Itogavya / Ответы к итоговой МБ №6 Частная вирусология (КубГМУ Live)

необходим для иРНК вируса, чтобы она распознала рибосому клетки. Если не будет КЭП

– трансляция не будет идти. В ядре с помощью РВ2 фермент откусывает КЭП от клеточной иРНК, а т.к. синтез клеточной иРНК происходит в ядре, вирусная иРНК должна проникнуть в ядро. В ядре синтезируется 3 типа вирусоспецифической РНК:

+РНК (иРНК, которая содержит на 5´конце КЭП клетки, а на 3´ конце полиадениловые последовательности).

кРНК - матрица для синтеза вирусной РНК. КЭП и полиадениловая последовательность отсутствуют.

–РНК – синтезируется с помощью РА фермента на матрице кРНК.

40.Каков механизм развития иммунодефицита человека в результате заражения его ВИЧ?

Распространение ВИЧ-инфекции связано главным образом с незащищенными половыми контактами, использованием загрязненных вирусом шприцев и игл, передачей вируса от инфицированной матери ребенку во время родов или при грудном вскармливании. В развитых странах скрининг донорской крови и ее изделий в значительной степени устранил возможность передачи вируса при их использовании.

ВИЧ заражает прежде всего клетки иммунной системы (CD4+ Т-лимфоциты, макрофаги и дендритные клетки), а также некоторые другие типы клеток. Инфицированные ВИЧ CD4+ Т-лимфоциты постепенно гибнут. Их гибель обусловлена главным образом тремя факторами: непосредственным разрушением клеток вирусом, запрограммированной клеточной смертью, убийством инфицированных клеток CD8+ Т-лимфоцитами.

Постепенно субпопуляция CD4+ Т-лимфоцитов сокращается, в результате чего клеточный иммунитет снижается, и при достижении критического уровня количества CD4+ Т- лимфоцитов организм становится восприимчивым к оппортунистическим (условнопатогенным) инфекциям.

41. Какие клетки организма поражает ВИЧ и какой рецептор имеют эти клетки?

ВИЧ поражает разные клетки тела человека, но в первую очередь – клетки иммунной системы – Т- лимфоциты (CD-4).

Рецептором для ВИЧ является дифференцировочный антиген CD4 - (СD - аббревиатура от Сell Differention antigen), а также неспецифические, независящие от наличия CD4 компоненты. CD4 -гликопротеид с молекулярной массой 55 000, по своему строению имеющий гомологии с определенными участками иммуноглобулинов. Аналогичные гомологии имеет и белок вируса gp 120, что и определяет тропность ВИЧ. Расположенный на мембране иммунокомпетентных клеток Т-хелперов и Т- индукторов, рецептор CD4 выполняет функцию распознавания (в комплексе с белками HLA II класса)

21

антигенов. Фиксация вируса через gp120 ВИЧ-1 (или gp 105 в случае инфицирования ВИЧ- 2) с мембранным рецептором CD4 клетки хозяина блокирует основную функцию этих иммунокомпетентных клеток - восприятие сигналов от антигенпрезентирующих клеток. Последующая за рецепцией репликация вируса ведет к гибели клеток, выпадению функции, ими выполняемой - развитие иммунодефицита.

42. Какая иммунологическая реакция применяется для обнаружения поверхностного антигена ( HBsAg) вируса гепатита В и вирусоносителей?

АГ – HBS, один из антигенов вируса гепатита В, синтезируется в большом количестве, намного большем, чем необходимо для получившихся вирионов, часть циркулирует в крови в виде полый образований d – 22 нм, а длинна 22 – 700 нм.

HBsAg определяется в сыворотке за несколько дней до начала появления симптомов и присутствует в течении острой инфекции, его присутствие означает, что пациент инфекционен. У HBsAg – положительных пациентов в сыворотке обнаруживают HBV-ДНК.

HBsAg – основной серологический маркер ГВ. При остром гепатите HBsAg может быть выявлен в крови обследуемых в инкубационный период ГВ и в первые 4–6 недель клинического периода. Присутствие HBsAg более 6 мес. (по мнению некоторых авторов, более 1 года) рассматривается как фактор перехода болезни в хроническую стадию.

Контроль донорской крови на наличие HBsAg является обязательным практически во всех странах мира. Однако, использование большинства иммуноферментных тестов для определения этого маркера не позволяет со 100%-й вероятностью выявить ВГВинфекцию у обследуемых лиц. Ложноотрицательные результаты могут быть обусловлены тем, что:

концентрация НВsAg в крови инфицированных ВГВ людей чрезвычайно мала, например, на ранней стадии инфекции или перед прекращением циркуляции НВsAg в крови, а также при микст-инфицировании вирусами гепатитов В и С или ВГВ и ВИЧ. Содержание НВsAg в таких случаях в сыворотке крови может составлять всего несколько пг/мл, что гораздо ниже чувствительности существующих наборов реагентов для его определения.

применяемые диагностические наборы неспособны выявлять некоторые субтипы HBsAg,

аминокислотные замены в антигенных детерминантах молекулы HBsAg способны значительно снижать связывание с ними антител, применяемых в тестах. Циркуляция «ускользающих» мутантов ВГВ (escape-mutants), экспрессирующих HBsAg с атипичными серологическими свойствами, является одной из наиболее сложных задач диагностики ГВ.

22

43. Каково значение гемагглютининов вируса гриппа?

Основные функции гемагглютинина:

распознает клеточный рецептор - мукопептид, имеющий N-ацетилнейрами-новую (сиаловую) кислоту;

обеспечивает слияние мембраны вириона с мембраной клетки и мембранами ее лизосом, т. е. отвечает за проникновение вириона в клетку;

определяет пандемичность вируса (смена гемагглютинина - причина пандемий, его изменчивость - эпидемий гриппа);

обладает наибольшими протективными свойствами, отвечая за формирование иммунитета.

У вирусов гриппа А человека, млекопитающих и птиц обнаружено 13 различающихся по антигену типов гемагглютинина, которым присвоена сквозная нумерация (отН1доН13).

44. Как устроены аденовирусы, чем представлен их геном; какие заболевания вызывают аденовирусы?

Аденовирусы были выделены из культуры клеток аденоидов (миндалин) детей, в которых они вызывали ЦПД. В настоящее время известно более 90 серотипов аденовирусов млекопитающих.

Структура и химический состав. Нуклеокапсид вириона представляет собой сферические частицы диаметром 70-90 нм. Капсид построен из 252 капсомеров по кубическому типу симметрии. От 12 вершин икосаэдра отходят отросткифибры. Внешняя оболочка отсутствует. Аденовирусы состоят из ДНК и белков.

Г

еном аденовирусов состоит из двунитевой линейной ДНК с мокулярной массой 20-25 мД. С молекулой ДНК ковалентно связан внутренний белок. инициирующий репликацию ДНК. Внутренние белки в комплексе с ДНК формируют сердцевину вириона, расположенную под вершинами капсида.

В организме человека первичная репродукция аденовирусов происходит в эпителиальных клетках слизистой оболочки дыхательных путей и кишечника, в конъюнктиве глаза и в лимфоидной ткани. При циркуляции в крови аденовирусы поражают эндотелий сосудов. Это приводит к экссудативному воспалению слизистых оболочек, к образованию фибринозных пленок и некрозу. Аденовирусы могут проникать через плаценту, вызывая внутриутробные заболевания, аномалии развития плода, смертельные пневмонии новорожденных.

Чаще всего аденовирусы вызывают острые респираторные заболевания (фарингиты, ларингиты, трахеобронхиты). У детей и у пожилых людей могут развиться затяжные

23

формы мелкоочаговой или интерстициальной аденовирусной пневмонии. Для аденовирусной инфекции характерно сочетанное поражение слизистой оболочки и лимфоидных тканей миндалин, аденоидов и конъюнктивы глаза (фарингоконъюнктивальная лихорадка).

Нередки случаи эпидемических вспышек конъюнктивитов одного или обоих глаз. Кишечные аденовирусы вызывают у детей младшего возраста вспышки гастроэнтерита. В некоторых случаях наблюдаются длительная персистенция аденовирусов в организме человека и переход в хроническую форму инфекции (хронические тонзиллиты, гаймориты, ангины и др.). У детей возможна аллергизация организма, сопровождающаяся развитием астматического бронхита и ларинготрахеита.

45. В чем заключается сущность иммуноферментного метода диагностики инфекционных заболеваний?

Сущность метода ИФА. Имеется множество типов тест-систем, направленных на выявление того или иного возбудителя болезни. Однако, принцип действия всех практически одинаков – в его основе лежит т.н., сэндвич-метод.

В кровь, мочу или другой биосубстрат испытуемого добавляется конъюгат – антивидовой иммуноглобулин, помеченный ферментом. Если в крови имеется искомое антитело или антиген, происходит реакция с образованием окрашенного продукта. Его остается только зафиксировать – визуально или фотометрическим способом.

Зачастую регистрация проводится при помощи специальных спектрометров, имеющих вертикальный луч света с определенной длиной волны.

46. Какие вакцины используют для создания активного коллективного иммунитета против гепатита В?

Все вакцины подразделяются на живые и инактивированные. Инактивированные вакцины, в свою очередь, делят на:

Корпускулярные - представляют собой бактерии или вирусы, инактивированные химическим (формалин, спирт, фенол) или физическим (тепло, ультрафиолетовое облучение) воздействием. Примерами корпускулярных вакцин являются: коклюшная (как компонент АКДС и Тетракок), антирабическая, лептоспирозная, гриппозные цельновирионные, вакцины против энцефалита, против гепатита А (Аваксим), инактивированная полиовакцина (Имовакс Полио, или как компонент вакцины Тетракок).

Химические - создаются из антигенных компонентов, извлеченных из микробной клетки. Выделяют те антигены, которые определяют иммуногенные характеристики

24

микроорганизма. К таким вакцинам относятся: полисахаридные вакцины (Менинго А+С, АктХИБ, Пневмо 23, Тифим Ви), ацеллюлярные коклюшные вакцины.

Рекомбинантные - для производства этих вакцин применяют рекомбинантную технологию, встраивая генетический материал микроорганизма в дрожжевые клетки, продуцирующие антиген. После культивирования дрожжей из них выделяют нужный антиген, очищают и готовят вакцину. Примером таких вакцин может служить вакцина против гепатита В (Эувакс В). Инактивированные вакцины выпускают как в сухом (лиофилизированном), так и в жидком виде.

Живые. Живые вакцины изготовляют на основе ослабленных штаммов микроорганизма со стойко закрепленной авирулентностью (безвредностью). Вакцинный штамм, после введения, размножается в организме привитого и вызывает вакцинальный инфекционный процесс. У большинства привитых вакцинальная инфекция протекает без выраженных клинических симптомов и приводит к формированию, как правило, стойкого иммунитета. Примером живых вакцин могут служить вакцины для профилактики краснухи (Рудивакс), кори (Рувакс), полиомиелита (Полио Сэбин Веро), туберкулеза, паротита (Имовакс Орейон). Живые вакцины выпускаются в лиофилизированном (порошкообразном) виде (кроме полиомиелитной). Анатоксины. Эти препараты представляют собой бактериальные токсины, обезвреженные воздействием формалина при повышенной температуре с последующей очисткой и концентрацией. Анатоксины сорбируют на различных минеральных адсорбентах, например на гидроокиси алюминия. Адсорбция значительно повышает иммуногенную активность анатоксинов. Это связано как с созданием \"депо\" препарата в месте введения, так и с адъювантным действием сорбента, вызывающего местное воспаление, усиление плазмоцитарной реакции в регионарных лимфатических узлах. Анатоксины обеспечивают развитие стойкой иммунологической памяти, этим объясняется возможность применения анатоксинов для экстренной активной профилактики дифтерии и столбняка.

47. Каков механизм противовирусного действия интерферона?

Помимо противовирусного действия интерферон обладает противоопухолевой защитой, так как задерживает пролиферацию (размножение) опухолевых клеток, а также иммуномодулирующей активностью, стимулируя фагоцитоз, естественные киллеры, регулируя антителообразование В-клетками, активируя экспрессию главного комплекса гистосовместимости.

Механизм действия интерферона сложен. Интерферон непосредственно на вирус вне клетки не действует, а связывается со специальными рецепторами клеток и оказывает влияние на процесс репродукции вируса внутри клетки на стадии синтеза белков.

