2. Качественная реакция по определению роданидов в слюне.

Цель занятия: познакомиться со строением, свойствами роданидов и качественно определить их содержание в слюне.

Теория вопроса. Роданиды или тиоционаты. Органические тиоционаты - это эфиры тиоциановой кислоты, которые могут взаимодействовать с органическими тиосульфатами.

Роданиды присутствуют в слюне и других биологических жидкостях в небольшом количестве в свободном виде. Функция их недостаточно выяснена. Считают, что роданиды могут выступать в качестве коферментов.

Роданиды слюны обнаруживаются по появлению красного окрашивания при добавлении к слюне трехвалентного хлорида железа. Окрашивание вызвано образованием комплексного соединения, содержащего железо и роданид. Эта реакция очень чувствительна, однако некоторые органические соединения, например, фосфор, соли лимонной и уксусной кислот, препятствуют возникновению окраски.

В местах повреждения слизистой оболочки полости рта происходит эмиграция гранулоцитов, которые принимают участие в защитных реакциях. В гранулоцитах локализован фермент лактопероксидаза, который окисляет имеющийся в слюне роданид с помощью перекиси водорода бактериального происхождения в гипотиоционат. Гипотиоционат чрезвычайно бактерициден и совместно с перекисью водорода действует антикариесогенно. Поскольку содержание роданидов в слюне превышает их содержание в других биологических, жидкостях ряд исследователей считают, что слюна концентрирует роданиды. Этот факт используется в судебной медицине: микроскопическая реакция на роданиды позволяет идентифицировать слюнные пятна большой давности. Содержание роданидов велико у курильщиков, что связано с поступлением в их организм синильной кислоты табачного дыма.

Ход работы: В пробирку вносят 5 капель слюны, 2 капли соляной кислоты 2% и 2 капли 0,01% раствора хлорного железа. Возникает красное окрашивание, интенсивность которого варьирует в зависимости от содержания в слюне роданидов и от концентрации соединений, угнетающих образование цветного комплекса.

Контрольные вопросы:

1. Перечислить свойства и функции роданидов в слюне.

2. Биологически активные вещества слюнных желез, их биологическая функция.

3. Слюна проточная, смешанная. Формирование слюнного секрета.

4. Неорганические компоненты слюны и их функции.

Тесты: 25,82, 93,95.

Литература: 5,6, 13,14, 15,20, 21, 32

Il. Тема: Ферменты слюны.

1. Качественная реакция на амилазу слюны

Цель занятия: Изучить ферментный состав слюны и проделать качественную реакцию на амилазу слюны.

Теория вопроса:

Среди ферментов слюны преобладает α-амилаза (КФ 3.2.1.1.). она составляет более 15% от всех ферментов слюны. Слюнная амилаза близка по строению к панкреатической, но кодируется другим геномом. α-амилаза состоит из одной полипептидной цепи, активизируется ионами хлора и стабилизируется кальцием. Оптимум действия амилазы слюны при рН 6,8 - 7.0. Фермент α-амилаза относится к эндоамилазам. действует на 1,4 – гликозидные связи крахмала.

Определение активности амилазы в крови и моче имеет диагностическое значение в первую очередь при остром панкреатите или закупорке выводящего протока поджелудочной железы, что приводит к повышению активности фермента амилазы в крови.

Метод определения активности амилазы слюны основан на способности фермента гидролизовать крахмал до мальтозы и глюкозы.

Ход работы:

В пробирку с воронкой собирают слюну. В одну пробирку добавляют 1 0 капель слюны, во вторую - столько же капель воды. Обе пробирки помещают в водяную баню при температуре 37 ⁰С на 10 минут. Затем добавляют в обе пробирки по 10 капель 0,1% раствора крахмала. Через 5 минут добавляют в обе пробирки по 5 капель реактива Люголя. В первой пробирке жидкость окрашивается в желтый цвет, во второй пробирке, где слюна отсутствует – содержимое пробирки окрашивается в синий цвет.

Контрольные вопросы:

1 .Характеристика ферментов слюны;

2. Написать реакцию гидролиза крахмала под действием амилазы слюны;

3. Принцип метода определения амилазы.

Тесты: 11,20,89,99

Литература: 9,10,22,34