Дифференциальные среды для энтеробактерий

Среда Эндо. К 100 мл расплавленного горячего МПА или агара Хоттингера, рН 7,б асептически добавляют 1 г химически чистой лактозы, растворенной в 5 мл стерильной дистиллированной воды, и перемешивают. Среду охлаждают до 70⁰С и прибавляют смесь 0,5 мл насыщенного раствора основного фуксина и 1 2.5 мл свежеприготовленного (см. ниже) раствора сульфита натрия. После пе­ремешивания среду разливают в чашки Петри. Для подсушивания агара чашки ставят в термостат при 37⁰С. Готовая среда хранению не подлежит.

Приготовление насыщенного раствора основного фуксина. 20 г красителя вносят в стерильную колбочку, вливают 20 мл этилового спирта 96⁰, закры­вают резиновой пробирки, перемешивают и дают отстояться в течение суток. Об­разовавшийся раствор краски сливают, фильтруют через бумагу в колбочку, плотно закрывают и обвязывают колпачком. Хранят в темном месте. В случае выпадения кристаллов раствор надо перефильтровать.

Приготовление раствора сульфита натрия. Навеску безводного химически чистого препарата (1 часть) растворяют в 9 весовых частях дистиллированной воды, а кристаллический препарат (Nа2S0з·7Н20) - в 4 весовых частях воды. Тот или иной раствор готовят перед употреблением.

Смесь растворов фуксина и сульфита натрия перед внесением в агар надо проверить. В холодном состоянии она имеет золотисто-розоватый цвет, при по­гружении в кипящую воду становится винно-красной, а при охлаждении при­нимает первоначальный цвет. Если же смесь остается розовой или красной, в нее добавляют по каплям раствор сульфита натрия до получения золотисто-ро­зоватого цвета. Если смесь подтитрована хорошо, то при ее добавлении горячая среда Эндо имеет красноватый цвет, а после застывания в чашках она бесцвет­ная или бледно-розовая.

Колонии сальмонелл на среде бесцветные или голубоватые, колонии эшерихий красные.

Среда Левина (эозин-метиленблау-лактоза-агар). К 1 л дистиллированной воды добавляют 1 % пептона (лучше пептона Дифко), 0,2 % двухосновного фос­фата калия и 2-3% промытого агар-агара; кипятят на медленно, м огне до пол­ного растворения компонентов и доводят объем дистиллированиои водои до 1 л. Разливают в колбы по 90 мл и стерилизуют при 1 ати 30 мин.

Перед употреблением агар расплавляют и на 90 мл среды стерильно до­бавляют 5 мл 20%-ного раствора лактозы, 2 мл 2%-ного водного раствора жел­того эозина и 2 мл 0,32%-ного водного раствора метиленовой сини. Среду пе­ремешивают, охлаждают до 50⁰С и разливают в чашки. После застывания она имеет красно-фиолетовый цвет. Хранению не подлежит.

Колонии сальмонелл на среде бесцветные, прозрачные колонии эшерихии фиолетовые, блестящие.

Висмут-сульфитный агар (среда Вильсона-Блера по прописи Минкевича).

Приготовление компонентов:1) 1 г глюкозы, 1,5 г сульфита натрия и 1 г двузамещенного фосфата натрия вносят в стерильную колбу на 50 мл, добавляют пипеткой 20 мл стерильной горячей (85⁰С) дистиллированной воды и перемешивают до растворения;

2) 0,45 г висмут-аммония-цитрата вносят в стерильную пробирку, добавляют 5 мл стерильной горячей (85 С) дистиллированной воды и встряхивают до растворения. Затем в пробирку прибавляют 0,1 мл 10%-ного paствоpa едкого натра (смесь становится молочно-мутной).

Компоненты 1 и 2 смешивают и до составления среды держат в водяной бане (60⁰С);

3) 0,2. г сульфата железа (FeS04) растворяют в пробирке в 2,5 мл горячей стерильной дистиллированной воды;

4) 1 г бриллиантовой зелени растворяют в 100 мл дистиллированной воды. Раствор может длительно храниться, и его готовят заранее;

5) 100 мл 3%-ното МПА в колбе на 200 мл расплавляют в водяной бане при 100⁰С и охлаждают до 60⁰С.

Составление среды: в колбу с агаром вносят 1 мл горячего раствора суль­фата железа и хорошо перемешивают; добавляют всю смесь компонентов 1 и 2 и хорошо перемешивают; прибавляют 0,4 мл pacтвopa бриллиантовой зелени и перемешивают. Готовая среда молочно-мутноватая, бесцветная и имеет рН 8,0­-8,1. Ее разливают в чашки, и после застывания подсушивают в термостате, при­открыв крышки чашек.

Колонии сальмонелл окрашиваются на среде в черный цвет, у протея они зеленые, у эшерихии колонии коричневые и появляются с запозданием.

Среда Плоскирева (бактоагар «Ж»). Среда имеет сложный состав, и гото­вят ее только из сухого стандартного препарата.

Трехсахарный агар с мочевиной (среда Крумвиде - Олькеницкого в моди­фикации Ковальчука). В 1 л дистиллированной воды растворяют 2 г глюкозы 3,5 г сахарозы, 15 г лактозы, 10 г мочевины, 0,6 г соли Мора (сульфата аммиак-железа), 1 г тиосульфата натрия (гипосульфита). Углеводы с мочевиной и отдельно две последние соли предварительно растворяют с подогревом в не­больших порциях воды и смешивают в общем объеме. Устанавливают рН 7,4­7,6 и добавляют 46 г сухого питательного агара с сахарозой и индикатором «ВР» (водный голубой краситель с розолавой кислотой). Смесь кипятят на мед­ленном огне при помешивании до расплавления агара и разливают по 5-6 мл в пробирки. Стерилизуют текучим паром 2 дня по 30 мин пли однократно при 0,5 ати 20 мин. Среду скашивают так, чтобы остался столбик высотой 3 см.

Трехсахарный агар позволяет обнаруживать расщепление лактозы и саха­розы и в отдельности - глюкозы и мочевины, а также образование сероводорода.