Методика проведения исследования и результаты

Первая работа выполнялась в конце сентября, вторая – вначале декабря. Взятия проб проводились в дневное время. Были взяты чашки Петри в количестве пяти штук, объемом 10 мл, наполненные мясо-пептонным агаром. Чашки были помещены в стерильный металлический бикс для лабораторной посуды, заранее пронумерованные маркером. Эти чашки были доставлены мною в школу для проведения исследования. Во время переноски в биксе питательная среда находилась в положении сверху.

Помещение столовой расположено в цокольном этаже в юго-восточном крыле школы. Чашка Петри со средой была помещена на обеденный стол. Экспозиция составила 15 минут, причем малая чашка была полностью открыта, большая – перевернута. Забор воздуха осуществлялся методом седиментации, который описывался выше. Следующий забор воздуха проводился, согласно списку, приведенному выше, в спортивном зале. Чашка Петри была поставлена на уровень роста людей, на подоконник. Третий забор воздуха был проведен в классной комнате (каб. №8). Чашка Петри находилась на парте ученика. В школьном коридоре второго этажа чашка была поставлена на подоконник. В гардеробной комнате - на стол. Экспозиция во всех помещениях была одинаковая и составляла 15 минут. В общей сложности постановка этого опыта заняла 1 час 15 минут. Затем все пять проб воздуха были принесены мною в стерильном металлическом биксе со списком в микробиологическую лабораторию , где были поставлены в термостат на трое суток (72 часа) при температуре 37⁰С. Через 72 часа с помощью специалиста был проведен подсчет выросших колоний на чашках Петри с питательной средой.

Колонии были разнообразные по форме: плоские, выпуклые, круглые; по цвету: желтые и белые. Выросшие колонии плесени были с преобладающим желтым окрашиванием и с легким налетом белого пушка. Отметим, что плесневые грибы способны расти не только на питательной среде, и при полной фазе развития на 21 день вступать в фазу цветения. После чего споры с потоком воздуха активно разносятся в окружающей среде. Кроме плесневых грибов на чашках имелись представители стафилококков, стрептококков и других бактерий. В спортивном зале в 1 м³ по подсчетам было 2 КОЕ (колонии образующие единицы) плесневых грибов. Такие же плесневые грибы обнаружены и в воздухе столовой.

Данные исследования представлены в приложении (таблица 2), где ясно выражена динамика уровней микробной загрязненности. Наиболее загрязненным микроорганизмами помещением является классная комната (каб. №8), затем спортивный зал, школьный коридор, столовая и гардеробная комната.

Высокая загрязненность классной комнаты и спортивного зала, по сравнению с другими помещениями объясняется большей интенсивностью движения людей, из-за чего усилена циркуляция пыли - главного переносчика микроорганизмов.

В Высшых учебных заведениях не практикуется смена внешней обуви на внутреннюю, что является основной причиной микробной загрязненности. Исходя из того, что микроорганизмы обильно размножаются в теплой и влажной средах, на остатках пищевых продуктов, на частицах пыли в затемненных местах помещений, мы можем сказать, что высокая микробность, выявленная в данных помещениях является закономерной. Но уровень микробной загрязненности, исходя из нормативов, не превышен.

Чтобы узнать есть ли различия микробной загрязненности по сезонам года, ряд проб воздуха в тех же помещениях в начале зимнего сезона (декабрь):

1. столовая

2. спортивный зал

3. учебная комната

Экспозиция во всех помещениях была одинаковая и составляла 15 минут. Все дальнейшие действия проводились в соответствии с первым опытом. Также совместно со специалистом был проведен подсчет выросших колоний на чашках Петри с питательной средой. Данные представлены в приложении (таблица 3), где ясно видно уменьшение количества микроорганизмов по сравнению с первым опытом. Такая динамика обусловлена рядом причин. В помещении столовой и учебная комнаты во время взятия проб воздуха проводилась текущая уборка с применением раствора хлорной извести. В спортивном зале занятие в зимний период проводятся в сменной обуви, в отличие от более раннего периода, когда некоторые учащиеся занимаются в той же спортивной обуви, в которой ходят и на улице. В спортивном зале микроскопия маска, взятого из колонии плесени №2 показала наличие гифов и мицелия плесневых грибов Aspergillus, что говорит о проникновении плесени из внешней среды. Малое количество колоний плесени говорит о том, что там нет благоприятных условий для развития плесневых грибов.

