- •IV. Гистологическая техника
- •Артефакты приготовления гистологического препарата и пути их устранения.
- •Техника безопасности при работе с биологическим материалом.
- •Оценка качества приготовления гистологического препарата
- •Архивирование материала, оставшегося от гистологического исследования.
- •Сроки хранения:
- •Архив патологоанатомической документации
IV. Гистологическая техника
Артефакты приготовления гистологического препарата и пути их устранения.
Артефактом (от латинского art – искусство и factum – сделанный) называют то, что создано искусственно. В гистологии артефактом называют признаки или структуры, возникающие на препаратах случайно или вследствие плохой обработки. Искажения истинного вида ткани могут возникнуть на любом этапе изготовления препарата.
К наиболее часто встречаемым артефактам фиксации относят:
Посмертную дегенерацию – возникает при несвоевременной фиксации или при взятии очень крупных кусочков материала
Сморщивание – возникает при слишком длительной фиксации
Выпадение осадка (темно-коричневый пигмент в виде зернышек или глыбок) – при использовании кислого формалина, плохом удалении фиксаторов
Для устранения зерен пигмента (осадка) на препарате срезы помещают:
в 1-5% раствор аммиака на 15-20 мин
в 70% спирт на 15-20 мин
в 1% раствор гидроксида калия в 80% спирте (1:25) на 10 мин
После чего срезы промывают водой и окрашивают
Чрезмерное уплотнение можно попытаться исправить, поместив кусочки ткани в 10% раствор лимонной кислоты на 1-2 часа.
Проявления посмертной дегенерации устранить нельзя.
Артефакты приготовления гистологических срезов и пути их устранения.
Причины проблемы |
Алгоритм действий для устранения причины: |
Срезы получаются слишком тонкие или толстые |
|
1. Угол наклона лезвия слишком мал |
Отрегулируйте угол наклона |
2. Образец плохо зафиксирован (в ориентационной насадке или зажиме для кассет) |
Проверьте, чтобы все винты и ручки, фиксирующие образец, были затянуты. Если необходимо, то затяните их еще раз.
|
3. Микротомный нож или лезвие затупились |
Используйте другие части режущего края или возьмите новый нож или лезвие |
Срезы сжатые. |
|
1. Микротомный нож или лезвие затупились |
Используйте другие части режущего края или возьмите новый нож или лезвие |
2. К ножу/лезвию прилип парафин |
Очистите нож/лезвие с помощью щетки, смоченной в ксилоле. Во время чистки ведите щетку вверх по направлению от режущего края, |
3. Блок слишком теплый |
Непосредственно переде микротомией, охладите блок при помощи специального спрея, на охлаждающей плате или в ледяной воде |
4. Угол наклона лезвия слишком велик |
Отрегулируйте угол наклона (постепенно уменьшайте угол наклона, пока не найдете оптимальный). Проверьте, зажат ли винт листовой пружины |
Срезы имеют царапины или разрывы |
|
1. Дефект режущей поверхности |
Немного продвиньте лезвие и посмотрите, изменилось ли вместе с этим расположение царапин на срезе. Если царапины тоже сместились, то замените лезвие |
2. На режущий край лезвия налип парафин |
Очистите лезвие с помощью щетки, смоченной в ксилоле. Во время чистки ведите щетку вверх по направлению от режущего края |
Не получается серия срезов |
|
1. Неверно выставлен угол наклона лезвия (слишком вертикально) |
Отрегулируйте угол наклона (постепенно изменяйте угол наклона, пока не нейдете оптимальный). |
2. Блок слишком теплый |
Непосредственно перед микротомией, охладите блок при помощи специального спрея, на охлаждающей плате или в ледяной воде |
3. Ткань плохо проведена |
Проведите повторную проводку и заливку образца |
4. Неправильно выбран тип лезвия |
Используйте лезвие для серийных срезов с углом режущего края 35º |
5. Лезвие затупилось |
Попробуйте резать другим участком лезвия или поменяйте лезвие на новое |
На срезах появляются отверстия: |
|
1. Ткань плохо проведена |
Проведите повторную проводку и заливку образца |
2. На режущий край лезвия налип парафин |
Очистите лезвие с помощью щетки, смоченной в ксилоле. Во время чистки ведите щетку вверх по направлению от режущего края, |
3. Поврежден режущий край лезвия |
Передвиньте лезвие или поменяйте его на новое |
Срезы закручиваются |
|
1. Неверно выставлен угол наклона лезвия (слишком вертикально) |
Отрегулируйте угол наклона ножа\лезвия |
2. Лезвие слишком острое |
Проведите тримминг лезвия, используя пустой парафиновый блок |
3. Неправильно выбран тип лезвия |
Используйте другие типы лезвий |
Артефакты окрашивания и заключения препаратов: