Глава 2. Объекты и методы исследования

2.1 Объекты исследования микробной деградации в пресной воде

Объектом исследования в настоящей работе были пресноводные тропические бактерии, обладающие способностью к биодеградации ПГА.

Материалом для исследования служили образцы полигидроксиалканоатов (ПГА) двух типов – гомополимера 3­гидроксимасляной кислоты (П3­ГБ) и сополимера 3-­гидроксимасляной и 3­гидроксивалериановой кислот (­П3ГБ/3­ГВ), имеющие близкие физико-химические свойства. Образцы помещали в чехлы из мелкоячеистого мельничного газа и погружали на глубину 0,3-0,5 м в искусственный водоем на климатической испытательной станции (г. Нячанг, Вьетнам) (Рисунок 1).

Рисунок 1 - Размещение чехлов с образцами полимеров

Морская научно-исследовательская и испытательная станция (МНИИС) «Дам Бай» расположена на острове Че в заливе Дам Бай (12º 14' с.ш., 109º 11' в.д.). Удалённость от моря ≈ 50 м. Является береговой и надводной станцией и занимает по площади 2 га на суше и 1,7 га морской акватории.

Таблица 1 – Гидропараметры пресной воды в бассейне с биополимерами

Дата	Температура	Кислород	pH	Соленость
06.12.2011	24,3	1,6	7,9	5
16.12.2011	24,1	1,9	7,4	5
13.01.2012	23,4	2,4	7,5	3
06.02.2012	24,7	0,9	7,0	3

Образцы экспонировали в воде в течение 1 года (январь 2011 – февраль 2012 г.) Для выявле­ния микроорганизмов­-деструкторов ПГА высевали соскоб с поверхности полимеров на специализированную питательную среду. Посев производили в трехкратной повторности с использованием разведений 10 – 10⁵. Чашки с посевами выдерживали при температуре 28-30°С, анализ посевов проводили на 5-7 сутки культивирования.

2.2 Объекты исследования микробной деградации в почве

Материалом для исследования являлась почва, взятая из прикорневой зоны лиственницы (Larix sibirica L.), в которую размещали полимерные пленки из гомополимера (П3ГБ) и сополимера поли-3-гидроксибутирата с 3-гидроксигексаноатом (П3ГБ/3ГГ). Объектом исследований служила микрофлора, выделенная из этой почвы. Эксперимент проводился на территории дендрария Института леса СО РАН им В.Н. Сукачева.

Для изучения процессов биодеструкции ПГА в почве, образцы полимеров в виде пленочных дисков массой 60±6.5 мг (диаметр 30 мм, толщина 80±7 мкм) в нейлоновых сетчатых контейнерах, размещали в почве на глубине 5 см в прикорневой зоне лиственницы (Larix sibirica L.) (рисунок 2).

Рисунок 2 - Полимерные образцы 3ГГ и 3ГБ заложенные в почву

Эксперимент проведен в течение полевого сезона 2012 года в период с 23 мая по 4 ноября. Выявление микроорганизмов-деструкторов ПГА проводили в четыре этапа через 1 месяц экспонирования. Для этого из биопленки, сформированной на поверхности полимера, методом соскоба были взяты микробиологические пробы, которые высевали на специализированную питательную среду. В работе использовали разведения 10⁵ – 10⁸. Чашки с посевами выдерживали при температуре 30°С. Эксперименты проводили в 3-х кратной повторности.