В помещениях для людей идет постоянная смена микроорганизмов в определенных соотношениях: кокковая микрофлора, различные плесневые и дрожжевые грибы, которые являются постоянной величиной и практически не зависят от сезонов года. Сравнив два эксперимента (смотри приложение таблица 4), мы видим небольшие различия микробной загрязненности, но, скорее всего они зависят не от сезонов года, а от других причин. В обоих случаях уровень микробной загрязненности не был превышен.

При превышении уровня загрязненности 1 м³ воздуха плесневыми грибами или их спорами более 1000 КОЕ можно было бы говорить о потенциальной опасности для здоровья человека.

Санитарно-бактериологическое исследование воздуха

Скопление и циркуляция возбудителей заболеваний в воздухе лечебно-профилактических учреждений является одной из причин возникновения госпитальных гнойно-септических инфекций, которые наносят колоссальный экономический ущерб, увеличивая стоимость лечения в 2 раза.

Вследствие этого в последнее время уделяют большое внимание санитарно-бактериологическому исследованию воздуха в больницах, операционных, родильных домах, детских учреждениях и др. Исследования проводят как в плановом порядке, так и по эпидемиологическим показаниям. Бактериологическое исследование воздушной среды предусматривает:

— определение общего содержания микробов в 1 м3 воздуха;

— определение содержания золотистого стафилококка в 1 м3 воздуха.

Отбор проб воздуха для бактериального исследования проводят в следующих помещениях:

* операционных блоках;

* перевязочных;

« послеоперационных палатах; « родильных залах;

* палатах для новорожденных;

* палатах для недоношенных детей;

* послеродовых палатах;

* отделениях и палатах интенсивной терапии и других помещениях, требующих асептических условий.

Методы отбора проб воздуха

Существуют два основных способа отбора проб воздуха для исследования:

1. седиментационный — основан на механическом оседании микроорганизмов;

2. аспирационный — основан на активном просасывании воздуха (этот метод дает возможность определить не только качественное, но и количественное содержание бактерий).

Пробы воздуха отбирают аспирационным методом с помощью аппарата Кротова, который состоит из трех основных частей: основания, корпуса и крышки. В крышке укреплен диск из прозрачного органического стекла с клиновидной щелью для засасывания воздуха. Для определения количества воздуха, прошедшего через прибор, на наружной стенке корпуса помещен ротаметр. В верхней части корпуса расположен вращающийся диск, на который устанавливается чашка Петри. Засасывание воздуха в прибор осуществляется центробежным вентилятором, насаженным на ось электродвигателя. Поступающая в прибор струя воздуха ударяется о поверхность находящейся в чашке питательной среды, оставляя на ней микроорганизмы, и, обтекая электродвигатель, выходит через ротаметр наружу.

Скорость протягивания воздуха составляет 25 л в минуту. Количество пропущенного воздуха должно составлять 100 литров для определения общего содержания бактерий и 250 литров для определения наличия золотистого стафилококка.

При отборе проб в разных помещениях необходимо обрабатывать поверхность аппарата, столик, внутренние стенки дезинфицирующим раствором 70° спиртом.

Определение микробного числа, патогенных микроорганизмов

Для определения общего содержания бактерий в 1 м3 воздуха забор проб проводят на 2% питательный агар. Посевы инкубируют при температуре 37° С в течение 24 часов, затем оставляют на 24 часа при комнатной температуре, подсчитывают количество выросших колоний и производят перерасчет на 1 м3 воздуха. Если на чашках питательного агара выросли колонии плесневых грибов, их подсчитывают и делают перерасчет на 1 м3 воздуха. В протоколе количество плесневых грибов указывают отдельно.

Расчет. Например, за 10 минут пропущено 125 литров воздуха, на поверхности выросло 100 колоний.

100x1000 л Число микробов в 1 м3 воздуха = — T -- = 800 л, т.е.

