Постановка реакции иммобилизации трепонем (микроанаэростатная методика)

Компоненты, мл	Номер пробирки
	Опыт		Контроль компонентов
	1 (опыт)	2 (контроль)	1	2	3	4	5
Исследуемая сыворотка	0,05	0,05	-	-	-	-	-
Комплемент активный	0,15	-	0,15	0,15	0,15	-	-
Комплемент инактивированный	-	0,15	-	-	-	0,15	-
Антиген	0,35	0,35	0,35	0,35	0,35	0,35	0,35
Позитивная сыворотка--	-	-	0,05	0,05	-	-	-
Отрицательная сыворотка	-	-	-	-	0,05	0,05	-

 

 

В практических лабораториях используют более простой меланжерний метод РИТ по М.М. Овчинникову. Анаэробные условия опыта создаются помещением реагирующей смеси (сыворотки, антиген, комплемент) в меланжер, оба конца которого закрывают резиновым кольцом. Меланжерна методика позволяет обойтись без сложного оборудования и аппаратуры для создания анаэробиоза, но дает такие результаты, которые не уступают классической микроанаэростатной методике.

Реакции иммобилизации трепонем и иммунофлуоресценции считаются наиболее специфическими в серологической диагностике сифилиса. И все же, РИТ, невзирая на ее специфичность, не рекомендуют для использования в широкой практике из-за трудоемкости постановки.

Иммуноферментный анализ (ИФА) проводят как с кадриолипиновым антигеном (неспецифическая, отборочная реакция), так и с трепонемным (специфическая реакция), которая подтверждает диагноз сифилиса.

Принцип непрямого метода ИФА заключается в том, что к антигену, адсорбируемому на твердой фазе в лунках планшеты, вносят исследуемую сыворотку. Если она содержит антитела против трепонем, образуется комплекс антитело антигена (I фаза). После отмывания несвязанных неспецифических антител в лунки вносят антиглобулиновую сыворотку, конъюированную с ферментом (чаще всего из пероксидазы хрена). Конъюгат крепко присоединяется к комплексу антитело антигена (ІІ фаза).

После отмывания несвязанного конъюгата в лунки добавляют окрашивающий субстрат ОФД - ортофенилендиамин (ІІІ фаза). Пероксидазную реакцию останавливают, добавляя серную кислоту. Для контроля ставят такие же пробы из положительной и заведомо негативной сыворотками.

Учет результатов анализа проводят с помощью фотометра, который определяет оптическую густоту в двуволновом режиме (492 нм и 620 нм). Для постановки реакции энзиммеченных антител, кроме фотометра, нужны одно- и восьмиканальные автоматические пипетки с наконечником, полипропилена, и соответствующие наборы диагностических систем теста.

Метод ИФА находит широкое использование в серологической диагностике сифилиса. Он одинаково эффективный для выявления болезни в инкубационном периоде (через 1-2 недели после инфицирования), при клинических проявлениях болезни и скрытых ее формах. Очень часто ИФА используют при скрининговых обследованиях населения, особенно на станциях переливания крови.

В лабораторной практике иногда применяют также реакцию иммунного прилипания (РИП) и реакцию непрямой гемагглютинации (РНГА). Первая из них основана на том, что патогенные тестикулярные трепонемы штама Никольса при смешивании с сывороткой больного в присутствии комплемента и эритроцитов человека прилипают к поверхности красных кровяных телец. РНГА достаточно широко используется для диагностики сифилиса благодаря своей методической простоте. Она становится позитивной уже через три недели после заражения. Позитивный результат реакции остается на протяжении лет после выздоровления. Аналогом этой реакции за рубежом является ТРНА (Treponema pallidum haemoagglutination).

Профилактика и лечение. Вакцинопрофилактика сифилиса не разработана в связи с отсутствием эффективных вакцин. Для химиотерапии используют антибиотики: пенициллин, цефалоспорины, а также препараты висмута и др.

 Другие трепонемы

Сходное с сифилисом заболевание — фрамбезия — вызывается подвидом Т. pallidum, T. pallidum subsp., T. pertenue. Заболевание распространено в странах с тропическим климатом. Возбудитель передается не только половымпутем, а главным образом через предметы обихода, при контакте с больным, имеющим кожные высыпания. Болезнь носит выраженный социальный характер, наблюдаются семейные вспышки.

 

 

Лабораторная диагностика, профилактика и лечение аналогичны тем, которые применяют для выявления, предупреждения и лечения сифилиса.

Другой трепанематоз — пинта — регистрируется также в странах с жарким климатом. Возбудитель — Т. carateum — по морфологическим, тинкториальным,

культуральным признакам не отличается от Т. pallidum. Заболевание характеризуется возникновением первичного аффекта в виде красной или коричневой папулы, а затем генерализацией процесса, сопровождающейся поражением кожи — возникновением различного цвета пятен, гиперкератозом подошв и ладоней, выпадением волос.

 

 

Лабораторная диагностика сводится к обнаружению трепонем в пораженных участках кожи и постановке серологических реакций с сывороткой больного..

Род Treponema включает ряд видов, экологически связанных с полостью рта человека. Сходные с Т. pallidum морфологически, эти микроорганизмы хорошо размножаются в анаэробных условиях на искусственных питательных средах, содержащих сыворотку. Большинство из них — сапрофиты, живущие в полости рта. Т. vincentii в ассоциации с фузобактериями (Fusobacterium necrophorum) участвует в развитии фузоспирохетоза — некротической ангины Венса-на — Плаута.