31. Тонкослойная хром-ия. Параметры и механическое разделение в тонкослойной хроматографии. Адсорбенты и пластины. Нанесение пробы и способы проведения тсх, способы обработки пластин.

К плоскостной хроматографии относятся тонкослойная и бумажная хроматографии. Эти виды жидкостной хроматографии просты по технике выполнения, экспрессны, не требуют дорогостоящего оборудования, что является их неоспоримыми достоинствами.

Разделение смеси веществ ТСХ может быть выполнено с использованием различных хроматографических систем. Поэтому выделяют адсорбционную, распределительную, нормально- и обращенно-фазовую, ионообменную и т.п. тонкослойную хроматографию.

В качестве неподвижной фазы в тонкослойной хроматографии используются различные сорбенты (Al₂O₃, силикагель и др.), нанесенные равномерным, тонким (100300 мкм) слоем на стеклянную, металлическую или пластиковую подложку (носитель). Слой адсорбента на носителе может быть закреплен или незакреплен.

Хром-ое разделение в плоскостных методах, как и на колонке, обусловлено переносом компонентов анализируемого вещества подвижной фазой вдоль слоя неподвижной фазы с различными скоростями в соответствии с коэффициентами распределения разделяемых веществ. В обоих случаях используются хроматографические системы жидкость  твердый сорбент (адсорбционный механизм разделения), жидкость  жидкость  твердый носитель (распределительный, ионообменный и др. механизмы).

В качестве подвижных фаз используют различные растворители или их смеси, органические или неорганические кислоты.

Практическое получение плоскостных хроматограмм состоит в следующем: На тонком слое сорбента карандашом отмечают стартовую линию на расстоянии 1 см от нижнего края пластинки. Микропипеткой наносят пробу на линию старта в виде пятна диаметром не более 23 мм. Затем край пластинки опускают в сосуд с подвижной фазой, находящийся в герметичной камере. По мере подъема подвижной фазы по пластинке и протекания обычных в хроматографии многократных элементарных актов сорбции-десорбции, распределения между двумя жидкими фазами, ионного обмена и др. происходит разделение компонентов анализируемой смеси. Процесс обычно продолжают до тех пор, пока растворитель не пройдет от линии старта 10 см. После этого пластинку извлекают из камеры и высушивают. Если компоненты анализируемого вещества окрашены, они дают на хроматограмме соответствующие цветные пятна. Для обнаружения неокрашенных компонентов анализируемого вещества хроматограмму необходимо проявить. Проявление хроматограммы и детектирование компонентов пробы может быть проведено различными методами и зависит от состава анализируемых смесей. Применяют проявление

 с помощью УФ-освещения.

 с помощью реагентов-проявителей.

 с использованием иода.

Часто для улучшения качества хроматограмм приходится использовать более сложные варианты плоскостной хроматографии, например, нисходящую, круговую, двухмерную. При проведении нисходящей тонкослойной хроматографии анализируемое вещество наносится на стартовую линию пластинки или бумажной полоски, находящейся сверху, и элюент подается не снизу, а сверху.

Хроматография м. б. осуществлена в одно– и двухмерном вариантах. В плоском слое при двухмерном хром-м разделении разделение анализируемой пробы сначала проводят в одном растворителе, затем проводят разделение в направлении, перпендикулярном первому, с использованием другого растворителя, повернув первую хроматограмму на 90^оС.

Положение пятен (зон), которые образуют разделенные компоненты анализируемого вещества на плоской хроматограмме, характеризуется величинами относительной скорости перемещения компонентов в тонком слое R_fi . Экспериментально величину R_fi определяют как отношение расстояния L_i, пройденного i-ым компонентом, к расстоянию L, пройденному растворителем от стартовой линии до линии фронта (рис. 1.8):

R_fi = L_i/ L

Величина R_fi зависит от природы соответствующего компонента анал-ой пробы, природы неподвижной фазы, ее толщины, природы и качества подвижной фазы, способа нанесения пробы и др. факторов, но всегда

R_fi  1.

Величина R_fi фактически тождественна времени удерживания вещества или его удерживаемому объему, хар-ющим скорость прохождения в-ва через хром-ую колонку, и м.б. использована для кач-ой идентификации компонентов анал-ой пробы, а диаметр пятна  высоте или площади хром-го пика и, следовательно, в определенной степени отражает количественное содержание вещества. Кол-ое определение состава анализируемой пробы в простейшем случае может быть оценено визуально по интенсивности собственной окраски пятен или интенсивности флуоресцентного свечения полученных пятен при УФ-детектировании. Для этих целей достаточно широко применяется элюирование хроматографических пятен. При этом пятно, полученное на хроматограмме, аккуратно вырезают или соскребают, обрабатывают подходящим растворителем и полученный раствор исследуют соответствующим физико-химичес-ким методом. Можно использовать и весовой метод, при котором соответствующее пятно вырезают из хроматограммы и взвешивают. Кол-во вещества определяют по разности весов чистой бумаги такой же площади и бумаги с веществом.