24. Разбавление спермы. Разбавители. Преимущества разбавления спермы

Чтобы увеличить объем эякулята, а также для того, чтобы сохранить оплодотворяющую спо­собность спермиев на более длительный срок, при хранении их вне организ­ма сперму разбавляют специальными средами.

Для сохранения спермы вне организма нужно создавать условия, кото­рые тормозили бы расходование внутренних запасов в спермиях и не вызы­вали их гибель.

Синтетическая среда обычно состоит из трех компонентов. В состав среды для спермы быка входят:

Сахара (глюкоза, лактоза) - служат источником энергии для спермиев. Помимо этого они участвуют в поддержании осмотического давления, пони­жают электропроводность среды, предохраняют спермии от потерь электри­ческого заряда. С желтком куриного яйца образуют биокомплексы, защи­щающие мембрану спермиев от повреждений при охлаждении.

Цитрат натрия. Создает буферность среды, нейтрализует конечные про­дукты жизнедеятельности спермиев, связывая ионы кальция и тяжелых ме­таллов, обеспечивает снижение их уровня до оптимального.

Глицерин. Защитное действие глицерина связано с понижением точки замерзания растворов. Глицерин задерживает начало кристаллизации (основ­ной причины гибели клеток при замораживании), замедляет рост кристаллов, снижает осмотическое давление растворенных веществ при замораживании до эвтектической точки (-46,5⁰С). Глицерин всегда находится в жидкой фазе раствора, вследствие чего концентрация осмотически активных веществ уменьшается, что и способствует сохранению клеток.

Желток куриных яиц. Содержит лецитин и липопротеины. Они создают на поверхности спермиев адсорбционный слой, предохраняющий спермии от холодового шока, который подстерегает спермии до температуры - 51⁰С, то есть пока в сперме сохраняется жидкая фаза.

Спермосан ППК. Комплексный антибактериальный препарат, состоя­щий из пенициллина, полимиксина, канамицина. Такая комбинация эффек­тивно тормозит размножение микроорганизмов в сперме.

Для разбавления и кратковременного хранения спермы быка при темпе­ратуре +2-5⁰С необходимы следующие компоненты: вода дистиллированная - 100 мл, глюкоза - 3 г, натрий лимоннокислый, трехзамещенный, пятивод-ный - 1,4 г, желток куриного яйца - 12 мл, спермосан ППК - 75000 ИЕ.

С момента получения спермы от производителя до разбавления должно пройти не более 10 мин. В зависимости от подвижности и концентрации спермиев сперму быка разбавляют так, чтобы в одной дозе при всех способах хранения перед осеменением было 10-15 млн. спермиев с прямолинейно-поступательным движением. Сперму быков, сохраненную при температуре +2-5⁰С, используют для осеменения коров и телок в течение 3 суток с актив­ностью спермиев не ниже 7 баллов, а после хранения в замороженном со­стоянии - не ниже 4 баллов.

Температура синтетической среды перед разбавлением спермы должна быть одинаковой со спермой (27-35°С). Среду осторожно приливают к спер­ме, соблюдая правила асептики.

Для разбавления и замораживания спермы быка в форме гранул (капе­лек) применяют лактозо-желточную среду следующего состава: вода дистил­лированная - 100 мл, лактоза - 11,5 г, желток куриного яйца - 20 мл, глице­рин - 5 мл.

Разбавляют сперму одномоментно, так чтобы в одной грануле (0,2 мл) после оттаивания содержалось не менее 15 млн. подвижных спермиев. Раз­бавленную сперму (температура 31±1,8°С) охлаждают при 2-5°С в течение 4 ч и замораживают на фторопластовых пластинках с лунками в специальных емкостях, заполненных жидким азотом. Наносят сперму на охлажденную пластину с помощью охлажденных шприцев или полиэтиленовой капельни­цы. После выдержки пластины в течение 1-2 мин над жидким азотом и затем в жидком азоте пластину поднимают до верхнего уровня емкости, охлажден­ной лопаткой сгребают гранулы в охлажденный контейнер или марлевый мешочек и переносят на хранение в специальное хранилище (КВ-620 и др.) емкостью 100-200 тыс. доз.