- •А.В. Куяров, л.А. Клюева медицинская иммунология
- •Куяров а.В., Клюева л.А. Медицинская иммунология: Метод. Указания. Сургут: Изд-во СурГу, 2006. 32 с.
- •Содержание
- •Занятие 1
- •Основные вопросы занятия
- •Самостоятельная работа студентов
- •Методические указания к заданию 2
- •Занятие 2
- •Основные вопросы занятия
- •Занятие 3
- •Основные вопросы занятия
- •Занятие 4
- •Основные вопросы занятия
- •Занятие 5
- •Основные вопросы занятия
- •Занятие 6
- •Вопросы к контрольному занятию
- •Медицинская иммунологии Методические указания
- •626400, Россия, Ханты-Мансийский автономный округ,
- •Рекомендуемая литература
Занятие 2
Тема. Этапы развития иммунологии. Виды невосприимчивости. Факторы неспецифической резистентности. Физико-химическая защита. Иммунобиологическая защита
Студент должен знать:
Этапы развития иммунологии.
Факторы естественной (неспецифической) резистентности организма от инфекции.
Студент должен уметь:
Определить и произвести учет общей бактерицидной активности кожи, сыворотки крови, комплемента, лизоцима и биологических жидкостей, фагоцитоза, НСТ-теста
Основные вопросы занятия
Этапы развития иммунологии. Определение иммунитета. Виды иммунитета. Видовой и индивидуальный, врожденный и приобретенный иммунитет.
Защитные механизмы и факторы естественной резистентности.
Барьерные и бактерицидные свойства кожи, слизистых оболочек.
Определение индекса бактерицидности кожи, кожный дисбиоз.
Значение нормальной микрофлоры.
Лизоцим, его природа, механизм действия. Методика определения содержания лизоцима в биологических жидкостях. Интерферон.
Общая бактерицидная активность сыворотки, метод определения.
Комплемент, его свойства, компоненты в естественном иммунитете. Пропердин. Механизм действия.
Естественные антитела, природа, значение. Роль микрофлоры и антигенов пищи.
Фагоцитоз как клеточный фактор иммунитета. Роль И.И. Мечникова в изучении фагоцитоза. Виды фагоцитирующих клеток, стадии фагоцитоза. Незавершенный фагоцитоз.
Постановка опыта фагоцитоза. Определение активности, интенсивности и завершенности реакции. Опсоно-фагоцитарная реакция. Механизм действия хемотаксических агентов на фагоцитоз.
Особенности биохимии фагоцитов при фагоцитозе.
Система интерферона
Самостоятельная работа студентов
Задание 1. Определение общей бактерицидной активности сыворотки крови (БАСК).
В опыт берут 1.0 мл исследуемой сыворотки и 0,1 мл 1-миллиардной микробной взвеси. Делают два посева на чашки Петри с питательной средой - наносят по 1 петле и растирают шпателем. Один посев делают сразу после смешивания культуры с сывороткой (контроль), а второй – после инкубации в термостате в течение 30 минут.
Учет проводят через сутки после инкубации.
О бактерицидной активности судят по количеству колоний тест-культуры (кишечной палочки, стафилококка), выросших в среде, засеянной взвесью после совместной инкубации с сывороткой по сравнению с контрольной суспензией по формуле:
БАСК = А – Б × 100 %,
А
где А – число колоний в опытной чашке;
Б - число колоний в контрольной чашке.
Клиническое значение. Постановкой опыта определения БАСК выявляют уровень совокупного действия ряда гуморальных защитных факторов (комплемента, пропердина, лизоцима, нормальных антител, В-лизинов).
Задание 2. Определение содержания лизоцима в биологических жидкостях.
Ингредиенты |
Номера пробирок |
||||||||
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
8 |
||
Физраствор |
2,4 |
1,0 |
1,0 |
1,0 |
1,0 |
1,0 |
1,0 |
1,0 |
|
Исследованный субстрат (слюна) |
0,1 |
|
|
|
|
|
|
|
|
Смесь слюны с физраствором |
1,0→ |
1,0→ |
1,0→ |
1,0→ |
1,0→ |
1,0→ |
1, 0 вылить |
контроль |
|
Полученные разведения |
1 25 |
1 50 |
1 100 |
1 200 |
1 400 |
1 800 |
1 1600 |
- |
|
Тест-культура M. luteus |
1,0 |
1,0 |
1,0 |
1,0 |
1,0 |
1,0 |
1,0 |
1,0 |
|
Выдержать при t 37 Со в течение 2 часов |
|||||||||
Результат* |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Заключение: Оценить состояние естественной резистентности у исследуемого. Каковы возможные причины снижения естественной резистентности? |
|||||||||
Примечание: * - Присутствие лизоцима определяется по полному просветлению содержимого пробирки. При наличии растворения микробов содержимое пробирки стало прозрачным – плюс, помутнение – минус; титр лизоцима – последнее (наибольшее) разведение слюны, в котором жидкость в пробирке еще прозрачна.
