3. В аптеку поступил рецепт на индивидуальное изготовление капель для носа ребенку по прописи:
Rp.: Camphorae 0,05
Ol. Menthae
Ol. Eucalypti ana 0,06
Ol. Vaselini 10,0
M.D.S. Капли в нос, по 2 капли 2 раза в день.
Для обнаружения камфары в изготовленной лекарственной форме провизор-аналитик провел реакцию с раствором пара-диметиламинобензальдегид, появилось красное окрашивание. При количественном определении в качестве титранта использовался раствор натрия гидроксида.
Объясните выбор реактивов для анализа. Какие еще можно предложить реакции для установления подлинности и количественного определения камфоры как в лекарственных формах, так и в субстанции?
Какие физико-химические константы регламентируются НД для оценки качества субстанции?
ОТВЕТ.
Камфора - бесцветные кристаллические куски или бесцветный кристаллический порошок, или прессованные плитки с кристаллическим строением, легко режущиеся ножом, слипающиеся в комки. К физическим константам камфоры относятся: температура затвердевания, удельное вращение, температура плавления, температура кипения. Они служат подтверждением подлинности камфоры.
В состав эфирных масел входит левовращающая камфора. Рацемическая( левовращающая+правовращающая) применяется только для наружного применения.
Для идентификации камфоры используют также цветные реакции, основанные на взаимодействии активированной метиленовой группы с альдегидами: фурфурол (сине-фиолетовое окрашивание), бензальдегидом (красное).
Также возможно определение камфоры спектрофотометрией в УФ области, ГЖХ.
Для подтверждения подлинности реакция выбрана верна.
Для количественного определения камфоры используют оксимный способ, основанный на взаимодействии камфоры с определенным количеством гидрохлорида гидроксиламина.Заместительное титрование.
Нерастворимый в воде оксим определяют гравиметрическим методом или титруют выделившееся эквивалентное количество хлористоводородной кислоты титрованным раствором гидроксида натрия.
Количественное определение также можно проводить с использованием ГЖХ,оптических методов анализа.
4. На основании теоретических и практических основ организации производства экстракционных лекарственных препаратов:
составьте технологическую и аппаратурную схему производства «Эвкалипта настойки»;
обоснуйте и выберите методы определения содержания спирта в экстрагенте, рекуперате и готовом препарате;
Последние достижения в области геномики и протеомики позволяют решать проблемы поиска безопасных и эффективных ЛС.Какое значение имеют гены вирулентности и в чем суть метода IVET?
Ответ:
Количественное определение спирта в соответствии с ГФ:
1. по температуре кипения – в готовом препарате.
2. по плотности (ареометр, денсиметр) – в готовом препарате, рекуперате, экстрагенте.
3. спиртомером (концентрация) - в готовом препарате, рекуперате, экстрагенте.
4. методом дистилляции – в готовом препарате.
Настойка эвкалипта готовится на 70% спирте в соотношении 1:5 методом перколяции или ускоренной дробной мацерации.
Технологическая схема (для перколяции)
Успехи молекулярной биологии в развитии геномики и протеомики позволяют получать сведения о каждом гене, входящем в геном тест-объекта, получить любой ген в изолированном состоянии, копировать его с помощью ПЦР (полимеразной цепной реакции - метод, при котором in vitro могут быть размножены фрагменты ДНК) и на полученной таким образом матрице нарабатывать сначала информационную РНК, а затем и специфический для этого гена белок. Данный белок рассматривают как мишень для оценки на молекулярном уровне потенциальных биологически активных агентов как природных, так и синтетических соединений. Таким образом скрининг ЛС начинается не с клетки, а с конкретного гена в качестве тест-объекта. Предпочтение тому или иному гену отдают исходя из задачи (какого рода ЛС мы хотели бы получить). В дальнейшем отработанные таким образом БАВ должны быть испытаны на предмет клеточной проницаемости, достижения мишени, токсичности и т.д. Как частный случай использования такого скрининга - это перспективность поиска «молчащих» генов или генов вирулентности (ivi-генов). Эти гены обнаруживаются очень трудно, поэтому для их обнаружения используют метод захвата промотора (участок ДНК, с которым связывается РНК-полимераза, инициируя транскрипцию (процесс синтеза РНК) соответствующих генов)– IVET метод. Суть метода состоит в том, что изначально геном патогенной бактерии «режется» рестриктазами на фрагменты, далее каждый фрагмент соединяется с лишенным промотора геном, присоединяется лактозный оперон (участок ДНК) и эта комбинация включается в плазмиду (генетический элемент). Наборы плазмид водят в E.coli. получается ряд различных штаммов. Производят внедрение такой E.coli в организм лабораторного животного (мыши) с одновременным введением ей препарата. Через сутки из ткани животного высевают бактериальную культуру на питательную среду. Далее проводят анализ колоний. Если на индикаторной среде выросла бесцветная колония, значит на искусственной пит. Среде данный промотор не работал, и ген во фрагментах не экспрессировался (реализовал свое предназначение). Именно здесь и нужно искать ivi- гены, т.е. гены вирулентности.