Приборы для электофореза.

Хроматография- это физико-химический метод разделения веществ, основанный на распределении компонентов между двумя фазами – подвижной и неподвижной. Неподвижной фазой обычно служит твердое вещество (сорбент) или пленка жидкости, нанесенная на твердое вещество. Подвижная фаза представляет собой жидкость или газ, протекающий через неподвижную фазу. Компоненты анализируемой смеси вместе с подвижной фазой перемещаются вдоль стационарной фазы, которую обычно помещают в колонку (стеклянную или металлическую трубку). Если молекулы разных компонентов разделяемой смеси обладают различной адсорбируемостью или растворимостью, то время их пребывания в неподвижной фазе, а следовательно, и средняя скорость передвижения по колонке различны. Одни компоненты остаются в верхнем слое сорбента, другие, с меньшей адсорбируемостью, оказываются в нижней части колонки, некоторые покидают колонку вместе с подвижной фазой. Так достигается разделение компонентов. Хроматография – динамический метод, связанный с многократным повторением сорбционных и десорбционных процессов, так как разделение происходит в потоке подвижной фазы. Это обеспечивает эффективность хроматографического метода по сравнению с методами сорбции в статических условиях.

С помощью хроматографии возможны: разделение сложных смесей органических и неорганических веществ на отдельные компоненты, очистка веществ от примесей, концентрирование веществ из сильно разбавленных растворов, качественный и количественный анализ исследуемых веществ.

По механизму взаимодействия сорбента и сорбата можно выделить несколько видов хроматографии:

- адсорбционная хроматография основана на различии в адсорбируемости веществ твердым сорбентом;

- распределительная хроматография основана на различной растворимости разделяемых веществ в неподвижной фазе (газожидкостная хроматография) или на различной растворимости веществ в подвижной и неподвижной фазах (жидкостная хроматография);

- ионообменная хроматография – на разной способности веществ к ионному обмену;

-аффинная хроматография – на специфических взаимодействиях, характерных для некоторых биологических и биохимических процессов (например, антитело и антиген, гормон и рецептор и др.).

Хроматограф. Жидкостный хроматограф.

ТЕМА: Практическая работа № 25. «Работа на спектрофотометре».

Цель: обучить работе на спектрофотометре.

Оборудование: спектрофотометр.

Спектрофотометр – это прибор, сравнивающий измеряемый поток излучения с эталоном.

В фотометрическом спектрофотометре сочетаются два основных прибора: монохроматор, служащий для получения монохроматического светового потока, и фотоэлектрический фотометр, предназначенный для измерения интенсивности света.

С помощью спектрофотометра измеряют оптическую плотность исследуемого раствора по отношению к воздуху или к воде.

Принцип действия.

В основу работы спектрофотометра положен принцип измерения отношения двух световых потоков: потока, прошедшего через исследуемый образец, и потока, падающего на исследуемый образец (или прошедшего через контрольный образец).

Спектрофотометр.

Строение спектрофотометра:

1. Тумблер

2. Кюветоприемник (если один кюветоприемник, то спектрофотометр одноканальный, чаще в лаборатории используется шестиканальный)

3. Цифровое табло

4. Пульт управления с кнопками

5. Кюветы

Техника работы на спектрофотометре.

1. Включаем прибор в сеть и включаем тумблер за 30 мин. до начала исследования (прибор нагревается за это время до 37 ⁰С – это оптимальная температура для исследования).

2. На табло высвечивает «SOLAR» и число «325» - это изначально установленная в аппарате длина волны 325 нм.

3. В 1-ую чистую кювету наливаем воду, протираем ее марлевой салфеткой для удаления влаги и ставим в кюветоприемник, держа за ребристые грани.

4. Закрываем кюветоприемник.

5. С помощью пульта управления задаем нужную длину волны и нажимаем кнопку «ENTER» - фиксируем.

6. Нажимаем кнопку «А» и на табло высвечивает результат - оптическая плотность воды.

7. Нажимаем кнопку «ZERO» - обнуляем показания.

8. Достаем 1-ую кювету с водой из кюветоприемника.

9. Во 2-ую чистую кювету наливаем раствор для исследования и вставляем в кюветоприемник.

10. Закрываем кюветоприемник.

11. Нажимаем кнопку «А» и на табло высвечивает результат - оптическая плотность исследуемого раствора.

12. Достаем кювету 2-ую из кюветоприемника.

13. Выключаем тумблер и отключаем спектрофотометр из сети.

Записываем результат:

- если оптическая плотность больше, чем 0,000 (в этом случае вода содержит примеси), то от оптической плотности исследуемого раствора нужно отнять оптическую плотность воды и получим результат;

- а в случае когда оптическая плотность воды равна 0,000, то оптическая плотность раствора равна показаниям снятым для этого раствора.