Билет №3

1. Фазово-контрастный микроскоп. Устройство, применение.

Метод фазово-контрастной микроскопии основан на том, что живые клетки и микроорганизмы, слабо поглощающие свет, тем не менее способны изменять фазу проходящих через них лучей (фазовые объекты). В разных участках клеток, отличающихся показателем преломления и толщиной, изменение фаз будет неодинаковым. Эти разности фаз, возникающие при прохождении видимого света через живые объекты, можно сделать видимыми с помощью фазово-контрастной микроскопии.

Фазово-контрастная микроскопия осуществляется с помощью обычного светового микроскопа и специального приспособления, куда входят фазово-контрастный конденсор с кольцевыми диафрагмами и фазовая пластинка, имеющая форму кольца. Луч света, пройдя через прозрачный объект, расщепляется на два луча: прямой и дифрагированный (преломленный). Прямой луч, проникнув через частицу, фокусируется на кольце фазовой пластинки, а дифрагированный луч как бы огибает частицу, не проходя через нее. Поэтому оптические пути их различны и между ними создается разность фаз. Она сильно увеличивается с помощью фазовой пластинки и благодаря этому контрастность изображения повышается, что позволяет наблюдать не только фазовые объекты целиком, но и детали строения, например, живых клеток и микроорганизмов.

2. Простые методы окраски – фиксированный мазок окрашивают каким-либо одним красителем, промывают водой, высушивают,микроскопируют). Например водный фуксин Пфейффера и метиленовый синий Леффлера. При окраске метиленовым синим по Леффлеру гранулы волютина дифтерийных коринебактерий приобретают темно-синий цвет.

3. Характеристика палочковидных бактерий и заболевания, вызываемые ими.

Палочковидные бактерии различаются по размерам ( могут быть мене 1 мкм(Brucella) или превышать 3мкм (Clostridium)), форме концов клетки(заострены, закруглены, обрублены, кокковидной или овоидной формы) и взаимному .расположению клеток. Чаще всего палочковидные бактерии располагаются хаотично (шигелла, сальмонелла, кишечная палочка). Могут располагаться попарно – диплобактерии (клепсиелла), в виде цепочек различной длины(стрептобактерии, например, возбудитель сибирской язвы). Только палочковидные бактерии, вызывающие заболевания человека, могут образовыватьспоры как форму сохранения в окр. среде : клостридии и бациллы (см. выше).

Задача.

Из крови больного с подозрением на токсоплазмоз приготовлен тонкий мазок. Какой метод окраски необходимо использовать? Какие морфологические признаки имеет возбудитель?

Ответ:

Окраску по Романовскому-Гимзе: ядро окрасится в рубиново-красный цвет, цитоплазма в голубой.

Характерная форма – апельсиновая долька или полумесяц размером 4-7 * 1,5 – 2 мкм. Относятся к типу Apicomplexa , класс Кокцидии.

Билет №4

1. Морфология, ультраструктура и химический состав бактерий. Протопласты и сферопласты. Основные отличия эукариот и прокариот.

Обязательные компоненты бактерий:

- клеточная стенка. Функции – образуют форму бактерий, защита, транспорт, антигены, окраска по Граму.

В соответствии с окраской по Граму выделяют грам+ и грам- микроорганизмы.

Стенка грам+ бактерий сохраняет комплекс генциана фиолетового и йода и окрашивается в сине-фиолетовый цвет. Грам- бактерии не сохраняют этот комплекс и после окраски фуксином приобретают розовый цвет.

Грам+ бактрии содержат много муреина и тейхоевые кислоты. Грамм- бактерии – содержат липополисахарид, мало муреина.

- цитоплазматическая мембрана. При повреждении клетка гибнет. ЦПМ состоит из белков и фосфалипидов

- цитоплазма. В ней находятся рибосомы, нуклеоид (ядерное вещество), включения (гликогена, крахмала, зерна Волютина).

Необязательные компоненты:

- капсула состоит из полисахаридов или белков

- жгутика состоят из белка флагеллина

- реснички –

-споры – неактивная форма бактерий.

Протоплаты – полностью лишенные клеточной стенки

Сферопласты – частично лишены клеточной стенки.

Основные отличия эукариотов и прокариотов.

Клетки прокариот от отличии от эукариот имеют более простое строение. У прокариот нет организованного ядра (нуклеод). У эукариот – есть. У прокариот рибосомы мельче, нет митохондрий (есть мезосомы) и комплекса Гольджи.

2. Окраска по Романовскому-Гимзе.