Практическая работа №4 Изучение различных видов гемолиза

Гемолизом называется разрушение эритроцитов с выходом гемоглобина в плазму крови. Гемолизированная кровь прозрачна, её называют лаковой. Под микроскопом в ней не видно эритроцитов, так как они разрушены Гемолизированная кровь не выполняет своей основной дыхательной функции.

Цель работы: изучить различные виды гемолиза.

Оснащение: штатив с пятью пробирками, пипетки, физиологический раствор, дистиллированная вода, 0,1% раствор НС1, 5% раствор аммиака, раствор сапонина, 5 мл. цитратной крови любого животного (в пробирке).

Проведение работы. В штатив ставят пять пробирок, в каждую из которых наливают по 3 мл соответственно физиологического раствора, дистиллированной воды, растворов НCl, аммиака и сапонина. Во все пять пробирок вносят пипеткой по две капли цитратной крови и перемешивают содержимое. Рассматривая содержимое всех пяти пробирок, сравнивают результаты. На наличие гемолиза эритроцитов указывает прозрачность раствора.

Оформление протокола. Определите наличие или отсутствие гемолиза в каждой из пробирок. Опишите механизм гемолиза для каждого случая.

Практическая работа №5 Определение группы крови в системе аво

Для предотвращения осложнений при переливании крови вследствие реакции агглютинации необходимо предварительно определять группу крови человека.

Цель работы: определить группы крови в системе АВО (с помощью цоликлонов).

Оснащение: цоликлоны, стерильный скарификатор, две стеклянные палочки, стандартные сыворотки групп I, II, III; кафельная белая плитка, вата, спирт, йод, эфир. Объект исследования — человек.

Проведение работы. Группы крови определяют по свойствам эритроцитов, которые устанавливают с помощью стандартных сывороток, содержащих известные агглютинины (антитела).

На кафельную плитку наносят, не смешивая, по одной капле стандартных сывороток I, II и III групп, содержащих соответственно следующие агглютинины: I-α и β, II-β и III - α. Затем, получив каплю крови из пальца, первой стеклянной палочкой переносят небольшое количество её в каплю сыворотки I группы, вторым чистым концом этой же палочки такое же количество крови переносят в сыворотку II группы. При помощи второй стеклянной палочки третью каплю исследуемой крови переносят в сыворотку III группы. Каждый раз кровь тщательно размешивают в капле сыворотки, пока смесь не станет равномерно розоватого цвета. Реакция агглютинации наступает через 1-5 мин. При наличии агглютинации капля утрачивает гомогенность и становится прозрачной, а эритроциты склеиваются в виде комочков. Группу крови устанавливают в зависимости от наличия или отсутствия агглютинации.

1. Если агглютинации нет во всех трёх каплях, это свидетельствует об отсутствии агглютиногенов в эритроцитах исследуемой крови и, следовательно, она принадлежит I (0) группе.

2. Если агглютинация произошла с сыворотками I и III групп, содержащими соответственно агглютинины α + β и α, то эритроциты исследуемой крови содержат агглютиноген А и эта кровь принадлежит II (А) группе.

3. Если агглютинация произошла с сыворотками I и II групп, содержащими агглютинины α + β и β, то эритроциты исследуемой крови содержат агглютиноген В и она принадлежит III (В) группе.

4. Если агглютинация произошла с сыворотками I, II и III групп, содержащими соответственно α + β, β и α агглютинины, то эритроциты исследуемой крови содержат как агглютиноген А, так и агглютиноген В. Следовательно, исследуемая кровь принадлежит IV (АВ) группе.

В последнее время определение групп крови человека системы АВО проводят с помощью цоликлонов Анти-А и Анти-В (антитела моноклональные Анти-А и Анти-В), которые применяют или взамен или параллельно с поликлональными иммунными сыворотками. Моноклональные Анти-А и Анти-В антитела продуцируются двумя мышиными гибридомами и принадлежат к иммуноглобулинам класса М. Цоликлоны изготавливаются из асцитной жидкости мышей-носителей анти-А и анти-В гибридом. Технология изготовления реагента исключает возможность его контаминации патогенными для человека вирусами.