25

48. Каковы особенности репликации вирусов, у которых геном представлен однонитчатой РНК?

Вирусы, содержащие однонитчатые РНК, делятся на две группы. У вирусов первой группы вирусный геном обладает функциями информационной РНК, т.е. может непосрдственной переносить закодированную в нем информацию на рибосомы. По предложению Д.Балтимора (1971), РНК со свойствами информационной условно обозначена знаком «плюс» и в связи с этим вирусы, содержащие такие РНК (пикорнавирусы, тогавирусы, коронавирусы, ретровирусы), обозначены как «плюс - нитевые» вирусы, или вирусы с позитивным геномом.

Вторичная структура вирусных РНК . Вторая группы РНК-содержащих вирусов содержит геном в виде однонитчатой РНК, которая сама не обладает функциями иРНК. В этом случае функцию иРНК выполняет РНК, комплементарная геному. Синтез этой РНК (транскрипция) осуществляется в зараженной клетке на матрице геномной РНК с помощью вирусспецифического фермента – транскриптазы. В составе «минус-нитевых» вирусов обязательно присутствие собственного фермента, осуществляющего транскрипцию геномной РНК и синтез иРНК, т.к. аналога такого фермента в клетках нет. Геном этих вирусов условно обозначают как «минус»- РНК, а вирусы этой группы как «минуснитевые» вирусы, или вирусы с негаивным геномом. К этим вирусам относятся ортомиксовирусы, парамиксовирусы, буньявирусы, рабдовирусы. РНК этих вирусов не способна вызвать инфекционный процесс. В соответствии с разными свойствами вирусных РНК между двумя группами вирусов есть и структурные различия. Поскольку РНК «плюс-нитевых» вирусов выполняет функцию иРНК, она имеет специфические структурные особенности, характерные для 5'- и 3’-концов этих РНК.

49. Какова особенность серологической диагностики гриппа? Как ставится и оценивается эта реакция?

Для серологической диагностики гриппа широко используют два теста — РСК и РТГА, реже — реакцию нейтрализации (РН) и реакцию торможения непрямой гемагглютинации (РНГА). Независимо от применяемого метода диагноз гриппа ставится в случае нарастания титра антител в сыворотке реконвалесцентов (выздоравливающих больных) в 4 и более раз по сравнению с сывороткой, взятой в острой фазе болезни, в условиях одномоментного исследования обеих сывороток. Каждая из указанных реакций имеет свои достоинства и недостатки.

Преимуществом РСК в диагностике гриппа является отсутствие влияния на результаты исследования изменений антигенной структуры циркулирующего возбудителя, а также неспецифических ингибиторов в исследуемой сыворотке, существенно осложняющих постановку РТГА. Недостатком РСК является сложность и трудоемкость данного метода, требующего для своей постановки около 3 дней.

26

РТГА, благодаря простоте выполнения и высокой специфичности, стала наиболее широко используемым методом серологической диагностики гриппа, имеющим, однако, и ряд существенных недостатков: влияние неспецифических ингибиторов гемагглютинации, для устранения которого требуется использование специально отобранных ингибиторорезистентных штаммов; сравнительно невысокая чувствительность реакции, что затрудняет выявление низких концентраций антител; частые расхождения результатов РТГА при обследовании одних и тех же сывороток в разных лабораториях.

50. Что собой представляет возбудитель дельта-гепатита?

Вирус гепатита D (δ – гепатит) (BFD) впервые был обнаружен в 1977 г. Ризетто. ВГВ не классифицирован. ВГВ является сателлитом (спутником) вируса гепатита В и представляет дефектный вирус, не имеющий собственной оболочки.

Вирион BFD имеет сферическую форму (диаметр 36 нм), который состоит из однонитчатой РНК и сердцевинного HDc-антигена (дельта-антигена), который построен из двух белков, имеющих полипептидные цепи разной дли ны. Эти белки регулируют синтез генома вируса: один белок стимулирует синтез генома, другой — тормозит. Различают три генотипа вируса.

