Календарный план работы

1. Теоретические и экспериментальные исследования – январь – март 2013 г.

2. Оформление пояснительной записки и графической части – апрель – май 2013 г.

3. Подготовка к защите – май 2013 г.

4. Предъявление выполненной работы на рецензию – июнь 2013 г.

Руководитель ____________________ Исполнитель_____________________

Реферат

Бетехтина Н. Н. Разработка люминесцентного метода выявления эндоспор у бактерий: Дипломная работа / ВятГУ, каф. микробиологии: рук. профессор, д.м.н. Золотарев А. Г.. – Киров, 2013. – 147 с., 18 рисунков, 25 таблицы, 67 источников, 7 приложений.

БАКТЕРИАЛЬНЫЕ ЭНДОСПОРЫ, ОКРАШЕННЫЕ ПРЕПАРАТЫ МИКРООРГАНИЗМОВ, РОД BACILLUS, МЕТОДЫ ОКРАСКИ ЭНДОСПОР, ЛЮМИНЕСЦЕНТНАЯ МИКРОСКОПИЯ

Объект исследования – Bacillus cereus, Bacillus thuringiensis, Bacillus licheniformis.

Цель работы - изучение особенностей наиболее известных методик окраски эндоспор и разработка люминесцентного метода выявления эндоспор.

В результате проведенных исследований была получена количественная информация об эффективности существующих в микробиологической практике методов окраски бактериальных оболочек.

Разработан люминесцентный метод окраски. Проведены исследования по оценке чувствительности и содержанию эндоспор в мазках, окрашенных классическими методами и разработанным методом.

Содержание

Введение…………………………………………………………………………10

Обзор и анализ научно-технической и патентной информации……………..12

1 Роль спорообразующих бактерий в биотехнологии………………………..12

1.1 Род Bacillus…………………………………………………………………..12

1.2. Род Clostridium……………………………………………………………...15

2 Физиологические и морфологические изменения, сопровождающие споруляцию и прорастание спор……………………………………………….16

2.1 Условия и стадии споруляции……………………………………………...17

2.2 Свойства зрелых спор и прорастание спор………………………………..20

3 Споруляционные белки проспоры, споры и материнской клетки………....22

4 Препараты фиксированных окрашенных клеток и спор микроорганизмов.24 4.1 Приготовление мазка и фиксация препарата………………………………24

4.2 Методы, основанные на использовании для окраски эндоспор бактериологических красителей………………………………………………..27

4.2.1 Метод Циля-Нильсена…………………………………………………….28

4.2.2 Метод Ожешко…………………………………………………………….29

4.2.3 Метод Шеффера-Фултона………………………………………………...30

4.3 Способы негативного окрашивания эндоспор…………………………….30

4.4 Прижизненное выявление эндоспор при помощи фазово-контрастной микроскопии……………………………………………………………………..31

4.5 Методы люминесцентной окраски эндоспор……………………………...32

5 Выводы по обзору научно-технической и патентной информации………..36

Техническое и социально-экономическое обоснование темы. Задачи дипломной работы……………………………………………………………….37

Основная часть…………………………………………………………………...38

1 Материалы и методы…………………………………………………………..38

1.1 Микробные тест-культуры………………………………………………….38

1.2 Питательные среды, растворы и реактивы………………………………...40

1.3 Оборудование и приборы…………………………………………………...43

1.4 Методы исследований……………………………………………………….43

2 Разработка люминесцентного метода выявления эндоспор………………..49

2.1 Изучение диагностической эффективности известных методов окраски эндоспор………………………………………………………………………….49

2.2 Разработка люминесцентного метода выявления эндоспор……………...51

2.3 Сравнение диагностической эффективности методов окраски эндоспор бактериологическими красителями и разработанным методом……………...57

3 Выводы по разделу…………………………………………………………….60

Организационно-экономический раздел……………………………………….62

1 Структура декомпозиции работ по уровням…………………………………62

2 Организационная структура проекта…………………………………………65

3 Ресурсы…………………………………………………………………………67

4 Таблицы назначений ресурсов по операциям………………………………..69

5 Расчет стоимости операций…………………………………………………...72

6 Бюджет затрат………………………………………………………………….79

7 Выводы по разделу…………………………………………………………….82

Безопасность жизнедеятельности………………………………………………84

1 Экологическое обоснование темы дипломной работы……………………...84

2 Свойства применяемых реактивов и препаратов……………………………84

3 Потенциальные опасности при выполнении экспериментальной части работы…………………………………………………………………………….87

4 Мероприятия по безопасному проведению работы………………………....89

4.1 Организация рабочего места………………………………………………..89

4.2 Меры безопасности при работе с реактивами……………………………..91

4.3 Меры безопасности при работе со стеклянной посудой………………….92

4.4 Меры безопасности при работе с электроприборами……………………..93

4.5 Меры безопасности при работе с микроорганизмами…………………….95

4.6 Средства индивидуальной защиты…………………………………………96

4.7 Первая доврачебная помощь при термических и химических ожогах…..97

5 Производственная санитария…………………………………………………99

5.1 Санитарно-гигиеническая характеристика лаборатории………………….99

5.2 Метеоусловия………………………………………………………………...99

5.3 Отопление…………………………………………………………………….99

5.4 Вентиляция…………………………………………………………………...99

5.5 Освещение…………………………………………………………………..101

5.6 Водоснабжение……………………………………………………………..103

5.7 Канализация………………………………………………………………...103

5.8 Пожарная профилактика…………………………………………………...103

6 Выводы по разделу…………………………………………………………..104

Заключение……………………………………………………………………...106

Приложение 1 – Авторская справка…………………………………………..108

Приложение 2 – Перечень принятых определений и терминов…………….109

Приложение 3 – Перечень принятых обозначений и сокращений………….110

Приложение 4 – Люминесцентный метод окраски бактериальных эндоспор………………………………………………………………………...112

Приложение 5 – Доклад………………………………………………………..114

Приложение 6 – Презентация………………………………………………….120

Приложение 7 – Список использованных источников………………………142