
- •3.Получение гипериммунных сывороток и производство гамма-глобулинов (иммуноглобулинов).
- •3.1.Основные положения пассивной защиты /иммунизации/.
- •3.2. Производство Ig-препаратов.
- •3.2.1. Гомологичные антисыворотки.
- •3.2.2. Гетерологичныеантисыворотки.
- •Различные стадии обработки при изготовлении иммуноглобулиновых препаратов.
- •3.3.Проверка активности и безвредности Ig-препратов.
- •4.Гибридомная техника и получение моноклональных антител.
- •4.1.Принципы слияния соматических клеток.
- •4.2.Способы получений моноклональных антител.
- •4.3.Производство и применение моноклональных антител.
Характерная особенность вирусов – их способность включать в состав наружной оболочки антигенные структуры клетки-хозяина. Эта особенность определяет и последующий характер взаимодействия вируса с новым хозяином.
Многие вирусы не разрушают инфицированные клетки. При этом наблюдается генетическая и биохимическая интеграция вирусных и клеточных компонентов, в результате которой вирус становится не отличимым от клеточных культур хозяина. Это форму взаимоотношений вируса и хозяина можно отнести к мутуалистическому симбиозу, полезному обоим симбионтам. Но их паразитохозяинные отношения очень лабильны и пример тому состояние лизогении.
Известна группа заболеваний, названных медленными вирусными инфекциями. Их могут вызывать обычные /вирус бешенства/ и необычные, медленные /реовирусы, онкорно-/ вирусы. Особенность этих инфекций – длительный инкубационный период, медленное прогрессирующее течение, сопровождаемое поражением иммунной или центральной нервной систем, ведущее к летальному исходу. Иммунитет /антитела/ либо не защищает хозяина /скрепи, виесна-меди/, либо совсем не образуется. Природа агентов, вызывающих эти заболевания и их патогенез окончательно не изучены.
3.Получение гипериммунных сывороток и производство гамма-глобулинов (иммуноглобулинов).
3.1.Основные положения пассивной защиты /иммунизации/.
Под пассивными прививками понимают искусственный медикаментозный перенос иммунокомпетентной активности от иммунных доноров к неиммунным реципиентам. Практическое значение до сих пор в ветеринарии имеет передача антител. Перенос же иммунокомпетентных клеток, медиаторов и других субстанций до сих пор не имеет широкого распространения.
Антитела получают либо от видогомологичных, либо от видогетерологичных доноров. Помимо этого в последние годы их стали получать в соответствующих клеточных структурах /моноклональные антитела/. В настоящее время вместо нативных гипериммунных сывороток для пассивной иммунизации все чаще стали использовать их очищенные фракции. Раньше их называли «гамма-глобулины», а теперь принято международное их обозначение «иммуноглобулины» /Ig/.
История пассивной иммунизации с целью специфической профилактики и терапии инфекционных болезней начинается с конца XIXвека и связана с именем Эмиля Беринга /1860/, получившего иммуносыворотки против дифтерии и столбняка.
Большинство антибактериальных, антивирусных и антитоксических антител находятся в IgG– фракции сыворотки крови. Помимо нее они так же могут находиться в IgMи IgA, в незначительном объеме IgB. При иммунизации обычно образуется Ig.
Все антитела, в конечном счете, ответственны за блокировку антигенов, которая реализуется через простые или весьма антиген-антитело-реакции в организме животного. Такие реакции в большинстве случаев приводят к безвредному устранению микроорганизма или защищают организм определенное время от инфекции. В исключительных случаях она приводит к вредным явлениям. В таких случаях иммунологический исход разрещается известными гуморальными реакциями, а также развитием «иммунокомплексных заболеваний».
Пассивная иммунизация, как искусственная мера защиты от инфекционных болезней, существует как крупное научное достижение, однако как феномен природы она постоянно присутствует и действует. Поэтому новорожденные в первые опасные для них недели жизни /неонатальный возраст/ хорошо противостоят многим микроорганизмам, благодаря передаче антител при естественных условиях от матерей своему потомству – через матку /трансплацентарно/ или через молозиво /белок яйца/ с материнскими иммуноглобулинами. К концу неонатального периода /фазы/ колостральный иммунитет более или менее уменьшается и затем – исчезает.
Выраженность пассивного иммунитета у новорожденных животных зависит от состояния гуморального иммунитета матерей, их молочности и материнских характеристик /достоинств/. Хороший материнский иммунитет защищает их потомство против всех возбудителей, с которыми она в процессе жизни сталкивалась и защищалась, в особенности, если в момент родов она имела высокий гуморальный иммунитет.
В крови млекопитающих в зависимости от титра на 1-3-й дни жизни их можно обнаружить в течение нескольких дней до 8-ми недель, после чего они вновь становятся полностью чувствительными к инфекционным болезням.
Вид переноса на молодняк антител, проходящий от кормящих матерей, зависит от конкретного вида животных и его характерной структуры плаценты. В ходе развития /эволюции/ ряда видов животных материнская плацента по числу гистологических слоев постепенно перестраивалась в сторону улучшения передачи веществ плоду – от трофогенной /пассивная передача молока/ в пользу диаплацентарной передачи иммунотел новорожденному. Более того диаплацентарная передача и передача с молоком могут дополнять друг друга.
Оральная искусственная аппликация антител, подобно естественному процессу, применяется исключительно редко из-за быстрого распада в кишечнике и потери действенности /за исключением сосунов в первые дни жизни/. Но такие антитела могут быть эффективными при локальной кишечной инфекции в любом возрасте.
Ценность пассивной иммунизации и иммунотерапии стала особо бесспорной, после того как были определены условия для проявления их эффективности. Гуморальные антитела образуют совместно с клеточными факторами специфическую защиту против возбудителей инфекции. Только при болезнях, при которых гуморальные антитела представляют собой первичный иммунологический защитных механизм, они также могут быть действенными при искусственной аппликации – парентеральном введении.
Этот прогноз /ожидание/ оправдывается на практике /в деле/ при всех бактериальных инфекциях, при которых в качестве патогенетических факторов выступают экзотоксины /хламидиозы/, эндотоксины /энтеробактерии/ и помимо этого – при всех циклических инфекциях /сибирская язва, рожа, пастереллез, особенно вирусные болезни/. Лучший результат имеют антительные препараты при профилактическом применении, а терапевтический эффект при вирусных болезнях – вообще проблематичен.
Во всяком случае, для хорошего действия необходимо, чтобы антительные препараты после аппликации как можно быстрее и в достаточном количестве проникли в кровь. При внутримышечном введении их поступает в кровь около 30-50% от заданного количества /остальные разрушаются в месте введения/, поэтому прибегают к повторному введению их в больших количествах хотя бы в первые 2 дня. Быстрое действие и возможность высокой концентрации обеспечивается при внутривенном введении препарата. Но период их полураспада при таком способе введения составляет от 6 до 17-ти дней, тогда как при внутримышечном – 3-4 недели. Гетерологические антитела, как все чужеродные протеины, удаляются быстрее, чем гомологичные.
Прямое введение Ig-препаратов в локальный процесс /орально, аэрозольно, назально/ вполне допустимо и в специальных случаях все чаще применяется. Новые достижения по местному иммунитету обозначили целые направления разработки Ig-препаратов с секреторными антителами.