В России преобладает 1 генотип. Все генотипы относятся к одному серотипу. В качестве внешней оболочки BPD использует HBs-антиген внешней оболочки вируса гепатита В. Резервуаром BFD в природе являются носители ВГВ. Заражение ВГО аналогично инфицированию ВГВ. Одновременное инфицирование ВГВ и ВГВ (коинфекция) приводит к развитию умеренной формы болезни. Инфицирование ВГВ больных хронической формой гепатита В утяжеляет течение инфекции, приводя к развитию острой печеночной недостаточности и цирроза печени. РНК вируса можно обнаружить в гепатоцитах ПЦР. Диагностика осуществляется серологическим методом путем определения антител к ВГО методом ИФА.

Для профилактики гепатита D применяются все те мероприятия, которые используют для профилактики гепатита В. Для лечения используют препараты интерферона. Вакцина против гепатита В защищает и от гепатита D.

51. Как происходит заражение гепатитом В?

Вирус гепатита В предается с кровью, слюной, мочой, спермой и другими биологическим жидкостями носителя вируса. Заражение происходит при попадании биологических жидкостей зараженного непосредственно в кровь здорового человека, при отсутствии у него иммунитета к гепатиту В.

27

Заражение гепатитом В через кровь

Чаще всего передача вируса происходит при использовании одного шприца для введения наркотиков, при пренебрежении нормами по стерильной обработке инструментов для нанесения татуировок и прокалывания пирсинга, медицинских инструментов в стоматологических и других клиниках, хирургических инструментов при операциях, при переливании крови инфицированного гепатитом В.

Заражение гепатитом В половым путем

Вирусный гепатит В может передаваться при половой связи с инфицированным. Вероятность заражения гепатитом В половым путем достаточно высока и по статистике составляет примерно 30%. Так как заболевание в первый период протекает чаще всего бессимптомно, то определить является ли Ваш партнер носителем гепатита В практически не возможно. Избегайте случайных половых связей и сделайте прививку от гепатита В.

Передача гепатита В от матери ребенку

Вирус гепатита В при беременности плоду не передается, заражение чаще всего происходит при родах, когда велика вероятность контакта крови. Либо при патологиях, таких как нарушение целостности плаценты во время беременности.

Детям родившимся от инфицированной матери сразу после родов делают прививку от гепатита В, что значительно уменьшает риск развития хронического гепатита.

Бытовой путь передачи вируса гепатита В

Вирус гепатита B присутствует в слюне, слезах, поте, моче больных, но, чаще всего, в недостаточном количестве для заражения даже при попадании на поврежденную кожу и слизистые оболочки другого человека. Тем не менее риск заражения всё равно есть. При отсутствии у здорового человека повреждений кожного покрова и слизистых, инфицирование вирусом гепатита В при контакте не происходит.

52. Какая разница между позитивным и негативным вариантом однонитчатых РНКгеномов и механизмами их репликации?

Репликация однонитчатых РНК осуществляется в два этапа: вначале синтезируются комплементарные геному нити, которые в свою очередь становятся матрицами для синтеза копий генома. У «минус-нитевых» вирусов первый этап репликации — образование комплементарных нитей сходен с процессом транскрипции.

Однако между ними есть существенное отличие: если при транскрипции считываются определенные участки генома, то при репликации считывается весь геном. Например, иРНК парамик-совирусов и рабдовирусов являются короткими молекулами, комплементарными разным участкам генома, а иРНК вируса гриппа на 20—30 нуклеотидов короче каждого фрагмента генома. В то же время матрицы для репликации

28

являются полной комплементарной последовательностью генома и называются антигеномом. В зараженных клетках существует механизм переключения транскрипции на репликацию. У «минуснитевых» - + . вирусов этот механизм обусловлен маскировкой точек терминации транскрипции на матрице генома, в результате чего происходит сквозное считывание генома.

Точки терминации маскируются одним из вирусных белков. При репликации растущая «плюс-нить» вытесняет ранее синтезированную «плюснить» либо двухспиральная матрица консервируется . Более распространен первый механизм репликации. Репликативные комплексы. Поскольку образующиеся нити ДНК и РНК некоторое время остаются связанными с матрицей, в зараженной клетке формируются реплика­ тивные комплексы, в которых осуществляется весь процесс репликации (а в ряде случаев также и транскрипции) генома.

