии. Эта группа методов отличается высокой чувствительностью по сравнению с другими способами микроскопического выявления эндоспор. Однако, вследствие использования для флюорохромирования эндоспор берберин-сульфата, являющегося труднодоступным реактивом, который не производится в нашей стране, указанные метода не нашли широкого применения в лабораторной практике.
Целью нашей работы являлась разработка нового люминесцентного метода выявления эндоспор с использованием более доступных флюорохромов.
2 Свойства применяемых реактивов и препаратов
Предельно допустимая концентрация (ПДК), класс опасности веществ и характер их токсического действия приведены в таблице 19.
Таблица 19. Классификация опасности веществ по степени воздействия на организм [45, 46]
Наименование вещества |
Токсическое действие веществ |
ПДКм.р,мг/м3 |
ПДКс.с.,мг/м3 |
ПДКр.з.,мг/м3 |
Класс опасности |
|
С2Н5ОН спирт этиловый (ж., аэр.) |
При вдыхании пары вещества могут оказывать наркотическое воздействие (сначала вызывает возбуждение, а затем паралич ЦНС). При приеме внутрь в зависимости от дозы возможно отравление. При длительном воздействии больших доз может вызывать заболевание нервной системы. |
5 |
5 |
1000 |
4 |
|
NaCI (п.) |
Раздражение слизистых, кожные сыпи |
- |
- |
- |
4 |
|
H2SO4 серная кислота (ж., аэр.) |
Поражает кожу, слизистые оболочки, дыхательные пути (вызывает химические ожоги). При вдыхании паров вызывает затруднение дыхания, кашель, нередко — ларингит, трахеит, бронхит и т. д.
|
0,3 |
0,1 |
1,0 |
2 |
|
HCl соляная кислота (ж., аэр.) |
Поражает кожу, слизистые оболочки, дыхательные пути (вызывает химические ожоги). При вдыхании паров вызывает затруднение дыхания, кашель, нередко — ларингит, трахеит, бронхит и т. д.
|
0,2 |
0,01 |
5,0 |
2 |
|
Примечание: ПДК - такая концентрация химических элементов и их соединений в окружающей среде, которая при повседневном влиянии в течение длительного времени на организм человека не вызывает патологических изменений или заболеваний, устанавливаемых современными методами исследований в любые сроки жизни настоящего и последующего поколений. 1. ПДКм.р.- предельно допустимая максимально разовая концентрация химического вещества в воздухе населенных мест, мг/м3. Это концентрации вредных вредных вещнеств, не вызывающие рефлекторных реакций организма. 2. ПДКс.с. – предельно допустимая среднесуточная концентрация, мг/м3. Это концентрация вредных веществ, не оказывающая прямого или косвенного вредного воздействия на организм человека в условиях неопределенно долгого круглосуточного вдыхания. 3. ПДКр.з. – предельно допустимая концентрация химического вещества в воздухе рабочей зоны, мг/м3. Это концентрации вредных веществ, которые при ежедневной работе в течение 8 часов (кроме выходных дней), но не более 40 часов в неделю, в течение всего трудового стажа не могут вызвать заболеваний или отклонений в состоянии здоровья, обнаруживаемых современными методами диагностики как в процессе работы, так и в отдельные периоды жизни настоящего и последующих поколений. |
||||||
Факторы, перечисленные в таблице, в зависимости от количественной характеристики и продолжительности действия, могут быть причиной острого заболевания или внезапного ухудшения здоровья, смерти. Но так как в данной работе эти вещества использовались в небольших концентрациях, опасности для исследователя они не представляют.
Кроме того, суспензия микроорганизмов может оказывать на организм аллергическое и сенсибилизирующее действие.
В ходе выполнения работы применялся этанол, который относится к взрывопожароопасным веществам [47, 48].
Таблица 20. Пожароопасные свойства этилового спирта
Название вещества |
Температура вспышки, С |
Температура воспламенения, С |
Концентрационные пределы воспламенения вещества воздухе |
|
Нижний, |
Верхний, % |
|||
Этиловый спирт |
13 |
404 |
3.6 |
19.8 |
