- •Диагностика сифилиса
- •Методика постановки микрореакции
- •Техника постановки реакции связывания комплемента (реакции Вассермана)
- •Методика постановки реакции Вассермана со спиномозговой жидкостью
- •1) Неразведенную; 2) разведенную изотоническим раствором натрия хлорида 1:2; 3) разведенную изотоническим раствором натрия хлорида 1:5.
- •Реакция иммунофлюоресценции - риф-абс и риф-200
- •Техника постановки риф-абс
- •Методика постановки риф-абс с капиллярной кровью
- •Методика постановки риф-ц
- •Техника постановки риф-ц
- •Методика постановки рибт для ликвородиагностики сифилиса
- •Твердофазный иммуноферментный анализ (ифа)
- •Методика постановки ифа для ликвородиагностики сифилиса
Реакция иммунофлюоресценции - риф-абс и риф-200
В 1954 г. Т. Weller и A. Coons, а затем Deacon (1957) описали метод непрямой иммунофлюоресценции (РИФ). В этой реакции специфические трепонемные антитела исследуемой сыворотки больного после взаимодействия с трепонемным антигеном (взвесь бледных трепонем штамма Nichols) визуализируют методом люминесцентной микроскопии с помощью сыворотки против иммуноглобулинов человека, меченной ФИТЦ (флюороизотиоцианат).
Повышение качества РИФ путем различных манипуляций с сывороткой - РИФ-10, РИФ-200 (разведение в 10 и 200 раз, соответственно) - привело к созданию комплекса РИФ-абс и РИФ-200, который является высокочувствительным, специфичным и минимизирует количество ложноположительных результатов.
Согласно Приказу МЗ РФ №87, при диагностике сифилиса используют: РИФ-абс, РИФ-200, РИФц, РИФ с капиллярной кровью из пальца (последнюю - крайне редко). В приложении к Приказу подробно описаны методики постановки РИФ, оценки результатов реакции в «плюсах», а также при получении положительного результата в количественном варианте, который используют в дальнейшем для оценки излеченности.
В России РИФ в основном используется для подтверждения диагноза сифилиса и распознавания ложноположительных результатов, полученных в липидных тестах.
Реакция иммунофлюоресценции для специфической серо- и ликвородиагностики сифилиса
Принцип метода заключается в соединении специфического комплекса антиген - антитело с иммунной антивидовой сывороткой, меченной флюорохромом, и выявление его с помощью люминесцентного микроскопа.
Методика постановки РИФ-абс
Ингредиенты:
1. Испытуемая сыворотка крови. Кровь для получения сыворотки крови берут из локтевой вены в чистую и сухую пробирку в объеме 5 мл и обрабатывают так же, как для постановки реакции Вассермана. Инактивируют сыворотки крови однократно при температуре 56 град. С в течение 30 минут.
2. Антиген. В качестве антигена используют взвесь патогенных бледных трепонем штамма Никольса из 7-суточного орхита кролика. Получение и хранение антигена требует соблюдения условий стерильности, т. к. с одним и тем же антигеном реакция может ставиться в течение 2-4 месяцев. Для антигена следует выбирать ту взвесь, в которой не наблюдается агглютинация трепонем и имеется достаточное их количество. Перед каждой постановкой реакции взвесь хорошо перемешивают и исследуют в микроскопе с конденсором темного поля зрения для определения ее густоты. Для постановки РИФ-абс необходимо иметь взвесь, содержащую 40-60 трепонем в темном поле зрения, при наличии более густой взвеси ее необходимо развести.
3. Сорбент. В качестве сорбента для РИФ-абс может быть использован ультраозвученный трепонемный антиген для РСК. Он представляет собой разрушенную ультразвуком взвесь смеси культуральных бледных трепонем штаммов V, VII, VIII, IX и Рейтера.
Каждая серия сорбента перед использованием в РИФ- абс с диагностической целью должна быть оттитрована.
4. Антивидовая люминесцирующая сыворотка. Для исследования в РИФ - абс сывороток крови людей необходима меченная флюорохромом сыворотка крови животных, иммунизированных сывороточным белком человека.