Репликативный комплекс содержит геном, репли-казу и связанные с матрицей вновь синтезированные цепи нуклеиновых кислот. Вновь синтезированные геномные молекулы немедленно ассоциируются с вирусными белками, поэтому в репликативных комплексах обнаруживаются антигены. В процессе репликации возникает частично двунитчатая структура с однонитчатыми «хвостами», так называемый репликативный предшественник.

53. Какие серологические реакции можно использовать для диагностики вирусных инфекций?

При большинстве вирусных инфекций развиваются иммунные реакции, применяемые для диагностики. Клеточные реакции обычно оценивают в тестах цитотоксичности лимфоцитов в отношении инфекционных агентов или заражённых ими клеток-мишеней либо определяют способность лимфоцитов отвечать на различные Аг и митогены. В работе практических лабораторий выраженность клеточных реакций определяют редко. Большее распространение нашли методы идентификации противовирусных AT.

Торможение гемагглютинации РТГА применяют для идентификации вирусов, способных агглютинировать различные эритроциты. Для этого смешивают культуральную среду, содержащую возбудитель, с известной коммерческой антисывороткой и вносят в культуру клеток. После инкубации определяют способность культуры к гемагглютинации и при её отсутствии делают заключение о несоответствии вируса антисыворотке.

Торможение цитопатического эффекта интерференцией вирусов Реакцию торможения цитопатического эффекта за счёт интерференции вирусов применяют для идентификации возбудителя, интерферирующего с известным цитопатогенным вирусом в культуре чувствительных клеток. Для этого в культуральную среду, содержащую изучаемый вирус, вносят коммерческую сыворотку (например, к вирусу краснухи при

29

подозрении на неё), инкубируют и заражают вторую культуру; через 1-2 дня в неё вносят известный цитопатогенный вирус (например, любой ЕСНО-вирус). При наличии цитопатогенного эффекта делают вывод о том, что первая культура была заражена вирусом, соответствовавшим применённым AT. Прямая иммунофлюоресценция Среди прочих тестов наибольшее распространение нашла реакция прямой иммунофлюоресценции (наиболее быстрая, чувствительная и воспроизводимая). Например, идентификация ЦМВ по цитопатогенному эффекту требует не менее 2-3 нед, а при использовании меченых моноклона л ьных AT идентификация возможна уже через 24 ч. Имея набор подобных реагентов, их можно вносить в культуры, заражённые вирусом, инкубировать, отмывать несвязавшийся реагент и исследовать с помощью люминесцентной микроскопии (позволяет выявить наличие флюоресценции заражённых клеток).

Иммуноэлектронная микроскопия (аналог предыдущего метода) позволяет идентифицировать различные виды вирусов, выявленные электронной микроскопией (например, различные виды герпесвирусов), что невозможно сделать, основываясь на морфологических особенностях. Вместо антисывороток для идентификации используют помеченные разными способами AT, но сложность и дороговизна метода ограничивают его применение.

54. Чем характеризуется возбудитель гепатита А?

(В вопросе отсутствует конкретика, так что будем рассказывать все)

Вирус Гепатита A вызывает острую инфекционную болезнь, характеризующуюся лихорадкой, преимущественным поражением печени, интоксикацией, иногда желтухой и отличающуюся склонностью к эпидемическому распространению.

Таксономия, морфология и антигенная структура. Вирус гепатита А относится к семейству Picornaviridae роду Hepatovirus. Типовой вид — вирус гепатита А — имеет один серотип. Это РНК-содержащий вирус, просто организованный, имеет диаметр 27— 28 нм и один вирусоспецифический антиген. Культивирование. Вирус выращивают в культурах клеток. Цикл репродукции более длительный, чем у энтеровирусов, цитопатический эффект не выражен.

Резистентность. Вирус гепатита А отличается большей, чем у энтеровирусов, устойчивостью к нагреванию; он сохраняется при 60 °С в течение 12 ч, инактивируется при кипячении в течение 5 мин. Относительно устойчив во внешней среде (воде, выделениях больных).

Восприимчивость животных. Экспериментальную инфекцию возможно воспроизвести на обезьянках-мармозетках и шимпанзе.

30