32.Процессы взаимодействия вирусов с чувствительными клетками и факторы, способные их нарушить. Методы культивирования вирусов.

Взаимодействие восприимчивых клеток с вирусами человека укладывается в три основных варианта. Первый приводит к гибели (цитолизу) зараженных клеток. Второй, характерный для вирусов цитомегалии, аденовирусов 1-го и 2-го типа отличается развитием сбалансированной, хронической, обычно мало токсичной инфекции персистирующего типа. Третий связан с интеграцией нуклеиновой кислоты вируса с клеточной ДНК или РНК, что характерно для онкогенных вирусов, а возможно, и для вирусных инфекций с хроническим течением.

При первой (цитоцидной) форме, характерной для взаимодействия вирусов гриппа с эпителием дыхательных путей, во внеклеточную жидкость выбрасываются значительные количества жизнеспособных вирионов, быстро инфицирующих новые группы чувствительных клеток. Основную роль в подавлении активности внеклеточного вируса играют вируснейтрализующие антитела и интерферон. Генерализация вируса при персистирующих инфекциях часто осуществляется как путем непосредственного выхода возбудителя во внеклеточные жидкости, так и одновременного продвижения от клетки к клетке через контактирующие клеточные мембраны. Благодаря межклеточному способу распространения такие возбудители, как вирусы герпеса, цитомегалии, легко уходят от воздействия вируснейтрализующих антител.

При интегрированной форме вирусной инфекции, характерной для онкогенных вирусов, вирусная ДНК или РНК интегрирует с ДНК клетки-хозяина по механизму, аналогичному с лизогенией бактериальной клетки. У РНК-содержащих онкогенных вирусов интеграция обеспечивается участием обратной транскриптазы (ревертазы).

Неспецифические и специфические защитные факторы противогриппозного иммунитета направлены не столько на разрушение вирионов в различных секретах и межклеточных жидкостях, как это происходит при антибактериальном иммунитете, сколько на предупреждение опасности репродукции возбудителя в различных группах чувствительных клеток. При участии вируснейтрализующих антител или сходных с ними по механизму действия термолабильных вируснейтрализующих β-ингибиторов успешно блокируются начальные этапы репродукции вирусов гриппа, связанные с прикреплением вируса к оболочке восприимчивой клетки и его внедрением в цитоплазму. В случае внедрения вируса в цитоплазму клетки она быстро реагирует на это нарушение продукцией интерферона, задерживающего репликацию вирусных нуклеиновых кислот. Лихорадочная реакция, сопровождающая заболевания гриппом, способствует усилению продукции интерферона, подавлению синтеза белков и термическому повреждению зрелых вирионов

33.Методы культивирования вирусов.

Для культивирования вирусов используют культуры клеток, куриные эмбрионы и чувствительных лабораторных животных.

Культуры клеток. Культуры клеток готовят из тканей животных или человека. Культуры подразделяют на первичные (неперевиваемые), полуперевиваемые и перевиваемые.

Приготовление первичной культуры клеток складывается из нескольких последовательных этапов: измельчения ткани, разъединения клеток путем трипсинизации, отмывания полученной однородной суспензии изолированных клеток от трипсина с последующим суспендированием клеток в питательной среде Перевиваемые однослойные культуры клеток приготовляют из злокачественных и нормальных линий клеток, обладающих способностью длительно размножаться invitro в определенных условиях. К ним относятся злокачественные клетки HeLa, первоначально выделенные из карциномы шейки матки, Нер-3 (из лимфоидной карциномы), а также нормальные клетки амниона человека, почек обезьяны и др.К полуперевиваемым культурам относятся диплоидные клетки человека. Они представляют собой клеточную систему, сохраняющую в процессе 50 пассажей (до года) диплоидный набор хромосом, типичный для соматических клеток используемой ткани. Диплоидные клетки человека не претерпевают злокачественного перерождения и этим выгодно отличаются от опухолевых.

Куриные эмбрионы. Куриные эмбрионы по сравнению с культурами клеток значительно реже бывают контаминированы вирусами и микоплазмами, а также обладают сравнительно высокой жизнеспособностью и устойчивостью к различным воздей­ствиям.

К недостаткам данного метода относятся невозможность обнаружения исследуемого микроорганизма без предварительного вскрытия эмбриона, а также наличие в нем большого количества белков и других соединений, затрудняющих последующую очистку риккетсий или вирусов при изготовлении различных препаратов.

Лабораторные животные. Видовая чувствительность животных к определенному вирусу и их возраст определяют репродуктивную способность вирусов. Во многих случаях только новорожденные животные чувствительны к тому или иному вирусу (например, мыши-сосунки — к вирусам Коксаки).

Преимущество данного метода перед другими состоит в возможности выделения тех вирусов, которые плохо репродуцируются в культуре или эмбрионе. К его недостаткам относятся контаминация организма подопытных животных посторонними ви­русами и микоплазмами, а также необходимость последующего заражения культуры клеток для получения чистой линии данного вируса, что удлиняет сроки исследования.