44. Интерферон. Способы получения и их применение.

ИФН - защитный белок, вырабатываемый клетками в ответ на заражение их вирусами; оказывает противовирусный эффект. α-ИФН синтез-ся лейкоцитами, β-ИФН – фибробластами, γ-ИФН – Т-лимфоцитами, NK-киллерами. ИФН I образуется в ответ на обработку клеток вирусами, двуцепочечной РНК. Подавляет синтез вирусных белков, не влияtт на ранние стадии репликации вируса. ИФН II продуцируется лимфоцитами и макрофагами, активированными разными индукторами. Блокирует «раздевание» вируса, повышает содержание NO внутри клетки, активирует ф-ии NK-клеток, Т-лимфоцитов, тканевых макрофагов и гранулоцитов. ИФН стабилен в широкой зоне pH, устойчив к нуклеазам, разрушается протеолитическими ферментами. После исчезновения из клетки инфицирующего вируса и в нормальных клетках ИФН не обнаруживается. ИФН не специфичен по отношению к вирусным инфекциям, но специфичен для образующих его клеток; например, ИФН клеток кур активен только в этих клетках, но не активен в клетках человека.

Применение ИФН. Для профилактики и лечения ряда вирусных инфекций. Эффект определяется дозой препарата, высокие дозы ИФН оказывают токсическое действие. ИФН применяются при гриппе и других ОРВИ. Препарат эффективен на ранних стадиях заболевания, применяется местно, например, путем закапывания или введения с помощью ингалятора в верхние дыхательные пути. ИФН оказывают терапевтическое действие при гепатите В, герпесе, злокачественных новообразованиях. Препарат применяется парентерально - внутривенно и внутримышечно в дозе 105 ед на 1 кг массы тела. Побочное действие - повышение температуры, головная боль, выпадение волос, ослабление зрения и т.д. у детей - тяжелые шоковые состояния, у больных с сердечно-сосудистыми заболеваниями - инфаркт миокарда. Очистка ИФН снижает его токсичность и позволяет применять высокие концентрации. Очистка осуществляется с помощью аффинной хроматографии с использованием моноклональных антител к ИФНу. Генноинженерный лейкоцитарный ИФН получают в прокариотических системах (кишечной палочке). Технология получения ИФН включает следующие этапы: 1) обработка лейкоцитарной массы индукторами ИФНа; 2) выделение из обработанных клеток смеси иРНК; 3) получение суммарных комплементарных ДНК (кДНК) с помощью обратной транскриптазы; 4) встраивание кДНК в плазмиду кишечной палочки и ее клонирование; 5) отбор клонов, содержащих гены ИФНа; 6) включение в плазмиду сильного промотора для успешной транскрипции гена; 7) экспрессия гена ИФНа, т.е. синтез соответствующего белка; 8) разрушение прокариотических клеток и очистка ИФНа с помощью аффинной хроматографии.

В настоящее выпускаются коммерческие препараты: человеческий лейкоцитарный, лимфобластный «Велферон», фибробластный. Особенностью генно-инженерных ИФН является то, что они получены вне организма человека (продуцируются бактерией E. coli, в ДНК которой встроен ген человеческого ИФНа). Это значительно удешевляет производство, сводит к нулю вероятность передачи какой-либо инфекции от донора.