65. Свойства стафилококковых энтеротоксинов

Они характеризуются антигенной специфичностью, термостабильностью, устойчивостью к действию формалина и пищеварительных ферментов. Устойчивы при диапозоне pH от 4.5 до 10.0. Энтеротоксины низкомолекулярные белки с м.м. от 26 до 34 кД со свойствами суперантиенов

66.(нашла с интернета )

Плазмокоагулазу выявляют путем внесения выделенной культуры в пробирку с цитратной плазмы кролика. Ее можно приготовить в любой лаборатории. У кролика из сердца берут 8 мл крови, вносят в пробирку с 2 мл 5% лимонно-кислого натрия и ставят в холодильник. После полной осадки форменных элементов плазму отсасывают в стерильную пробирку. Она может храниться в холодильнике 8-10 дней. Перед использованием ее разводят 1:5 (1 мл плазмы и 4 мл изотонического раствора хлорида натрия) и разливают в аглютинацийни стерильные пробирки по 0,5 мл. Полную петлю культуры стафилококков эмульгируют в плазме и помещают в термостат на 3 часа, затем оставляют при комнатной температуре на 18-20 часов. Предварительный учет свертывания плазмы проводят через 3 ч, окончательный - на второй день. Очень удобно пользоваться стандартной сухой цитратной плазмы кролика. Перед употреблением в ампулу добавляют 1 мл изотонического раствора хлорида натрия и после полного растворения ее разводят 1:5. Плазма человека малопригодна для постановки реакции плазмокоагуляции, поскольку в ней могут быть консерванты, лекарственные вещества, антитела, которые могут подавлять образование плазмокоагулаза. Если выделена культура вызывает гемолиз, коагулирует плазму и дает положительную лецитовителазну реакцию, уже на третий день можно выдать результат на наличие S. aureus. Если культура обладает только плазмокоагулаза или только вителазну активность, для окончательного установления вида стафилококка необходимо определить дополнительные критерии патогенности: ферментацию маннита в анаэробных условиях, ДНК-азную активность, продукцию лизоцима, фосфатазы, а также определить чувствительность к новобиоцин.

67. Методы определения чувствительности к антибиотикам.

Чаще всего для определения чувствительности бактерий к антибиотикам используются два метода: метод дискови метод серийных разведений.

1. Метод дисков. Бумажные диски, пропитанные определенными антибиотиками, помещают на газон исследуемой бактериальной культуры в чашке Петри. Посевы инкубируют в течение 16-24 часов, после чего учитывают результаты опыта по образованию зон задерки роста бактерий.

По диаметру зон задержки роста ориентировачно судят о степени чувствительности бакторий к антибиотикам. Зона задержки до 15 мм указывает на слабую, до 25 мм – на среднюю и свыше 25мм – на высокую чувствительность. Более точные результаты получают при использовании метода серийных разведений.

2. Метод серийных разведений. Этот метод позволяет определить минимальную задерживающую концентрацию антибиотика для данного микроорганизма (МЗК) как на жидких, так и на плотных питательных средах.

МПБ разливают по 2мл в серрию пробирок. Готовят основной раствор антибиотика, ддля чего берут навеску антибиотика и растворяют в дистиллированной воде из расчета 1мг на мл растворителя.

Левомицетин предварительно растворяют в 96* этиловом спирте из расчета 0,25мл спирта на 1мг антибиотика; после полного растворения добавляют такое количество дистиллированной воды, чтобы раствор содежрал в 1мл 1 мгантибиотика.

Тетрациклин и окситетрациклин растворяют в сантинормальном растворе соляной кислоты из расчета 1мл на 1 мг антибиотика

Этиломицин сначало растворяют в чистом этиловом спирте из расчета 1 мл на 10мг эритромицина. После приготовления добавляют такое количество дистилированной воды, чтобы получить раствор, содержащий в 1мл1мг пнтибиотика

Эритромицин сначало растворяют в чистом этилом спирте из расчета 1 мл 1 мг антибиотика

Исходный материал антибиотика в количестве 2млвносят в первую пробирку с МПБ,перемещают и получают определенную его концентрацию.

Из первой пробирки 2мл разведенного антибиотика переносят во вторуу пробирку и после перешивания переносят 2мл в третью проьирку и т.д. до предпоследней, откуда 2мл выливают. Последняя пробирка является контролем, в ней нет антибиотика и она свидетельствует о пригодности среды для роста культуры.

После разведения антибиотика во все пробирки вносят по 0,1мл испытуемной бульонной культуры.Для этого используют 3-4 –часовые или 18-часовые культуры, разведенные МПБ в 50 раз. Пробирки помещают в термостат на 12-18 часов, но предварительно результаты можно учитывать через 6-8 часов.

По истечении необходимого срока инкубации определяют максимальное разведение антибиотика, которое еще подавляет рост культуры. Концентрация антибиотика в последней пробирке с видимой задержкой роста и представляет собой минимальную задерживающую концентрацию антибиотика (МЗК).

Штамм считается чувствительным к антибиотикам, если МЗК препарата для данного штамма соответствует концентрации этого препарата, создаваемой в организме.