Лабораторная работа № 8.

Получение элективных накопительных культур сенной и картофельной палочек (Bac. subtilis и Bac. Mesentericus).

Теоретические пояснения:

Элективными культурами называют такие, в которых создаются условия для роста микроорганизмов одного вида и подавляется рост других видов. В данной работе кипячение является фактором, убивающим неспороносные формы, вследствие чего Bac. subtilis и Bac. Mesentericus, имеющие устойчивые споры, получают преимущественные условия для размножения. Этому способствует и специфика используемых сред.

Цель работы: изучить Bac. subtilis и Bac. Mesentericus.

Материалы и оборудование: клубни картофеля, сено, ножи, ножницы, чашки Петри, конические колбы, мел, вата, электрические плитки, термостат, дистиллированная вода, сушильный шкаф, микроскоп, иммерсионное масло.

Ход работы:

Получение культуры сенной палочки.

Сено из разнотравья мелко нарезают ножницами и помещают в конические колбы, заливают водой, добавляют щепотку мела и кипятят в течение 15 мин. Колбу закрывают ватной пробкой и помещают в термостат при температуре 25°С на 2–3 суток. На поверхности сенного отвара образуется сероватая пленка, состоящая из особей грамотрицательной сенной палочки. В сене всегда присутствуют споры Bac. subtilis, так как они не гибнут при кипячении и дают рост вегетативным формам бактерии. Другие микроорганизмы при этом вырастают редко и в не больших количествах.

Получение культуры картофельной палочки.

Промывают клубень картофеля и, не снимая кожуры, нарезают ломтики. Их поверхность натирают мелом и кладут в чашки Петри. Выдерживают чашки с ломтиками картофеля 10 мин в сушильном шкафу при 100°С. После этого чашки помещают в термостат при 27–30°С на 2–3 суток. Оптимальная температура для развития Bac. Mesentericus несколько выше, чем для Bac. subtilis, поэтому культуры ставят в разные термостаты.

На поверхности ломтиков картофеля образуется плотная морщинистая пленка, состоящая из особей картофельной палочки. Она движется при помощи жгутиков, размеры клеток 4–5 мкм, грамположительна.

Вопросы для самоконтроля:

1. Что называют элективной культурой?

2. Чем отличается условия роста культуры сенной палочки от культуры картофельной палочки?

Лабораторная работа № 9.

Методы и техника культивирования микроорганизмов на питательных средах.

Теоретические пояснения:

Микроорганизмы культивируют (выращивают на питательных средах, которые разливают в пробирки, колбы, флаконы, чашки Петри. Посев производят бактериальной петлей (иглой), шпателем, пастеровской или обычной градуированной пипеткой (рис.9).

Выросшие на поверхности плотных сред изолированные макроскопические скопления биомасс, являющиеся продуктом размножения одной единственной клетки, называемые колониями, представляют собой чистую культуру бактерий, которую, накопив на средах, используют для определения видовой принадлежности микроорганизма.

Цель работы: изучить основные методы посева

Рис. 9. а - шпатель Дригальского, б - градуированная пипетка; в - пастеровская пипетка

Материалы и оборудование: шпатели микробиологические, градуированые пипетки, пастеровские пипетки, петли бактериальные, иглы бактериальные, пробирки со столбиками среды, чашки Петри с питательной средой, культура исследуемого материала, термостат.

Ход работы:

Посев бактериальной петлей на скошенную и жидкую среды

Пробирку с чистой культурой бактерий и стерильной средой берут в левую руку и держат пальцами в наклонном положении так, чтобы их содержимое не проливалось. В правую руку, как писчее перо, берут петлю и в вертикальном положении стерилизуют в пламени горелки. Пробки из пробирок вынимают одновременно, зажимают их между мизинцем и ладонью правой руки и тотчас же обжигают края открытых пробирок. Прокаленную петлю вводят в пробирку, охлаждают, прикасаются к культуре бактерий, быстро переносят ее в пробирку с незасеянной средой, ополаскивая петлю в бульоне или же зигзагообразными движениями распределяют по скощенной поверхности агара (рис.10).

Рис. 10. Посев материала бактериальной петлей на скошенную среду

Петлю извлекают, обжигают края пробирок и закрывают их проведенными через пламя пробками, затем бактериальную петлю стерилизуют, пробирки ставят в штатив.

Посев уколом

Столбики полутвердых сред, мясопептонной желатины насквозь прокалываются иглой или петлей, держа пробирки дном вверх (рис.11). Посев применяют для выращивания бактерий-анаэробов, хранения культур, выявления протеолитических свойств.

Рис. 11. Посев материала уколом в столбик среды

Посев градуированной или пастеровской пипеткой

Пробирки держат под небольшим углом, градуированную или пастеровскую пипетку проводят сквозь пламя и, сняв пробки, опускают в пробирку, затем набирают определенное количество материала, переносят и выдувают его в питательную среду. Пробирки закрывают, а пипетки помещают в дезинфицирующий раствор.

Посев в чашки Петри с плотной питательной средой

Плотные питательные среды, например мясопептонный агар, разливают в чашки следующим образом: флакон (пробирку) с расплавленной средой берут в правую руку, левой вынимают пробку, обжигают горлышко. Большим и указательным пальцами левой руки приподнимают крышку чашки Петри и, не касаясь ее краев, вводят под нее горлышко, наливая 15–20 мл среды. Быстро закрывают флакон и крышку. Чашку Петри слегка покачивают для равномерного распределения среды и оставляют для застывания. Затем переносят ее в термостат, переворачивают вверх дном, снимают крышку и подсушивают в таком положении 15–20 мин.

Посев шпателем

Шпатели готовят из стеклянных палочек толщиной 4–5 мм, согнутых в виде треугольника. Стерилизуют их завернутыми в бумагу в сухожаровом шкафу, а также сжиганием спирта после предварительного смачивания им. Засевают шпателем каплю материала или взвеси микробов, внесенных на пластинчатую среду, распределяя ее круговыми движениями по всей поверхности, держа левой рукой крышку чашки Петри приоткрытой (рис. 12). Таким же образом, тем же шпателем засеваются поочередно вторая и третья чашки, после чего его погружают в банку с дезинфицирующим раствором.

Рис. 12. Посев шпателем на питательную среду в чашке Петри

Чашки переворачивают, надписывают и ставят в термостат вверх дном чтобы избежать размывания растущих колоний на среде капельками конденсационной воды, в большом количестве скапливающимися на внутренней поверхности крышки при обычном ее положении.

Посев бактериальной петлей

Исследуемую жидкость набирают петлей и, не прикасаясь к стенке пробирки, удаляют излишнее ее количество. Чашку Петри с агаризованной средой помещают на столе вверх дном. Донную часть чашки держат левой рукой вертикально, петледержатель – большим и указательным пальцами правой руки и легкими движениями наносят жидкость параллельными штрихами по всему диаметру поверхности среды.

Вопросы для самоконтроля:

1. Какие выделяют основные методы посева микроорганизмов?

2. В чем преимущества посева микроорганизмов градуированной пипеткой?

3. Как осуществляют посев шпателем Дригальского?

4. Какой метод посева используют для культивирования анаэробных микроорганизмов?