Лабораторная работа № 2.
Приготовление нативных препаратов микроорганизмов для микроскопирования.
Теоретические пояснения:
Для работы с микроорганизмами используют бактериологические петли, иглы, шпатели. Бактериологические петли изготовляют из проволоки, которую закрепляют в специальных металлических держателях. Бактериологическая петля прокаливается, пробки и край пробирки с культурой микроорганизмов фламбируются. Если в работе используются суспензии микроорганизмов или культуры, выращенные на жидких средах, они берутся предварительно простерилизованной пипеткой, у которой широкий конец закрыт ватой. Изучают микроорганизмы, изготавливая препараты из них. Для этого применяют чистые, хорошо обезжиренные стекла, на поверхности которых капля воды свободно растекается. С этой целью промытые и высушенные стекла натирают хозяйственным мылом, увлажняют дыханием и протирают салфеткой. При микроскопировании можно использовать культуры, выращенные в жидких средах. Культуры, выращенные на твердых средах, можно суспендировать (развести) с помощью стерильной петли или иглы в капле стерильной жидкой среды или какого-нибудь раствора до слабого помутнения. В зависимости от цели исследования готовят прижизненные или фиксированные препараты.
Цель работы: изучить методы приготовления прижизненных микропрепаратов (раздавленная капля, висячая капля).
Материалы и оборудование: Предметные и покровные стёкла, предметные стёкла с углублениями, микробиологические петли, пипетки, культура микроорганизмов в пробирке, микроскопы, иммерсионное масло.
Ход работы:
Приготовить нативный микропрепарат методом раздавленной капли.
приготовить предметное и покровное стекла и зажечь спиртовку;
взять пробирку со стерильной водой в левую руку и поместить её наклонно между большим и указательным пальцем на расстоянии 3–5 см от пламени;
в правую руку взять петлю, простерилизовать ее в пламени спиртовки, включая часть петледержателя, которая при работе помещается в пробирку;
мизинцем правой руки зажать пробку пробирки, повернуть, вынуть ее и держать, не касаясь окружающих предметов;
обжечь края пробирки и взять петлей каплю воды, поместить её на предметное стекло;
обжечь края пробирки и пробку, закрыть пробирку и поставить в штатив;
прожечь петлю;
открыть пробирку с культурой так же, как в п. 4;
стерильную петлю ввести в пробирку с культурой, охладить, прикоснувшись к внутренней поверхности пробирки, а затем взять ею небольшое количество микроорганизмов;
петлей с микроорганизмами сделать штрих на стекле внутри капли воды. После этого петлю прожечь и охладить, прикоснувшись к стеклу;
растереть
штрих петлей круговыми движениями,
чтобы получилась слегка опалесцирущая
суспензия и накрыть покровным стеклом.
Чтобы
не образовывалось пузырьков воздуха,
покровное стекло подводят ребром к
краю капли и резко опускают его.
Приготовить микропрепарат методом висячей капли.
Д
Рис. 2. Висячая капля: вид препарата
ля приготовления препарата необходимы стекло с лункой, покровное стекло и вазелин. Края лунки покрывают тонким слоем вазелина. На покровное стекло наносят каплю культуры (Рис. 2).Накрывают покровное стекло стеклом с лункой так, чтобы капля оказалась в центре.
Склеившиеся стёкла быстро переворачивают покровным стеклом вверх. Капля находится в герметической камере и сохраняется долгое время.
Исследовать препараты под микроскопом.
Зарисовать и сделать вывод о подвижности микроорганизмов.
Вопросы для самоконтроля:
1. Что такое «асептика»? Почему нужно ее соблюдать при работе с микроорганизмами?
2. Какая посуда используется для выращивания микроорганизмов?
3. Как правильно держать пробирку с микроорганизмами и петлю?
4. Какие свойства микроорганизмов исследуются на прижизненных и
постоянных препаратах?
5. Как приготовить препарат «раздавленная капля»?