11.Методы микроскопического исследования (люминесцентная, темнопольная, фазово-контрастная, электронная микроскопия). Бактериоскопический метод диагностики, ею задачи и возможности

Темнопольная микроскопия

Применяется для прижизненного изучения микроорганизмов в нативных неокрашенных препаратах.Микроскопия в темном поле зрения основана на явлении дифракции света при боковом освещении частиц, взвешенных в жидкости эффект Тиндаля) Эффект достигается с помощью специального конденсора ( парабалоид или кардиоид), которые заменяют обычный конденсор в биологическом микроскопе. При этом способе освещения в объектив попадают только лучи, отраженные от поверхности объекта. В результате на темном фоне (неосвещенное поле зрения) видны ярко освященные частицы. Для наблюдения в темном поле свет устанавливают и центрируют, как и для светлого поля,заменяют конденсор на специальный, прибавляют свет до максимума, открывают конденсор до максимума. Для темнопольной микроскопии готовят препараты «раздавленная капля» или «висячая капля»

3.Люминисцентная микроскопия.

Люминисценция – способность некоторых веществ под влиянием падающего на них света испускать лучи сдругой длиной волны.( например, таким свойством обладают ультрафиолетовые лучи). Объект, не видимый в ультрафиолетовом излучении, приобретает яркий блеск после обработки специальными веществами-флюорохромами. Установка для люминисцентной микроскопии состоит из источника света с сине-фиолетовым фильтром и микроскопа. На окуляр микроскопа надевают желтый светофильтр.Преимущества люминисцентной микроскопии:1.цветное изображение2.высокая степень контрастности объектов3.возможность исследования непрозрачных объектов4.возможность исследования динамики жизненных процессов5.обнаружение локализации отдельных микроорганизмов, вирусов6.развитие методов цитогистохимии, экспрессная цитодинамика.

4.Фазово-конртастная микроскопия

Предназначена для нативных препаратов. Фазово-контрастное приспособление дает возможность увидеть прозрачные объекты. Свет проходит через различные биологические структуры с разной скоростью, которая зависит от оптической плотности объекта. В результате возникает изменение фазы световой волны, не воспринимаемое простым глазом. Фазовое устройство состоит из особого конденсора и объектива и обеспечивает преобразование изменение фазы световой волны в видимые изменения амплитуды. Таким образом достигается усиление различий в оптической плотности объектов.

5.Электронная микроскопия.

Позволяет наблюдать объекты, размеры которых лежат за пределами разрешающей способности светового микроскопа.(0,2 мкм). Применяются для изучения вирусов, тонкого строения различных микроорганизмов.

Световые лучи в этом микроскопе заменяют поток е, имеющий 0,005 нм. Высокая разрещающая способность электронного микроскопа (0,1-0,2 нм) позволяет получить общее полезное увеличение до 1000000.

Микроскопический (бактериоскопический) метод.Суть метода: из исследуемого материала по общепринятой методике готовят мазок, окрашивают его и путем микроскопического изучения обнаруживают микробы, исследуют их морфологические, тинкториальные свойства, расположение микробов в мазке относительно друг друга. Достоинства метода: быстрое получение результатов, техническая и экономическая доступность, простота.

Недостатки метода. Морфология, особенно родственных микроорганизмов, нередко идентична, и они не идентифицируются в световом микроскопе. Под действием ряда факторов внешней среды, в первую очередь, антибиотиков микроорганизмы могут изменять свою характерную морфологию. Концентрация возбудителей может быть чрезвычайно низкой, поэтому они не обнаруживаются, или форменные элементы их маскируют. Эти обстоятельства приводят к тому, что этот метод редко используется как окончательный способ установления этиологии заболевания. Чаще он используется как ориентировочный, предварительный метод исследований, а при некоторых видах инфекции он вообще опускается. Бактериолог, получив ориентировочные сведения о предполагаемом возбудителе, его концентрации, сочетании с сопутствующей микрофлорой, определяет тактику дальнейшего выделения чистой культуры возбудителя.