- •Методы определения активности аминотрансфераз сыворотки крови
- •Методические указания к практическому занятию «Методы определения индикаторных ферментов в сыворотке крови »
- •1. Тема: Методы определения активности аминотрансфераз сыворотки крови
- •2. Практическое занятие для клинических интернов
- •3. Значение темы (актуальность изучаемой проблемы).
- •4. Цели обучения:
- •На основе теоретических знаний и практических умений обучающийся должен знать и уметь:
- •5. Основные понятия и положения темы (наглядные формы –таблицы и т.Д.)
- •5.1. Методы определения активности аминотрансфераз
- •Определение активности аминотрансфераз в сыворотке крови с использованием 2,4-динитрофенилгидразина
- •Индикаторная реакция
- •Основная реакция
- •5.2. . Преаналитический этап исследования активности ферментов аланинаминотрансфераза (АлАт)
- •Аспартатаминотрансфераза (АсАт)
Аспартатаминотрансфераза (АсАт)
Материал для исследования. Свежая капиллярная или венозная кровь без антикоагулянта или с антикоагулянтом гепарином и его солями натрия или лития (для экспресс-определения на анализаторе Свежая негемолизированная сыворотка или плазма крови.
Время взятия. При плановых исследованиях — 7—9 ч утра, при экспресс-анализах — любое время дня.
Подготовка пациента. Кровь берется натощак, пациент находится в положении лежа или сидя. Физические нагрузки и прием алкоголя исключены.
Методика взятия. См. АлАТ, Методика взятия. При получении сыворотки или плазмы после центрифугирования крови их необходимо как можно быстрее отделить от сгустка и клеток.
Условия доставки и хранения. Свежая капиллярная или венозная кровь используется для анализа в течение 2—3 мин, гепаринизированная кровь — в течение 15 мин. АсАТ в сыворотке стабильна при комнатной температуре в течение 1 дня в капилляре с гепарином — 15 мин, закрытой пробирке — 8 ч. Хранение сыворотки или плазмы при комнатной температуре в закрытом сосуде может быть увеличено до 4 дней при 2—8°С, при -20°С, по данным разных авторов, — от 3 мес (Сиаег У\/. и
соавт., 1996) до, по меньшей мере, 1 года (цит. Н. Тиц, ред., 1997) и даже неопределенно долго. При -70°С АсАТ стабильна до 5 лет .
Примечания. С возрастом активность АсАТ снижается. У женщин всех возрастов активность несколько меньше, чем у мужчин. В течение беременности происходит увеличение активности АсАТ. Физические нагрузки, курение, голодание, ожирение, прием пищи, алкоголя, сахарозы, травмы, операции, ожоги, алкоголизм, прерывание запоев, внутримышечные инъекции вызывают повышение активности АсАТ. Более высокая активность наблюдается в январе и марте по сравнению с авгу-
стом. В течение дня больших колебаний активности АсАТ не наблюдается.
Внутрииндивидуальная вариация 11,6%,
межиндивидуальная —13,6%.
Оттаивание замороженной сыворотки или плазмы с последующим замораживанием ведет к снижению активности АсАТ. В плазме активность АсАТ статистически достоверно более высокая, чем в сыворотке (гепарин).
Билирубинемия (в реакциях конечной точки с диазониевыми солями), гемоглобин и гемолиз (вслед-
ствие высокой активности АсАТ в эритроцитах и тромбоцитах), липемия, хранение цельной крови, ацетоацетат, кетоз (интерференция с диазониевыми солями) вызывают ложнозавышенные результаты.
Остатки жидкого мыла на лабораторной посуде, оксалацетат ингибируют активность АсАТ. Гепарин вызывает ложное завышение результатов в методе "сухой химии" на слайдах Лекарства, обладающие гепатотоксическим действием, и соли железа, вызывающие холестаз, увеличивают активность АсАТ, алкалоиды опия, аскорбиновая кислота, формальдегид, цианиды, фталат, тартрат, глютарат, истощение витамина Вб занижают результаты
Аналитическое занижение активности АсАТ вызывают: ацетоаминофен (при высоких концентрациях), аминофеназон, аскорбиновая кислота (в методе на тест-полосках анализатора), кло-
тианин, рифампин, пиндолол; завышение — ацетоаминофен (терапевтические дозы), аспирин (диазониевые методы), аскорбиновая кислота, хлордиазэпоксид, диклофенак, эритромицин, гентамицин, гидралазин, изониазид, изопротеренол, леводопа, метилдопа, нитрофурантоин, фенелзин,пиридоксаль, сульфатиазол, толбутамид.