Задание 3. Изучение демонстрации фагоцитоза
Найти в готовых мазках различные стадии фагоцитоза. Зарисовать.
Рассмотреть окрашенные мазки из гноя больного гонореей. Найти поле зрения, где внутри лейкоцитов много фагоцитированных гонококков (незавершенный фагоцитоз).
Зарисовать.
Задание 4. Оценить результаты НСТ-теста в готовых препаратах.
Методические указания к практическому заданию 4
НСТ-тест Бактерицидная активность фагоцитирующих клеток во многом определяется ферментным набором клетки. Поэтому косвенные показатели нарушения бактерицидной активности можно получить при определении различных клеточных ферментов, характеризующих окислительные процессы (пероксидаза и др.). Для этих целей используется реакция восстановления нитросинего тетразолия. НСТ-тест основан на учете отложений в клетке диформазана – нерастворимой формы восстановленного нитросинего тетразолия, что является показателем бактерицидной функции фагоцитов. К позитивным относятся клетки с четко выраженными темно-синими отложениями диформазана. Нейтрофилы с пылевидными гранулами считаются неактивными. У здоровых людей число спонтанно активных нейтрофилов не превышает 10 %. При использовании стимулятора число активированных нейтрофилов в норме – 40 - 80%. Клиническое значение. НСТ-тест используется для дифференцировки бактериальных и вирусных инфекций со сходной клиникой. При вирусной инфекции достоверно увеличивается количество нейтрофилов, восстанавливающих НСТ. |
Задание 5. Изучить бактерицидную активность собственной кожи методом агаровых отпечатков.
Время исследования |
Количество колоний |
Индекс бактерицидности |
После нанесения культуры Через 10 минут |
|
|
Заключение: Соответствует ли индекс бактерицидности значениям нормы? Каковы возможные причины снижения бактерицидности кожи? |
||
Методические указания к практическому заданию 5
Метод агаровых отпечатков На кожу ладонной стороны предплечья нанести пипеткой одну каплю культуры кишечной палочки. Распределить жидкость стерильным стеклянным шпателем. Сделать первый отпечаток с кожи пластинкой с питательной средой и зафиксировать время. Экспозиция контакта микробов и кожи 10 минут. Сделать второй отпечаток с кожи (рядом с первым, но не с того же участка). Чашки со стеклами – отпечатками поместить в термостат на 24 часа. Подсчитать количество выросших колоний на пластинках из расчета на 1 см2 (считать не менее чем в трех полях). Определить индекс бактерицидной (ИБ - это доля погибших микробов в процентах) активности кожи по формуле: ИБ = 100 – А×100 , Б где: А - 1-я пластинка (число колоний после нанесения культуры, пример 75 + 90 + 85, среднее 83,3); Б - 2–я пластинка (пример, число колоний через 10 минут контакта с кожей 2 + 4 + 6, среднее 4). ИБ = 100 – 4 × 100 = 95, 2 % 83,3 В норме бактерицидная активность кожи должна быть не ниже 85 %.
|
Задание 6. Определить количество С3 компонента комплимента сыворотки в демонстрационных препаратах.
Методические указания к практическому заданию 5
Определение количества СЗ компонента комплемента сыворотки. Для количественной оценки фракций комплемента, в том числе и СЗ фракции, используется простая радиальная иммунодиффузия в геле. В пластиковые чашки вносят расплавленный чистый агар (агар Difko или агарозу), смешанный с диагностической моноспецифической сывороткой к третьему компоненту комплемента (СЗ) человека. После застывания агара в нем вырезают лунки диаметром 2 мм и в них вносят микрошприцем по 2 мкл исследуемых сывороток. Иммунодиффузию проводят во влажной камере при температуре 20 °С в течение суток. В контрольные лунки вносится стандартная сыворотка, содержащая известное количество СЗ компонента комплемента. Через сутки оценивают результат иммунодиффузии по измерению диаметра зоны преципитации вокруг лунки с внесенной исследуемой сывороткой. Расчет концентрации СЗ компонента комплемента проводится по калибровочной кривой, построенной по результатам измерения диаметра зон преципитатов разных разведении стандартной сыворотки.
Пример: Диаметр зоны преципитации, см Количество СЗ компонента , мг/мл
0,32 0,4 0,42 1,6 0,55 3,2 0,65 6,4 0,82 12,9
|
Заключение: Состояние естественной резистентности у обследуемого. Что может быть причиной изменений? |