1.2 Питательные среды, растворы и реактивы

Для проведения исследований использовали следующие растворы и реактивы:

1. Плотная питательная среда МПА (пропись 1);

2. Среда Лурия-Бертани (LB) с добавлением солей (пропись 2);

3. Физиологический раствор хлористого натрия 0,85% (пропись 3);

4. Карболовый фуксин Циля (пропись 4);

5. Метиленовый синий Леффлера(пропись 5);

6. Малахитовый зеленый водный раствор (пропись 6);

7. Фуксин Пфейфера (пропись 7);

8. Раствор Люголя (пропись 8);

9. Кристаллический фиолетовый 0,01-0,02% водный раствор (пропись 9);

10. Раствор аурамина ОО (пропись 10);

11. Раствор корифосфина (пропись 11);

12. Солянокислый спирт 0,5% раствор (пропись 12);

13. Соляная кислота 0,5% раствор (пропись 13);

14. Серная кислота 5% раствор (пропись 14);

15. Вода дистиллированная;

16. Этиловый спирт 96%;

17. Масло иммерсионное.

Пропись 1. Приготовление питательной среды МПА

Готовят на основе мясопептонного бульона (МПБ). МПБ: к мясной воде прибавляют 1 % пептона и 0,5 % х.ч. натрия хлорида, кипятят на слабом огне 10 – 15 минут до растворения веществ, устанавливают нужный рН и снова кипятят 30 – 40 минут до выпадения осадка. Фильтруют, доливают до первоначального объема водой и стерилизуют 20 минут при 120ºС. Мясопептонный агар: к готовому бульону (до стерилизации или после нее) добавляют 2 – 3 % измельченного агар-агара и кипятят, помешивая, на слабом огне до полного расплавления агара. МПА можно варить в автоклаве или аппарате Коха. Готовую среду, если нужно, осветляют, фильтруют и стерилизуют 20 мин при 120 ºС.

Пропись 2. Приготовление среды Лурия-Бертани (LB) с добавлением солей

В дистиллированной воде растворяют 1% бакто-триптона, 0,5% дрожжевого экстракта, 1% х.ч. NaCl и 1,8% бактоагара. Также в расчете на 1 л среды добавляют 0,5 г MgSO₄, 0,1 г CaCl₂, 0,1 г MnSO₄. Доводят рН до 7. Стерилизуют 20 мин при 120º С.

Пропись 3. Приготовление физиологического раствора хлористого натрия 0,85%

8,5 г хлористого натрия растворяют в 1 дм³ дистиллированной воды, тщательно перемешивают, разливают в колбы по 250 мл и автоклавируют при температуре 121^оС в течение 45 мин [32].

Пропись 4. Приготовление карболового фуксина Циля

1 г основного фуксина растирают в ступке до порошкообразного состояния, прибавляя небольшими порциями 5 г карболовой кислоты и по каплям (15— 20 капель) химически чистый глицерин. Во время растирания приливают понемногу 10 мл спирта, а затем 90 мл дистиллированной воды. Выдерживают 2 суток при комнатной температуре и пропускают через бумажный фильтр. Раствор очень стойкий. Для приготовления фуксина Циля можно также брать 10 мл насыщенного спиртового раствора основного фуксина и 100 мл 5% карболовой кислоты [32].

Пропись 5. Приготовление метиленового синего Леффлера

30 мл насыщенного спиртового раствора (8-9 г метиленовый синий и 100 мл 96% этиловый спирт) фильтруют через бумажный фильтр, прибавляют 1 г едкого кали и разводят 99 мл дистиллированной воды.

Пропись 6. Приготовление водного раствора малахитового зеленого

К 5 г порошка малахитового зеленого нужно добавить 1 дм³ дистиллированной воды и полученную смесь тщательно перемешать.

Пропись 7. Приготовление фуксина Пфейффера

К 1 части фуксина Циля прибавляют 9 частей дистиллированной воды. При хранении фуксин нестоек, поэтому готовят его только по мере надобности.

Пропись 8. Приготовление раствора Люголя

Йод кристаллический – 1г;

йодид калия (KJ) – 2г;

дистиллированная вода – 300 мл.

Иодид калия растворяют в 5-10 см³ дистиллированной воды, вносят кристаллический йод, оставляют на несколько часов до полного растворения, затем доводят раствор водой до 300 см³.

Пропись 9. Приготовление водного раствора кристаллического фиолетового

20 мг кристаллического фиолетового растворяют в 100 мл дистиллированной воды. Тщательно перемешивают.

Пропись 10. Приготовление раствора аурамина ОО

В 100 мл дистиллированной воды растворяют 0,3 г фенола, тщательно перемешивают. Затем к этому раствору добавляют 0,1 г аурамина ОО. Перемешивают, хранят во флаконах с темным стеклом.

Пропись 11. Приготовление раствора корифосфина

В 100 мл дистиллированной воды растворяют 0,01 г корифосфина. Перемешивают, хранят во флаконах с темным стеклом.

Пропись 12. Приготовление раствора солянокислого спирта

Концетрированную соляную кислоту разводят в 74 раза 70%-м этанолом.

Пропись 13. Приготовление 0,5%-го раствора соляной кислоты.

Концентрированную соляную кислоту разводят в 74 раза дистиллированной водой. Кислоту тонкой струйкой приливают в воду, избегая разбрызгивания.

Пропись 14. Приготовление 5%-го раствора серной кислоты

Концетрированную серную кислоту разводят дистиллированной водой в соотношении 1:18. Кислоту тонкой струйкой приливают в воду, избегая разбрызгивания.