Вопрос 24. Методы исследования тромбоцитарного гемостаза.

Количественное определение фактора Виллебранда фотоэлектроколориметрическим методом (по Баркаган З.С., Момот А.П., 1999)

Принцип: Метод основан на определении влияния фактора Виллебранда (ФВ), содержащегося в исследуемой плазме, на ристоцетин-инждуцированныю агрегацию фиксированных формалином донорских тромбоцитов. Обработанные формалином тромбоциты сохраняют способность к ристоцетин-агрегации, но не могут агрегировать спонтанно и под воздействием других индукторов агрегации.

Коагуляционная (коагулянтная, прокоагулянтная) активность тромбоцитов

Чаще всего определяется в тесте генерации тромбопластина (см.), но может быть оценена и более простым методом, например путем сравнительного исследования ускоряющего влияния активированных каолином тромбоцитов обследуемого и здорового человека на свертывание бестромбоцитарной нормальной плазмы.

Гемолизат-агрегационный тест(по Л. 3. Баркагану, Б. Ф. Архипову, В. М. Кучерскому (1980).

Принцип: Гемолизат эритроцитов является специфическим естественным индуктором агрегации тромбоцитов. В тесте определяют время появления видимых глазом агрегатов тромбоцитов в богатой тромбоцитами плазме исследуемого после добавления к ней гемолизата в различных концентрациях. Можно приводить графическую запись на агрегометрах любого типа. Тест высокочувствителен и удобен как скрининг-метод выявления нарушений агрегации тромбоцитов. Для его проведения не требуется стандартизации индукторов агрегации (АДФ и др.).

Количественное определение фактора Виллебранда (по Evans и Osten, в модификации Б. Ф. Архипова, Л. 3. Баркагана, Л. В. Марамзиной (1982).

Принцип: Определяется влияние содержащегося в плазме обследуемого фактора Виллебранда (ФВ) на агглютинацию под воздействием ристомицина отмытых и формалинизированных донорских тромбоцитов. В основе метода лежит установленный факт, что тромбоциты, обработанные раствором формалина, сохраняют способность к ристомицинагглютинации в присутствии фактора Виллебранда, но не подвержены ни спонтанной агрегации, ни агрегации под влиянием физиологических индукторов процесса (АДФ, адреналина, тромбина и др.). В предлагаемой модификации вместо венозной крови используется 0,2 мл крови, взятой после прокола кожи пальца. Результаты теста оцениваются визуально по времени появления первых агрегатов.

25. Преаналитический этап лабораторных исследований. Правила забора крови.

Для всех видов лабораторных исследований, преаналитический этап объединяет комплекс процессов перед собственно лабораторным анализом, который состоит из: подготовки обследуемых; получения биоматериала (крови, мочи и др.); транспорта биоматериала в лабораторию; первичная обработка биоматериала в лаборатории; распределение и хранение биоматериала в лаборатории. Основная задача этих этапов преаналитического процесса — обеспечение стабильности (сохранности) компонентов биоматериалов, взятых на исследование, и сведение к минимуму влияния различных факторов, изменяющих их качество.

Лабораторная посуда, расходные материалы

1. Шприцы инъекционные однократного применения с иглами (2мл, 5 мл, 10 мл, 20 мл)

2. Вакуумные пластиковые или стеклянные системы однократного применения с пункционными иглами или иглами-бабочками.

3. Стекла предметные.

4. Скарификаторы стерильные.

5. Контейнеры пластиковые для сбора биологических жидкостей в индивидуальной упаковке.

6. Жгут кровоостанавливающий.

7. Пробирки стеклянные центрифужные градуированные и неградуированные.

8. Пробирки полистирольные центрифужные мерные с пробкой.

9. Пробирки Эппендорфа.

10. Пробирки пластиковые конические с крышкой стерильные 50 мл.

11. Наконечники пластиковые для дозаторов пипеточных.

12. Двухфазная среда для забора крови.

13. Стерильные ватные тампоны.

14. Контейнер медицинский.

Подготовка пациентов

Наиболее распространенным материалом для лабораторных исследований является кровь, моча и некоторые другие биологические жидкости.

Взятие материала для лабораторных исследований должно проводиться до принятия обследуемым пищи (натощак). Последний прием пищи за 8-12 часов (12 часов для исследований липидного спектра) до взятия. Исключением из этого правила являются исследования, которые проводятся при неотложных состояниях, в любое время, но с учетом этого фактора.

Время взятия с 7 до 9 ч утра при плановых исследованиях и в любое время для срочных случаев диагностики (неотложные состояния). Не допустим забор крови для плановых биохимических исследований накануне вечером.

Исключение приема алкоголя должно быть не менее, чем за 24 ч до взятия биоматериала.

Лекарственные средства существенно влияют на результаты лабораторных исследований различным образом. Поэтому при подготовке обследуемых к проведению лабораторных исследований приняты следующие подходы:

лекарственные средства, мешающие определению компонентов, исключаются до взятия биоматериала, если они даются не по жизненным показаниям;

утренний прием лекарственных средств проводится только после взятия биоматериала;

взятие крови с диагностической целью проводится перед проведением инфузии лекарственных средств и растворов.