ДЕПАРТАМЕНТ ОБРАЗОВАНИЯ И НАУКИ

ХАНТЫ-МАНСИЙСКОГО АВТОНОМНОГО ОКРУГА

ГОУ ВПО СУРГУТСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕСИТЕТ ХМАО-Югры

Кафедра физиологии

Утверждаю

Зав. кафедрой физиологии

______________________________

« «__________________2009 г.

Методическая разработка лабораторного занятия для студентов 2 курса

Тема занятия ИСТОЧНИКИ И ПУТИ РАСХОДОВАНИЯ АМИНОКИСЛОТ В ТКАНЯХ. КАТАБОЛИЗМ АМИНОКИСЛОТ. ПУТИ

ОБЕЗВРЕЖИВАНИЯ АММИАКА.

Методическую разработку подготовили

Баранов Н.П., Старых Ю.А.

Методическая разработка обсуждена и утверждена

на кафедральном совещании №

«_______»_______________2009г

Курс биохимии Адаптивная физическая культура

ЗАНЯТИЕ 9.

ИСТОЧНИКИ И ПУТИ РАСХОДОВАНИЯ АМИНОКИСЛОТ В ТКАНЯХ. КАТАБОЛИЗМ АМИНОКИСЛОТ. ПУТИ

ОБЕЗВРЕЖИВАНИЯ АММИАКА.

Время занятия - 3 часа

Место занятия - учебная комната

Материальное оснащениие набор тематических таблиц, карты “Обмен аминокислот”, бюретки, лабораторная посуда, набор хим. реактивов

Цель занятия: Студент должен знать:

источники и биологическую роль аминокислот; критерии оценки биологической ценности пищевого белка; переваривание и всасывание белков; гниение аминокислот в кишечнике; общую характеристику катаболизма аминокислот, значение реакций трансаминирования и дезаминирования в катаболизме аминокислот; орнитиновый цикл обезвреживания аммиака.

Принцип лабораторных работ:

Определение активности аланинаминотрансферазы и аспартатамминотранферазы

Мотивация Знание механизма переваривания и всасывания белков, источников и путей расходования аминокислот, процессов гниения белков (аминокислот), основных путей катаболизма аминокислот - необходимо для правильного построения рациона спортсменов, понимания роли аминокислот в процессах обмена веществ.

Основные вопросы темы:

1. Общая схема источников и путей расходования аминокислот в тканях

а) незаменимые аминокислоты.

2.Критерии оценки биологической ценности пищевого белка

3. Переваривание белков. Всасывание продуктов переваривания белков

а) протеиназы желудочно-кишечного тракта;

б) роль соляной кислоты в переваривании белка.

4. Гниение белков (аминокислот) в кишечнике

5. Общая характеристики катаболизма аминокислот.

6. Дезаминирование аминокислот

а) прямое окислительное дезаминирование

б) непрямой дезаминирование аминокислот.

7.Регуляция аминокислотного обмена.

8.Взамимосвязь обмена веществ

Лабораторный практикум Определение активности АлАТ и АсАТ в крови.

Распределение времени ( хронокарта)

1 час	1. Введение Проверка присутствия студентов. Выяснение причин пропусков. Рекомендации к отработке задолженностей. Цель и план занятия.	5мин
1-2час	2. Контроль исходного уровня знаний	10мин
	3. Разбор теоретического материала и контроль за его  усвоением. Проведение устного разбора теоретического материала Демонстрация слайдов, тематических т	80мин
3 час.	3. Выполнение лабораторной работы Разбор цели и принципа лабораторной работы Проверка готовности студентов к выполнению Рекомендации к выполнению лабораторной работы Контроль за выполнением и оформлением работы Прием результатов лабораторной работы Контроль за уборкой рабочего места	20 мин
	4. Подведение итогов занятия. Объявление оценок за устный опрос и письменный программконтроль Контроль за уборкой рабочего места студентами. Прием учебной комнаты от дежурного с росписью в специальной тетради санитарного состояния. Задание на дом Заключение	. 5 мин

Определение активности аланинаминотрансферазы в сыворотке крови.

Аланинаминотрансферазы (АлАТ) катализирует обратимый перенос аминогрупп с аланина на 2-кетоглутарат

Мотивация. Знакомство с унифицированным методом определения активности АлАТ в сыворотке крови необходимо для диагностики и контроля за лечением ряда заболеваний (печени, сердца, мышц и т.д.). В сыворотке крови активность АлАТ в норме составляет 0,1-0,68 ммоль/(ч*л).

Реактивы. 1. Субстратный р-р (1,2 г Na₂HPO₄ б/в; 0,2 г KH₂PO₄; 0,04 г 2-кетоглутаровой кислоты; 1,78 г Д-аланина растворяют небольшими порциями 1н раствором едкого натрия до получения смеси с рН 7,4 и доводят объем до 100 мл дистиллированной водой ).

2. Р-р 2,4-динитрофенилгидразина растворяют в 100 мл 1н раствором HCI.

3. 0,4н р-р NaOH.

Принцип. В результате трансаминирования, происходящего под действием АлАТ, образуется пировиноградная кислота. При добавлении кислого 2,4-динитрофенилгидразина энзиматический процесс останавливается и получается гидразон пировиноградной кислоты. Последний в щелочной среде дает окрашивание коричнево-красного цвета, интенсивность которого пропорциональна количеству образовавшейся пировиноградной кислоты.

Ход работы. Порядок выполнения работы согласно схеме:

Реактивы	Опытная пробирка	Контрольная пробирка
Сыворотка крови Субстратный р-р	0,1 0,5	0,1 -

Пробирки помещают в термостат на 30 мин при 37⁰С.

Субстратный р-р Р-р 2,4-ДНФГ

- 0,5

0,5 0,5

Встряхивают и оставляют на 20 мин при комнатной температуре.

0,4 р-р NaOH

0,5

5,0

После тщательного перемешивания раствор оставляют при комнатной температуре на 10 мин для развития окраски. Оптическую плотность проб измеряют на фотоэлектроколориметре с зеленым светофильтром (500-560 нм) в кювете с шириной слоя 10 мм. Результаты сравнивают с аналогичными данными контрольных проб. Расчет производится по калибровочной кривой.

СХЕМА

протоколирования полученных результатов по определению активности АлАТ в сыворотке крови.

№№ п/п	Экстинция	Ммоль ПВК на 1 л сыворотки крови за 1 час инкубации при 370С	Оценка результатов

1. Рекомендуемая литература (основная):

3.Михайлов С.С. Спортивная биохимия.: учебник для студентов высших специальных учебных заведений.– 4-е изд..–М.: Советский спорт. 2007 –256с.