Референтные интервалы для АсАТ и АлАТ, сыворотка, плазма (гепарин, ЭДТА, цитрат, оксапат) |
||||
Сыворотка, плазма ( МЕ/л ) |
АсАТ |
АлАТ |
||
Методы рекомендованные IFCC- и DGKC 37 °С |
||||
Взрослые |
мужчины |
10-35 |
|
10-35 |
женщины |
10-50 |
|
10-50 |
|
Дети |
1-3 года |
10-50 |
1-30 дней |
1-25 |
4-6 лет |
10-45 |
2-1 2 месяцев |
4-35 |
|
7-9 лет |
10-40 |
1-3 года |
5-30 |
|
10-1 2 лет |
10-40 |
4-6 лет |
5-25 |
|
13-1 5 лет |
10-35 |
7-9 лет |
5-25 |
|
16-1 8 лет |
10-35 |
10-1 8 лет |
5-30 |
|
6. Тестовые задания по теме:
Повышение сывороточной активности ферментов при патологии НЕ может являться следствием:
А. Увеличения синтеза ферментов Б. Увеличения проницаемости мембран и разрушения клеток, синтезирующих фермент В. Усиления органного кровотока Г. Клеточного отека Д. Снижением концентрации субстрата реакции
Наибольшая активность АЛАТ обнаруживается в клетках:
А. Миокарда Б. Печени В. Скелетных мышц Г. Почек Д. Поджелудочной железы
Наибольшая активность креатинкиназы характерна для:
А. Эритроцитов Б. Печени В. Мышц Г. Почек Д. Поджелудочной железы
Ответ:В
Наибольшая активность ГГТП обнаруживается в клетках:
А. Миокарда Б. Печени В. Скелетных мышц Г. Почек Д. Поджелудочной железы
При остром инфаркте миокарда на высоте подъема МВ-КК в сыворотке составляет от общей КК более:
А. 1% Б. 3% В. 6% Г. 25% Д. 40%
Наибольшая активность трансамидиназы обнаруживается в клетках:
А. Миокарда Б. Печени В. Скелетных мышц Г. Легких Д. Поджелудочной железы
Абсолютно органоспецифическим ферментом печени является:
А. Щелочная фосфатаза Б. АЛТ В. ГГТП Г. Гистидаза Д. Урокиназа
Определение активности сорбитолдегидрогеназы в сыворотке используется главным образом для диагностики поражений:
А. Сердца Б. Печени В. Скелетных мышц Г. Почек Д. Поджелудочной железы
ЛДГ-1 катализирует превращение:
А. Лактата в пируват Б. Пирувата в лактат В. Лактата в фосфоенолпируват
Г. Лактата в малат Д. Глюкозы в лактат
Изофермент ЛДГ-1 доминирует в:
А. Печени и селезенке Б. Скелетных мышцах В. Миокарде и почках Г. Лейкоцитах и лимфоузлах Д. Неопластических тканях
В норме МВ-КК в сыворотке составляет от общей КК менее:
А. 1% Б. 5% В. 10% Г. 25% Д. 40%
Гидроксибутиратдегидрогеназная реакция отражает:
А. Развитие осложнений при инфаркте миокарда Б. Рубцевание зоны инфаркта В. Активность ЛДГ-1 Г. Активность ЛДГ-5 Д. Интоксикацию организма
При хранении крови активность ферментов может меняться от:
А. Закисления среды Б. Активации протеолитических систем плазмы В. Температуры
Г. Продолжительности хранения Д. Всего перечисленного
Для печени НЕ является органоспецифичным фермент:
А. Сорбитолдегидрогеназа Б. Гистидаза В. АЛТ Г. Фосфофруктоальдолаза Д. Урокиназа
Для определения активности ферментов в оптимальных условиях следует стандартизировать:
А. РН Б. Температуру В. Концентрацию и природу буфера Г. Концентрацию субстрата
Д. Все перечисленное
Активность ряда ферментов в сыворотке выше, чем в плазме так как:
А. Ферменты освобождаются из тромбоцитов при образовании сгустка Б. В плазме ферменты сорбируются на фибриногене В. В плазме происходит полимеризация ферментов с потерей их активности Г. В сыворотке крови активируется синтез ферментов Д. В плазме присутствуют ингибиторы ферментов
Источником аналитических ошибок при определении активности ферментов может быть:
А. Концентрация субстрата, не насыщающая фермент Б. Изменение рН инкубационной смеси В. Не стабильность температуры в ходе инкубации Г. Использование реактивов с просроченным сроком годности Д. Любые перечисленные причины