количество выросших колоний -1000 л количество пропущенного воздуха

Для определения наличия золотистого стафилококка забор проб проводят на желточно-солевой агар (ЖСА). Чашки помещают в термостат при температуре 37° С на 24 часа и выдерживают еще 24 часа при комнатной температуре, можно на 48 часов при температуре 37°С. Колонии, подозрительные на стафилококк, подлежат обязательной микроскопии и дальнейшей идентификации.

С желточно-солевого агара снимают в первую очередь колонии стафилококков, которые образуют радужный венчик вокруг колонии (положительная лецитовителлазная реакция). Дальнейшему изучению подвергают также пигментированные колонии и с отрицательной лецитовителлазной реакцией не менее двух колоний различного вида. Подозрительные колонии пересевают на чашки с кровяным или молочным агаром. Дальнейшее изучение их проводят по схеме.

Бактериологическое исследование на стафилококк

1-й день.

Посев на элективные среды (желточно-солевой, мол очно-солевой или молочно-желточно-солевой агар). Засеянные среды выдерживают в термостате при 37° С в течение 2 суток, либо одни сутки в термостате и дополнительно 24 часа на свету при комнатной температуре.

2—3-й день.

Просмотр чашек, фиксация в журнале характера и массивности роста. На вышеуказанных средах стафилококк растет в виде круглых блестящих, мастянистых, выпуклых пигментированных колоний. На средах, содержащих желток, золотистый стафилококк, выделенный от человека, в 60— 70% случаев образует радужный венчик вокруг колонии (положительная лецитовителлазная реакция).

Отвивка на скошенный агар для дальнейшего исследования не менее 2 колоний, подозрительных на стафилококк. Для исследования отвивают прежде всего колонии, дающие положительную лецитовителлазную реакцию.

Пробирки с посевом помещают в термостат при 37°С на 18—20 часов.

4-й день.

После суточной инкубации у выделенных штаммов проверяют морфологию, тинкториальные свойства (окраска по Граму) и наличие плазмокоагулирующей активности и хло-пьеобразующего фактора.

Под микроскопом окрашенные по Граму стафилококки имеют вид фиолетово-синих кокков, располагающихся гроздьями или небольшими кучками («кружево»).

Плазмокоагулирующую активность проверяют в реакции коагуляции плазмы (РКП). С учетом результатов РКП и лецитовителлазной активности в 70—75% случаев, на четвертый день исследования может быть подтверждена принадлежность вьщеленного штамма к виду золотистого стафилококка и выдан соответствующий ответ.

Если культура обладает только плазмокоагулирующей или только лецитовителлазной активностью, то для окончательного ответа требуется определение других признаков па-тогенности — ферментация маннита в аэробных условиях или ДНКазной активности.

Определение антибиотикограммы проводят только после выделения чистой культуры. Выделенные культуры золотистого стафилококка подлежат фаготипированию.

5-м день.

Учет результатов фаготипирования, определения чувствительности к антибиотикам, ДНКазной активности. Окончательная выдача ответа.

Исследование воздуха седиментационным методом допускается в исключительных случаях.

Чашки Петри с питательной средой (МПА) устанавливают в открытом виде горизонтально, на разном уровне от пола. Метод основан на механическом оседании бактерий на поверхность агара в чашках Петри. Чашки со средой экспонируют от 10 до 20 минут, в зависимости от предполагаемого загрязнения воздуха. Для выявления патогенной флоры используют элективные среды. Экспозиция в этих случаях удлиняется до 2—3 часов. После экспозиции чашки закрывают, доставляют в лабораторию и ставят в термостат на 24 часа при температуре 37 °С. На следующий день изучают выросшие колонии.

Выводы

1. Количество микроорганизмов в закрытых помещениях зависит от их вноса из внешней среды. Это в основном кокковая микрофлора, плесневые и дрожжевые грибы.

2. Количество микроорганизмов находящихся в воздухе закрытых помещений почти не зависит от сезонов года.

3. Микроорганизмы быстрее размножаются в теплой и влажной средах на остатках пищевых продуктов, в затемненных местах помещений.

4. Во – время уборки помещения с применением дезинфицирующих средств убивается огромное количество микроорганизмов.