Подсчет количества эритроцитов в счетной камере

Принцип метода. В строго определенном объеме камеры подсчитывают под микроскопом клеточные элементы, а затем производят пересчет полученного результата на 1 л крови.

Оснащение: дезраствор, средства индивидуальной защиты, микроскоп, камера Горяева, пробирки, дозаторы на 4,0 мл и 0,02 мл, исследуемый материал, бланки общего анализа крови.

Реактивы: 9 г/л (0,9%) раствор хлорида натрия.

Алгоритм действий:

1. В сухую чистую пробирку отмерить 4 мл изотонического раствора хлорида натрия.

2. Внести в опытную пробирку с изотоническим раствором хлорида натрия 0,02 мл крови.

3. Содержимое пробирки перемешать и оставить стоять до момента счета.

4. Подготовить камеру Горяева для подсчета эритроцитов.

5. Перед заполнением камеры содержимое пробирки еще раз перемешать.

6. Пастеровской пипеткой или дозатором нанести каплю разведенной крови на среднюю пластинку камеры у края покровного стекла. Проверить равномерность растекания капли, отсутствие пузырьков воздуха.

7. Положить камеру на стол на 1-2 мин, пока движение жидкости в ней не прекратится, и эритроциты не осядут.

8. Включить микроскоп.

9. Посчитать эритроциты при малом увеличении микроскопа (объектив 8, окуляр 10 или 15, конденсор опущен, диафрагма прикрыта) в 5 больших расчерченных квадратах, расположенных по диагонали.

10. Расчет количества эритроцитов одном мкл крови произвести по формуле:

Х = а * 4 000 * 200

80

где Х — количество эритроцитов в 1 мкл крови, а — сумма сосчитанных эритроцитов, 4000 — множитель, приводящий результат к 1 мкл крови, так как объем малого квадрата равен 1/4000 мкл, 200 — разведение крови.

После проведения арифметического действия формула упрощается:

Х = а * 10 000.

Таким образом, количество эритроцитов в одном литре крови:

Х = а * 10 000 * 10⁶ = а * 10¹²/л

Определение количества лейкоцитов

Алгоритм определения лейкоцитов крови в камере горяева:

1. В сухую чистую пробирку отмеряют 0,4 мл 3% уксусной кислоты, подкрашенной метиленовым синим или генцианвиолеттом.

2. Дозатором набирают 0,02 мл крови.

3. Вносят данную кровь на дно пробирки с 0,4 мл 3% уксусной кислоты (разведение в 20 раз).

4. Содержимое пробирки перемешивают и оставляют стоять до момента счета.

5. Готовят камеру Горяева, притирая шлифованное стекло до радужных колец.

6. Перед заполнением содержимое пробирки перемешивают несколько раз, вращая пробирку между ладонями.

7. Концом круглой стеклянной палочки или пастеровской пипеткой наносят каплю разведенной крови на среднюю пластинку камеры у края покровного стекла.

8. Проверяют равномерность растекания капли, отсутствие пузырьков воздуха.

9. Перед подсчетом камера лежит на столе 1-2 минуты, пока движение жидкости в ней не прекратится, и лейкоциты не осядут.

10. Подсчитывают лейкоциты при малом увеличении микроскопа (объектив 8, окуляр 10 или 15, конденсор опущен, диафрагма прикрыта) в 100 больших квадратах, сгруппированных по четыре.

11. Расчет общего количества лейкоцитов проводят по формуле:

Х = а * 20/100 * b,

где Х — число лейкоцитов в 1 мл крови

a — число посчитанных лейкоцитов

b — объем одного большого квадрата (4,0 х 10^-3 мкл)

20 — разведение крови

100 — число больших квадратов, в которых производится счет.

Введя в эту формулу значения объема одного большого квадрата, получим:

Х = а * 20 / 100 * (4 * 10^-3) и а * 20 / 400 * 10^-3 = а * 50 / мкл.

Таким образом, количество лейкоцитов в 1 мкл равно числу клеток, посчитанных в 100 больших квадратах, умноженному на 50:

Х = а * 50 / мкл

Отсюда количество лейкоцитов в одном литре крови:

Х = а * 50 * 10⁶ / л

12. Полученные результаты заносят в бланк исследования.

2 способ:

Автоматические гематологические анализаторы. Лейкоциты (WBC — White Blood Cells, белые кровяные клетки).