При инфаркте миокарда повышается преимущественно сывороточная активность :
А. ЛДГ 5 Б. Холинэстеразы В. Альфа-амилазы Г. Креатинкиназы Д. Щелочной фосфотазы
При заболеваниях печени преимущественно повышается сывороточная активность:
А. КФК Б. Холинэстеразы В. ГГТП Г. ЛДГ-1 Д. липазы
Ферментативный спектр на выявление хронического гепатита включает:
А. АЛТ, АСТ, ГГТП, ХЭ, гистидазу, урокиназу Б. ЛДГ, КК, ГБДГ В. Изо-ферменты ЛДГ и КК Г. Изоферменты щелочной фосфотазы Д. Все перечисленные ферменты
Отношение активности АСТ/АЛТ ( коэффициент Де-Ритис) снижается при:
А. Остром и персистирующем вирусном гепатите Б. Инфекционном мононуклеозе В. Внутрипеченочном холестазе Г. Тяжелой жировой дистрофии печени Д. Любом из перечисленных состояний
При подготовке образцов крови для определения активности ЛДГ неверно, что:
А. Можно использовать гемолизированную сыворотку Б. Активность ЛДГ может увеличиваться на 25% за 1 час, если сыворотка не отделена от сгустка В. Сыворотка не может храниться в холодильнике более 3-х дней Г. Замораживание приводит к значительной потери активности Д. Оксалат и цитрат ингибируют фермент
Активность АСТ практически НЕ меняется в:
А. Плазме гепаринизированной крови Б. Плазме с ЭДТА В. Сыворотке, хранившейся в холодильнике 1 сутки Г. Замороженной сыворотке Д. Все перечисленное верно
Активность АЛТ в сыворотке существенно меняется при:
А. Хранении сыворотки при комнатной температуре в течении 2-х дней
Б. Хранении сыворотки в холодильнике в течении 1 недели В. Замораживание образцов более 2-х раз Г. Гемолизе Д. Всем перечисленном
Для измерения активности ферментов используют все перечисленные метоические принципы, КРОМЕ:
А. Непрерывного кинетического измерения Б. Двухточечного измерения
В. Измерения по конечной точке Г. Поляриметрического измерения Д. По начальной скорости
Изоферменты разделяют всеми методами, КРОМЕ:
А. Электрофореза Б. Ионообменной хроматографии В. Иммунологически с использованием специфических антисывороток Г. Используя различную субстратную специфичность изоферментов Д. Потенциометрически
12. Список тем по УИРС
1. Методы разделения изоферментов.
2. Органоспецифические ферменты в лабораторной диагностике.
3. Исследование ферментов в моче.
13. Список литературы по теме занятия:
Основная
Биохимия: Учебник для вузов/Под ред. Е.С. Северина.-3-е изд., испр. М.: ГЭОТАР- МЕД 2005
Клиническая биохимия: Учебное пособие / Ред. Ткачук В.А.-2-е изд., испр. и доп М.:ГЭОТАР-МЕД 2004
Камышников В.С. Клинико-биохимическая лабораторная диагностика: Справочник: в 2-х т.Т.1 Минск: Интерпрессервис , 2003
Камышников В.С. Справочник по клинико-биохимическим исследованиям и лабораторной диагностике.-2-ое изд., перераб. и доп, М.: Медпресс-информ 2004
Дополнительная
Лабораторная диагностика/Под ред. В.В. Долгова, О.П. Шевченко, М.:Реафарм, 2005
Бородина Г.П., Бородин Е.А. Биохимический диагноз (физиологическая роль и диагностическое значение биохимических компонентов крови и мочи.-3-изд., перер. и доп , Благовещенск , 2003
Хиггинс К. Расшифровка клинических лабораторных анализов / К. Хиггинс; Пер. с англ.., Под ред. Проф. В.Л. Эмануэля. М.: БИНОМ Лаборатория знаний 2004
Учебно-методическое пособие:
Каталог наборов реагентов для клинической биохимии «Vital diagnostics»
Стр.2 – АлАТ –Витал-01/11
Стр. 3 - АлАТ –Витал-04
Стр. 6 АсАТ –Витал-01/11
Стр. 7 - АсАТ –Витал-04
Стр.19. ЛДГ –Витал
Стр. 22 СК-МВ –Витал-04/14