Таблица 1. Оценка результатов определения групп крови с применением цоликлонов

Результаты реакции с цоликлоном		Группа крови
Анти-А	Анти-В
-	-	0 (1)
+	-	А (II)
-	+	В(III)
+	+	АВ (IV)

Проведение работы. Нанесите на пластину индивидуальными пипетками цоликлоны Анти-А и Анти-В по одной большой капле. Рядом с каплями антител нанесите по одной маленькой капле исследуемой крови. Наблюдайте за ходом реакции с цоликлонами визуально при лёгком покачивании пластины в течение 3 минут. Агглютинация эритроцитов с цоликлонами обычно наступает в первые 3-5 сек, но наблюдение следует вести 3 мин ввиду более позднего появления агглютинации с эритроцитами, содержащими слабые разновидности антигенов А или В. Положительный результат выражается в агглютинации эритроцитов. При отрицательной реакции капля остаётся равномерно окрашенной в красный цвет.

Знаком плюс (+) обозначено наличие агглютинации, знаком минус (-) - отсутствие агглютинации.

Оформление протокола. Запишите, к какой группе крови принадлежит ваша кровь. Определите: реципиентам с какими группами крови можно переливать вашу кровь и кровь какой группы можно переливать вам?

Ситуационные задачи для определения конечного уровня знаний студентов:

Задача№1

При длительном голодании у людей появляются так называемые голодные отёки. В чём причина?

Задача №2

Человек съел недоброкачественную пищу. Через некоторое время у него обнаруживается повышение вязкости в крови. Чем можно объяснить это?

Задача№3

При исследовании крови обнаружено, что 80% гемоглобина составляет фетальный гемоглобин. Кому принадлежит кровь?

Задача №4

При подсчёте в больших квадратах камеры Горяева оказалось 580 эритроцитов. Сколько их содержится в 1мл крови, если кровь в меланжер набиралась до метки 0,5?

Задача №5

В 25 больших квадратах камеры Горяева оказалось 100 лейкоцитов. Сколько их содержится в 1мм³ крови, если она набиралась в меланжер до метки 0,5?

Задача №6

В 1мм³ крови содержится 6млн. эритроцитов. Сколько всего их в циркулирующей крови, если 20% всей крови находится в кровяном депо? Вес тела принять за 80кг.

Задача №7

В результате переливания несовместимой группы крови произойдет склеивание эритроцитов, что в дальнейшем приведет к гемолизу. Назовите вид гемолиза?

Задача №8

Почему женщинам запрещено работать на производстве с высоким уровнем вибрации, водить большегрузные машины и т.д.?

Задача №9

В чём причина увеличения билирубина в крови при отравлении уксусной кислотой?

Задача №10

Кровь отца резус-положительная, матери резус-отрицательная, первая беременность. Существует ли опасность резус-конфликта матери и плода, если плод имеет резус-положительную кровь?

Задача №11

Отец имеет резус-отрицательную кровь, мать – резус-положительную. У плода резус-фактора нет. Существует ли опасность резус-конфликта между плодом и матерью?

Задача №12

Почему при остром психическом стрессе может произойти инфаркт миокарда?

Задача №13

Свёртывание крови представляет собой сложный многокомпонентный «каскадный» ферментативный процесс. Нормальное протекание каждой предшествующей фазы обеспечивает развитие и завершение каждой последующей. Что происходит в первую, вторую и третью фазы коагуляционного гемостаза? Что включает послефаза гемокоагуляции?

Задача №14

Для нормального протекания свёртывания крови необходим ряд факторов: протромбин, тромбопластин, АС – глобулин, ионизированный кальций, проконвертин и др. Назовите фактор, участие которого необходимо для протекания всех фаз гемокоагуляции. Какой фактор обеспечивает превращение растворимого фибрин – полимера в нерастворимый фибрин? Где образуется протромбин? Какие факторы принимают участие в образование плазменной и тканевой протромбиназ?