2.3 Сравнение диагностической эффективности методов окраски эндоспор бактериологическими красителями и разработанного метода

Для решения вопроса о целесообразности использования разработанного метода в практике микробиологических исследований представилось необходимым испытать его эффективность в сопоставлении с известными методиками.

Из каждой тест-культуры готовили мазки в строгом соответствии с разработанной методикой окраски. Полученные препараты исследовали под микроскопом. Затем сравнивали полученные результаты с результатами, полученными с помощью бактериологических красителей. Результаты анализа представлены в таблице 7 и на рисунке 11.

Таблица 7. Содержание спор в мазках, окрашенных классическими методами с помощью бактериологических красителей, и мазках, окрашенных флюорохромами, ,%.

Вид бактерий	Количество спор, выявленное при микроскопии мазков, окрашенных по методу
	Циля-Нильсена	Ожешко	Шеффера-Фултона	Люминесцентный метод
Bacillus cereus	73±0,3	49±0,2	68±0,2	68±0,3
Bacillus licheniformis	33±0,1	18±0,1	30±0,1	34±0,1
Bacillus thuringiensis	83±0,1	54±0,2	80±0,3	82±0,2

Рисунок 11. Содержание окрашенных спор в мазках, окрашенных различными способами. 1 – окраска по Цилю-Нильсену; 2 – окраска по Ожешко; 3 – окраска по Шефферу-Фултону; 4 – окраска люминесцентным методом.

В сравнительных экспериментах разработанного метода в сопоставлении с известными классическими методами окраски эндоспор, основанными на применении бактериальных красителей, было установлено, что результаты, полученные при помощи разработанного метода, совпадают либо превышают результаты классических методов окраски.

При сравнении чувствительности разработанного метода и классических методов выявления эндоспор готовили суспензии тест-культуры Bacillus thuringiensis в физиологическом растворе хлористого натрия, содержащие в 1 мл 1 млрд. микробных тел по стандарту мутности ГИСК. Производили ряд последовательных разведений и делали мазки из этих разведений. Высушенные и зафиксированные над пламенем спиртовки мазки окрашивали в соответствии с методом Шеффера-Фултона и разработанным методом. При микроскопировании подсчитывали количество спор в одном поле зрения. Результаты исследования представлены в таблице 8.

Таблица 8. Содержание спор в одном поле зрения.

Метод выявления эндоспор	Количество окрашенных спор в одном поле зрения при микроскопии суспензии с концентрацией (ОК)
	109	108	107	106	105	104	103
Люминесцентный метод	146	95	32	14	13	5	-
Метод Шеффера-Фултона	129	71	24	9	3	-	-
Метод Циля-Нильсена	142	88	25	15	7	-	-

На основании проведенного эксперимента можно судить, что разработанный метод является более чувствительным по сравнению с методом Шеффера-Фултона и методом Циля-Нильсена, что дает основания рекомендовать его для применнеия в практике микробиологических исследований.

Рисунок 12. Культура Bacillus cereus, окрашенная различными методами. А – окраска по Цилю-Нильсену; Б – окраска по Ожешко; В – окраска по Шефферу-Фултону; Г – окраска люминесцентным методом.