56. Искусственное осеменение кобыл

Кобыл, как и свиноматок, осеменяют только в матку. Для этого кобыл ставят в специальный станок или накладывают случную шлею. Конец хвоста кобылы забинтовывают во избежание попадания жестких волос во влагалище. Сперму необходимо подогреть в теплой воде до температуры 30—35°. Имеется несколько приемов введения спермы. Чаще используют резиновый катетер И. И. Иванова, соединенный со стеклянным шприцем емкостью 20—30 мл или ампулой емкостью 30 мл. Катетер рукой, предварительно подготовленной, вводят во влагалище и, установив степень открытия шейки матки, направляют конец катетера в канал шейки матки. Свободной рукой продвигают катетер вперед до тех пор, пока он не войдет в канал шейки матки на глубину 10— 12 см. Присоединив к катетеру шприц со спермой, медленно выталкивают сперму при помощи поршня. После осеменения катетер вынимают. Иногда применяют эбонитовый катетер, который вводится при помощи зеркала. Осеменяют кобыл также ампульным способом, ампула вмещает 30 мл спермы. Ампула является емкостью для перевозки спермы, для чего оба ее конца закрывают резиновыми колпаками. При осеменении кобыл с острого конца ампулы снимают колпачок, присоединяют к резиновому или эбонитовому катетеру, открывают конец ампулы с другой стороны и слегка поднимают. Можно вводить ампулу в шейку матки, а сперму выталкивать резиновым баллоном, соединенным с ампулой резиновой трубкой. Доза спермы во всех случаях осеменения как разбавленной, так и неразбавленной должна составлять 20—40 мл.

57. Оценка концентрации и активности (подвижности) сперматозоидов

Подсчет количества сперматозоидов в семенной жидкости — важнейший компонент базового анализа спермы. Концентрация сперматозоидов — количество сперматозоидов на единицу объема семенной жидкости. Обычно этот показатель выражают в миллионах сперматозоидов на миллилитр (млн/мл). Концентрация сперматозоидов сама по себе не отражает общего количества сперматозоидов в эякуляте. Число сперматозоидов подсчитывают с учетом концентрации и объема эякулята. Разработано два метода определения концентрации спермы. Оба включают подсчет определенного количества разжиженной спермы в специальном резервуаре. Независимо от выбранного метода, необходимо удостовериться, что образец спермы хорошо перемешан. Для этого контейнер осторожно взбалтывают, однако не следует энергично встряхивать сосуд. Концентрацию сперматозоидов в образце можно определить методом Нейбауэра с использованием гемоцитометра. Гемоцитометр Нейбауэра — один из специально разработанных резервуаров для подсчета, применяемых на данный момент. С помощью нагнетательной пипетки оба резервуара наполняют хорошо перемешанной разбавленной спермой. Резервуар оставляют на 5 мин для оседания клеток. Подсчитывают только отдельные сперматозоиды на сетке. Изолированные головки, хвосты и другие клетки зародышевой линии должны быть отмечены, но их не подсчитывают. После подсчета сперматозоидов с одной стороны резервуара производят подсчет на второй решетке. Затем находят среднее значение. Если отдельные значения отличаются от среднего более чем на 5%, следует провести тест повторно. Если оба полученных при подсчете значения засчитываются, среднее значение делят на вычисленную площадь поверхности и умножают на коэффициент разбавления, таким образом находят концентрацию сперматозоидов в первоначальном образце спермы (млн/мл). Затем можно подсчитать количество сперматозоидов, умножив значение концентрации сперматозоидов на объем эякулята. Счетная камера Маклера (Sefi Medical Instruments, Haifa, Israel) — специальный прибор, разработанный для быстрого анализа спермы. С момента изобретения в 1980 г. счетная камера Маклера получила широкое распространение и используется теперь во многих лабораториях. Главное преимущество камеры Маклера перед гемоцитометром Нейбауэра — отсутствие необходимости разбавлять образец спермы (за исключением случаев крайне высокой концентрации). Кроме того, подвижность и прогрессивно-поступательное движение можно оценивать во время вычисления концентрации сперматозоидов. Хотя камера Маклера упрощает определение концентрации при анализе спермы, данный метод уступает традиционной гемоцитометрии в точности и имеет тенденцию к получению ошибочных результатов. Понятие «-зооспермия» относится к наличию сперматозоидов в эякуляте. Пациентов с концентрацией сперматозоидов менее 20х106/мл классифицируют как страдающих олигозооспермией. Азооспермия — полное отсутствие сперматозоидов в эякуляте. Диагноз азооспермии ставят лишь после микроскопического подтверждения отсутствия сперматозоидов в осадке после центрифугирования неразбавленного образца спермы. Подвижность сперматозоидов и их прогрессивно-поступательное движение Хотя общее количество подвижных сперматозоидов — важный показатель потенциала фертильности, качество движения сперматозоидов тоже необходимо оценивать. Обычно регистрируют как количественные, так и качественные показатели спермы. Анализ подвижности и способности продвигаться вперед следует проводить в течение 1-2 ч с момента получения эякулята. Необходимо содержать образец при комнатной температуре, чтобы подвижность сперматозоидов не снизилась. При количественном анализе рассматривают не менее 200 сперматозоидов в пяти отдельных областях. Их классифицируют как проявляющие нормальное движение, аномальное движение или не проявляющие движения. Подвижность подсчитывают как процент сперматозоидов, демонстрирующих жгутиковое движение, по сравнению с их общим количеством. В дополнение к количественному анализу для оценки прогрессивного характера движения сперматозоидов применяют несколько классификационных систем. Некоторые из них оценивают продвижение отдельных сперматозоидов и подсчитывают их отдельно; другие рассматривают прогрессирующее движение как модальный компонент подвижных сперматозоидов. Система классификации ВОЗ за 1999 г. выделяет четыре категории сперматозоидов: • категория А включает сперматозоиды с быстрым прогрессирующим движением; • к категории В относят медленные или инертные сперматозоиды; • категория С — сперматозоиды с непрогрессирующим движением; • категория D — неподвижные сперматозоиды. Процентное соотношение категорий сперматозоидов регистрируют. В нормальном образце спермы содержится, по меньшей мере, 50% подвижных сперматозоидов, у большинства из них наблюдают хорошее прогрессирующее движение (модальный класс >2, классы А и В ВОЗ). Астенозооспермию диагностируют при количестве сперматозоидов с хорошей подвижностью менее 50%.