Ход работы

Опыт 1 Ферментативный гидролиз крахмала под действием амилазы

В девять пробирок наливают по 2 мл воды и прибавляют по 2 капли 0,1 %-ного раствора йода в иодиде калия. В десятую пробирку наливают 5 мл 0,5 %-ного раствора крахмала, прибавляют разный объем разведенной в 10 раз слюны, быстро перемешивают и 2 капли смеси вносят в первую пробирку с раствором йода. Через 5−15 секунд (в зависимости от активности фермента) из десятой пробирки берут по две капли раствора во вторую, третью, …, девятую пробирки, перемешивают и отмечают получаемое окрашивание. При правильно выбранном интервале времени наблюдается постепенный переход окраски растворов в пробирках от синей через красную (различных оттенков) до желтой (цвет раствора йода). С содержимым десятой пробирки проделывают реакцию Троммера. Отмечается появление красно-кирпичного осадка оксида меди (I).

Опыт 2 Специфичность действия амилазы и сахаразы

В две пробирки помещают по 5−6 капель 0,5 %-ного раствора крахмала. В одну из них добавляют 8−10 капель разведенной в 5 раз слюны (содержащей амилазу), в другую − 8–10 капель вытяжки из дрожжей, содержащей фермент сахаразу. Обе пробирки выдерживают 10 минут при комнатной температуре, прибавляют в них по капле 0,1 %-ного раствора йода в йодиде калия и отмечают окрашивание

В две другие пробирки помещают по 10−12 капель 1 %-ного раствора сахарозы и добавляют в первую пробирку 8−10 капель вытяжки из дрожжей, во вторую − 8−10 капель разведенной слюны. После выдерж­ки пробирок при комнатной температуре в течение 5 минут с их содер­жимым проделывают реакцию Троммера.

Действие ферментов в обоих опытах обнаруживается либо по исчезновению субстрата, либо по появлению продуктов его гидролиза. Убеждаются, что амилаза катализирует гидролиз крахмала (но не сахарозы), а сахараза − гидролиз сахарозы (но не крахмала).

Опыт 3 Влияние активаторов и ингибиторов на активность ферментов

В 3 пробирки с 10 каплями разведенной в 5 раз слюны прибавляют: в первую − 8 капель воды и 2 капли 1 %-ного раствора хло­рида натрия, во вторую − 10 капель воды, в третью − 8 капель воды и 2 капли 1 %-ного раствора сульфата меди (II). Содержимое перемешивают, прибавляют во все пробирки по 5 капель 0,5 %-ного раствора крахмала и оставляют при комнатной температуре. Через каждые 5 минут (3 раза) в заранее приготовленные 3 пробирки с 2 мл воды, подкрашенной 2 каплями 0,1 %-ного раствора йода, отбирают по 2−3 капли содержимого каждой из опытных пробирок. Наблюдают различия характера окраски в исследуемых случаях. Делают вывод об активности фермента при­сутствии хлорида натрия и сульфата меди (II).

Тест

1 Какой фермент обладает абсолютной специфичностью к субстрату:

а) химотрипсин;

б) папаин;

в) уреаза;

г) аргиназа;

д) лизоцим;

2 Какой оптимум рН имеет фермент пепсин:

а) 1,5 −2,5;

б) 4 − 5;

в) 6 − 7;

г) 8 − 9;

д) 10 − 11;

3 При каком рН большинство ферментов проявляют максимальную активность:

а) кислом, рН 1,5 − 2;

б) щелочном, рН 8 − 9;

в) близком к нейтральному;

г) только при рН 7;

4 Какой фермент обладает стереоспецифичностью:

а) альдолаза;

б) пируватдегидрогеназа;

в) α-глюкозидаза;

г) фумаратгидратаза;

д) липаза;

5 Какой оптимум рН имеет фермент амилаза:

а) 1,5 −2;

б) 7 −7,5;

в) 8 − 9;

г) 3,5 − 4;

д) 4,5 – 5;

6 При какой температуре ферменты денатурируют:

а) 0°С;

б) 80 −100°С;

в) 20 − 30°С;

г) 30 − 40°С.